DB15 T 4168-2025 奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程.pdf

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1、 ICS 65.020.30 CCS B 40 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 41682025 奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程 Code of practice for superovulation and embryo transfer of dairy sheep 2025-08-15 发布2025-09-15 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 41682025 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自

2、治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古大学、内蒙古乌兰察布市畜牧工作站、河套学院、蒙天然牧业科技发展有限公司、内蒙古丰东知盈牧业科技有限公司。本文件主要起草人：王申元、张立、张立果、苏小虎、董志岷、郑重、张滕、张功、刘永斌、刘光男、萨仁格勒、苏广华、朱怡静、寇慧娟、刘信、刘建宁、刘权、周扬。DB15/T 41682025 1 奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术规程 1 范围 本文件规定了奶绵羊超数排卵-胚胎移植技术实施过程中供体羊的选择与饲养管理、种公羊的选择与饲养管理、供体羊的同期发情、超数排卵及人工授精、奶绵羊胚胎收集与质量鉴定、胚胎移植等技

3、术要求。本文件适用于奶绵羊胚胎生产时的超数排卵及胚胎移植。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1571 羊胚胎移植技术规程 DB15/T 2042 肉羊同期发情与人工授精技术规程 DB15/T 3401 奶绵羊胚胎冷冻解冻技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。奶绵羊 dairy sheep 以产奶为主要生产方向的绵羊品种。超数排卵 superovulation 利用外源性促性腺激素诱发动物卵巢的多个卵泡

4、同时发育，并排出超出自然几倍到几十倍具有受精能力的卵子的过程，简称超排。胚胎移植 embryo transfer 将胚胎生产中获得的早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同或相近的其他雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。4 供体羊的选择与饲养管理 DB15/T 41682025 2 供体羊的选择 应符合以下全部条件：a)符合品种标准；b)产奶性能优良、繁殖性能好、遗传性能稳定、谱系清楚；c)体质健壮、无流产史、无传染性和生殖系统疾病；d)年龄在 1 周岁到 5 周岁之间为宜,繁殖母羊产羔后有两次以上正常发情记录。供体羊的饲养管理 按照如下要求执行：a)饲养环境良好，避免应激反应发生；b)合理

5、的日粮配方、充足的清洁饮水、足够的运动空间；c)超排前 1 个月开始提高供体羊能量和蛋白供给，适当补充青绿饲料、维生素和微量元素等；d)超排前 1 个月完成相关传染病的检疫、防疫及体内外驱虫等工作。5 种公羊的选择与饲养管理 种公羊的选择 应符合以下全部条件：a)符合该品种种公羊的体型外貌，具有明显的品种特征，系谱完整清楚；b)体质健壮、生殖器官正常、精子活力正常，无传染和生殖系统疾病；c)年龄在 1.5 周岁到 6 周岁之间为宜。种公羊饲养管理 按照如下要求执行：a)增加优质蛋白饲料补充，适当提高种公羊专用精料日粮，添加胡萝卜、生鸡蛋及足量的优质青干草和苜蓿；b)加强公羊运动，每天早晚驱赶其

6、运动不应少于 2 h；c)种公羊在供体羊放栓到超排起针期前完成 12 次的排精；6 供体羊的同期发情、超数排卵及人工授精 药品 PG（氯前列烯醇）、CIDR（孕激素阴道缓释装置）、PMSG（孕马血清促性腺激素）、FSH（促卵泡生成素/卵泡刺激素）、LH（促黄体生成素）、GnRH（促性腺激素释放激素）。供体同期 6.2.1 自然发情或 PG 同期 以自然发情或PG注射后的发情日为第0 d。6.2.2 CIDR 同期 任意一天放入CIDR，记为第0 d。DB15/T 41682025 3 超数排卵 6.3.1 超数排卵方法 6.3.1.1 自然发情或 PG 同期法 供体母羊发情之日做为发情周期的第

7、0 d，在发情周期的第12 d13 d开始，每天早晚各注射1次FSH，间隔12 h，连续3 d，递减注射，在注射第6针FSH时同时注射PG 0.15 mg（具体方案见附录A中表A.1）。6.3.1.2 孕激素 CIDR 法 供体母羊在放入CIDR之日计为第0 d，在放入CIDR的第10 d开始超排，每天早晚各注射1次FSH，间隔12 h，连续3 d，递减注射；注射第1针FSH时PMSG 200 IU300 IU；注射第5针FSH同时肌注PG 0.15 mg；在注射第6针FSH时，取出CIDR（具体方案按照附录A中的表A.1执行）。6.3.2 供体羊发情鉴定 放栓时观察供体羊发情情况，发情供体羊

8、采用6.3.1.1超排方法，未发情供体羊采用6.3.1.2超排方法，发情鉴定按照NY/T 1571相关要求执行。人工授精 6.4.1 采精及精液检测 按照DB15/T 2042相关要求执行。6.4.2 输精 6.4.2.1 常规人工输精 撤栓后24 h和36 h各输精一次，操作方法按照NY/T 1571相关要求执行。6.4.2.2 腹腔内窥镜输精 供体羊在撤栓后36 h38 h定时输精。输精前24 h禁食、禁水，腹腔内窥镜及输精器械等提前用0.1%新洁尔灭液浸泡消毒。将待输精供体羊麻醉、仰卧倒立保定，角度为4060，输精部位剃毛、消毒，输精时呈；腹腔内窥镜的套管穿刺针在供体羊羊腹部乳房下腹中线

9、两侧3 cm5 cm处的位置分别插入，然后通过套管分别放入腹腔镜冷光源和输精枪，在两侧子宫角前1/3处进行输精，每侧子宫角输精剂量0.1 mL0.2 mL、有效精子数3107个的鲜精或1.5107个的冻精。7 奶绵羊胚胎收集与质量鉴定 手术冲胚 术前、手术准备同6.4.2.2，手术部位同6.4.2.2或按照NY/T 1571；冲胚时子宫角端用7号输液针头连接软管或20 G静脉留置针；胚胎收集用12 mm表面皿或90 mm平皿，其他物品及冲胚流程按照NY/T 1571相关要求执行。检胚 DB15/T 41682025 4 无菌10 mL注射器吸取胚胎保存液，用0.22 m滤器过滤后注入35 mm

10、培养皿2 mL，放恒温台上预热；胚胎收集液平皿在体视显微镜下检出胚胎，用移液器或捡胚管将胚胎移入预热的35 mm培养皿中；每个平皿在体视显微镜下重复检查23次。胚胎质量鉴定及记录 按照附录 B 中的表 B.1 做好采胚记录。胚胎质量鉴定及胚胎冷冻按照 DB15/T 3401 相关要求执行。8 胚胎移植 受体羊的选择及饲养管理 8.1.1 受体羊的选择 选择健康、中等膘情以上、繁殖机能正常，且经济价值较低的母羊作为受体羊。8.1.2 受体羊的饲养管理 按照如下要求执行：a)单独组群、编号、饲养，保持环境相对稳定，避免应激反应；b)移植前 1 个月，注射 VADE 针剂，补充微量元素，如硒、锌等；

11、c)移植前 1 个月开始补饲，使其保持中等体况，以满足妊娠需要；d)移植前 1 个月受体羊已完成检疫、防疫和驱虫等工作。8.1.3 受体同期发情及鉴定 受体羊放入孕酮海绵栓记为第 0 d，第 10 d12 d 任意一天即供体羊第 5 针 FSH 时撤栓，并肌注PMSG 250 IU330 IU，不必观察发情，移植时卵巢有黄体定性为发情羊并移植。8.1.4 胚胎发育期与受体移植时间的对应关系 胚胎发育期与受体移植时间的对应关系按照附录 C 中的表 C.1 执行。8.1.5 移植方法 8.1.5.1 手术法移植 在受体羊卵巢有黄体侧输卵管或子宫角进行胚胎移植，术前、手术准备及手术部位同 7.1，移

12、植流程按照 NY/T 1571 相关要求执行。移植记录表按照附录 D 中的表 D.1 执行。8.1.5.2 腹腔内窥镜移植 在受体羊卵巢有黄体侧子宫角进行胚胎移植，术前、手术准备及手术部位同6.4.2.2。一侧通过套管放入冷光源，另一侧手术刀片刺入切开0.5 cm1 cm小孔插入子宫钳，牵出子宫角，子宫角前1/3处移植胚胎。移植记录表见附录D中表D.1。DB15/T 41682025 5 A A 附录A （规范性）奶绵羊超数排卵方案 奶绵羊超数排卵方案见表A.1。表A.1 奶绵羊超数排卵方案 发情周期 天数（d）自然发情/PG 13 14 15 16 17 CIDR 10 11 12 13 1

13、4 时间 早 FSHPMSG FSH FSHPG 发情、LH/GnRH 发情、AI 晚 FSH FSH FSH撤栓PG 发情、AI 注1：AI表示人工授精；500 IU FSH用10 mL或20 mL生理盐水或专用稀释液稀释，200 IU LH用2 mL生理盐水稀释，100 g GnRH用5 mL生理盐水稀释；注2：1周岁中等膘情以上供体羊FSH总剂量270 IU左右为宜，即：起针第1 d 65 IU+65 IU，第2 d 45 IU+45 IU，第3 d 25 IU+25 IU；2周岁经产供体羊FSH总剂量300 IU330 IU 为宜,每d注射剂量在上述剂量的基础上增加10 IU20 IU

14、根据供体羊年龄和体重增加及经产与否适度增加FSH剂量，总剂量不超过400 IU为宜；注3：孕激素CIDR同期在第5次注射FSH同时肌肉注射PG 0.15 mg；自然发情/PG同期在第6次注射FSH同时注射PG 0.15 mg；注4：撤栓12 h注射GnRH 25 g或撤栓24 h注射LH 100 IU,自然发情/PG同期供体羊若FSH未注射完供体羊已发情，应停止注射FSH，并于12 h后开始配种；注5：常规输精于撤栓后24 h和36 h各输精一次，腹腔内窥镜输精在撤栓后36 h38 h输精一次即可。DB15/T 41682025 6 B B 附录B （规范性）供体羊胚胎生产记录 供体羊胚胎生

15、产记录见表B.1。表B.1 供体羊胚胎生产记录表 日 期 生产地 供体羊号 年龄 与配公羊号 年龄 同期方式 FSH（产地）冲胚部位 冲胚总数 可用胚数 胚胎数量 阶段 级别 移植/冷冻 备注 冲胚人检胚人验收人注：2-8细胞（2C、4C、8C）桑椹A级（M1）、紧缩桑椹A级（CM1）、早囊A级（EB1）、囊胚（B）、扩张囊胚（EXB）、桑椹B级（M2）、紧缩桑椹B级（CM2）、早囊B级（EB2）。DB15/T 41682025 7 C C 附录C （规范性）胚胎发育期与受体移植时间的对应关系 胚胎发育期与受体移植时间的对应关系见表C.1。表C.1 胚胎发育期与受体移植时间的对应关系 胚胎发育期 受体移植时间（发情之时为 0 d）28 细胞胚 60 h72 h 桑椹胚（M)5.5 d0.5 d 早期囊胚（EB）6.0 d0.5 d 囊胚（B）6.5 d0.5 d 扩张囊胚（EXB）7.0 d0.5 d DB15/T 41682025 8 D D 附录D （规范性）移植记录 移植记录见表D.1。表D.1 移植记录表 日 期 地 点 鲜胚/冻胚 序 号 受体耳号 供体耳号 种公羊号 胚 龄 胚 数 黄 体 移植人 左 右