DB43 T 889-2014 饲料中巴氯芬的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、DB43/T 8892014湖南省地方标准DB43湖南省质量技术监督局 发 布ICS 65.12046B饲料中巴氯芬的测定High performance liquid chromatographic method高效液相色谱法Determination of Baclofen in feeds2014-08-10 实施2014-06-10 发布DB43/T 8892014 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂与材料 1 5 仪器与设备 2 6 采样与试样的制备 2 7 分析步骤 2 8 结果计算 3 9 灵敏度、准确度、精密度 3 附录A（资料性附录

2、） 饲料中巴氯芬高效液相色谱图 4 DB43/T 8892014 II 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009的规则编制。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所。 本标准主要起草人：易建希、武深树、陈福华、胡保国、肖安东、隆雪明、欧阳龙、魏群、何红艳、邓昉、周宇骏。 DB43/T 8892014 1 饲料中巴氯芬的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中巴氯芬高效液相色谱的测定方法。 本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中巴氯芬的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的

3、版本适应于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 采用稀酸溶液提取试样中含有的巴氯芬，混合型阳离子固相萃取柱净化，氨化甲醇溶液洗脱，高效液相色谱法紫外测定，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 甲醇 色谱纯。 4.2 乙腈 色谱纯。 4.3 磷酸 色谱纯。 4.4 偏磷酸。 4.5 氨水。 4.6 偏磷酸溶液：称取14.29g偏磷酸

4、用水溶解，并稀释至1L。 4.7 流动相：1mL磷酸用水稀释至1L，并按89：11的比例和乙睛混合，用前超声脱气5min。 4.8 氨水-甲醇溶液：将4mL氨水与96mL甲醇混合均匀，即得。 4.9 标准品：巴氯芬，纯度98%。 4.10 标准储备液的配制：精确称取巴氯芬标准品10mg （精确到 0.00001 g ），加适量甲醇超声溶解并用甲醇定容于50mL 容量瓶中。配制成浓度为0.2mg/mL的标准储备液。4以下避光可保存3个月。 4.11 标准工作曲线的配制：准确移取适量巴氯芬标准储备液，用流动相配成0.05g/mL、0.10g/mL、0.20g/mL、0.50g/mL、1.00g/m

5、L、2.00g/mL、5.00g/mL的标准工作曲线，现配现用。 4.12 微孔滤膜：0.22 m，有机膜。 4.13 混合型阳离子固相萃取柱：MCX（60 mg/3 mL），或相当者。 DB43/T 8892014 2 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 5.2 分析天平：感量 0.000 01g和 0.001 g。 5.3 固相萃取装置。 5.4 旋涡混匀器。 5.5 离心机：转速8000r/min。 5.6 超声波清洗机。 5.7 恒温振荡器。 5.8 氮吹仪。 6 采样与试样的制备 6.1 采样按GB/T 14699.1的规定执行。 6.2 试样

6、制备按GB/T 20195的规定执行。 7 分析步骤 7.1 提取 称取试样2g（精确到0.001g）, 置于100mL具塞锥形瓶中, 准确加入50.00mL偏磷酸溶液，室温下超声提取10min，振荡摇床120r/min，振荡20 min。静置分层，取上清液30mL,8000r/min离心5 min，取上清液供固相萃取净化。 7.2 净化 将固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化，准确移取5.00mL上述提取液过柱，分别用5mL水、5mL甲醇淋洗固相萃取柱，真空抽干。5mL氨水-甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液。整个固相萃取过程流速控制在1 mL/min。洗脱液于50下氮气吹干，准确移取1.00

7、 mL流动相溶解残留物，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供高效液相色谱分析。 7.3 测定 7.3.1 高效液相色谱条件 色谱柱：C18柱 (2504.6 mm，5m)，或相当者。 流速：1.0mL/min。 进样量：20L。 柱温：35。 检测波长：220nm。 7.3.2 高效液相色谱测定 取试样溶液和相应的标准工作溶液，作单点或者多点校准，以色谱图保留时间定性、峰面积积分值定量。标准工作液及试样液中巴氯芬的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。饲料中巴氯芬高效液相色谱图参见附录A，巴氯芬标准溶液高效液相色谱图参见附录A中图A.1、巴氯芬空白添加试样溶液高DB43/T 8892014 3

8、效液相色谱图参见附录A中图A.2。 7.3.3 空白试验 除不加试料外，采用上述相同步骤操作。 8 结果计算 样品中巴氯芬的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得： CsAnVXAsm= X试样中巴氯芬含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A试样溶液中巴氯芬的峰面积； As标准工作液中巴氯芬的峰面积； Cs标准工作液中巴氯芬的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； n样品的稀释倍数； m试样的质量，单位为克（g）。 计算结果需扣除空白值，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 巴氯芬在饲料

9、中的定量限为0.5mg/kg。 9.2 准确度 本方法在（0.510.0）mg/kg添加浓度的回收率为（70110）%。 9.3 精密度 本方法的批内变异系数10%，批间变异系数15%。 DB43/T 8892014 4 附录A （资料性附录） 饲料中巴氯芬高效液相色谱图 图A.1 巴氯芬标准溶液（0.2mg/L）高效液相色谱图 图A.2 巴氯芬空白添加试样溶液（1.0 mg/kg）高效液相色谱图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min -1 0 1 2 3 4 5 mV Detector A:220nm Baclofen 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min -1 0 1 2 3 4 5 mV Detector A:220nm Baclofen