DB63 T 862-2009 实验室冬虫夏草真菌 中国被毛孢真菌分离技术规程.pdf
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1、ICS备案 号: 20481-2010青 海 省 地 方 标 准 DB63 DB63 DB63/T862 209实验室冬虫夏草真菌 -中国被毛孢 真菌分离技术规程 209-12-07发布 201-01-0实施青 海 省 质 量 技 术 监 督 局发布发布发布 发布 DB63/T862 2009 I 目 次前言 .II1范围 .12术语 .1 3分离 用培 养基 的制 备 .14冬虫 夏草 的采 收 .15冬虫 夏草 真菌 分离 的环 境要 求 .26冬虫 夏草 真菌 的分 离步 骤 .27分离 后的 培养 .28菌种 鉴定 .2 9分离 时的 注意 事项 .2 DB63/T862 2009 I
2、 前 言本规 程由 青海 省畜 牧兽 医科 学院 提出 并归 口。 本规 程由 青海 省畜 牧兽 医科 学院 草原 所负 责起 草。 本规 程起 草人 :李玉 玲、 刘欣 、马 少丽 、徐 海峰 、张 宗豪 。本规 程由 青海 省质 量技 术监 督局 批准 发布 。 DB63/T862 2009 1 实验室冬虫夏草真菌 -中国被毛孢真菌分离技术规程1范围 本规 程规 定了 实验 室冬 虫夏 草( Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.)的 收集 、分 离的 环境 条件 、分离 的设 备、 分离 技术 等冬 虫夏 草真 菌的 分离 技术 措施 。 本规 程适 用于 实验 室冬
3、 虫夏 草真 菌 中国 被毛 孢的 分离 。2术语2.1 中国 被毛 孢( HirsutellasinensisLiu,Guo,Yu&Zeng)指冬 虫夏 草的 无性 型。2.2分离 从冬 虫夏 草体 内分 离出 中国 被毛 孢的 过程 。2.3 消毒 是指 杀死 或消 除物 体表 面所 有病 原微 生物 的措 施。2.4灭菌 是指 用物 理或 化学 方法 将所 有致 病和 非致 病的 微生 物全 部杀 灭 的方 法。2.5 无菌 操作 指采 用经 过一 定消 毒措 施处 理之 后的 环境 、器 具及 人为 操作 的工 作方 式。2.6培养 基 是供 微生 物 、 植物 和动 物组 织生 长和
4、 维持 用的 人工 配制 的养 料, 一般 都含 有 碳水 化合 物 、含 氮物质、 无机 盐( 包括 微量 元素 )以 及 维生 素 和水 等。 有的 培养 基还 含有 抗菌 素 和 色素 。 3分离 用培 养基 的制 备3.1牛肉 汤的 制备先将 新鲜 牛肉 去除 筋和 脂肪 ,然 后取 1kg牛肉 加蒸 馏水 2kg放入 容器 内煮 沸, 煮沸 约 40min后将 肉渣滤 去, 肉水 经 121 、 0.1MPa高压 灭菌 30min后备 用。注: 煮沸 时应 边煮 边搅 动; 煮沸 前应 在容 器壁 上划 一刻 度, 煮沸 时随 时添 补蒸 馏水 。 3.2分离 用培 养基牛肉 汤 5
5、00ml、 牛 奶 200ml、 葡 萄 糖 30g、 琼 脂 18g、 水 解 乳蛋 白 5g、 酵 母 1g、 磷 酸 氢二 钾 1g、 核 糖 核酸 0.5g、硫 酸镁 0.2g、加 水定 容至 1000ml。3.3培养 基的 制备3.3.1量取 蒸馏水 300ml,按 上述 配方 加入 水解 乳蛋 、酵 母、 葡萄 糖、 磷酸 氢二 钾、 硫酸 镁、 核糖核酸 和琼 脂放 入容 器内 加热 煮沸 溶化 后备 用; DB63/T862 2009 2 3.3.2量取 牛奶 200ml加热 煮沸 后取 下备 用;3.3.3将上 述溶 液和 牛肉 汤共 同放 入容 器中 煮沸 后分 装于 试管
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