[考研类试卷]研究生入学考试生物化学（蛋白质）历年真题试卷汇编7及答案与解析.doc

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1、研究生入学考试生物化学（蛋白质）历年真题试卷汇编 7 及答案与解析一、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。1 (南京师范大学 2008 年考研试题)应用 SDS-聚丙酰胺凝胶电泳测定具有四级结构蛋白质时，所测得的分子质量应为( )。（A）蛋白质分子量（B）蛋白质亚基分子量（C）蛋白质结构域分子量（D）蛋白质相对应的 DNA 分子量2 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)稳定蛋白质一级结构的主要作用力是( )。（A）氢键（B）疏水键（C）酰胺键（D）配位键3 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)构成蛋白质的氨基酸中，R 侧链在生理条件带正

2、电荷的氨基酸是( ) 。（A）赖氨酸（B）蛋氨酸（C）亮氨酸（D）谷氨酸4 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)蛋白质超二级结构的模式是( )。（A） 螺旋（B） 组合（C） 组合（D） 折叠5 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)依据蛋白质分子表面疏水性不同而采用的分离方法是( ) 。（A）凝胶过滤（B）反相层析（C）层析聚焦（D）离子交换层析6 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)胰蛋白酶对肽链的水解位点是( )。（A）谷氨酸残基的羧基所形成的肽键（B）赖氨酸残基的羧基所形成的肽键（C）谷氨酸残基的氨基所形成的肽键（D）赖氨酸残基的氨基所形成的肽键7 (沈阳药科大学 2006 年考研

3、试题)不用于蛋白质定量分析的方法是( )。（A）茚三酮反应（B）双缩脲反应（C）酚试剂反应（D）260nm 吸收8 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)多肽链 螺旋的螺距是( )。（A）28nm（B） 04nm（C） 054nm（D）015nm9 (西北大学 2004 年考研试题)可以使多肽链的 螺旋中断的氨基酸是( )。（A）His（B） Pro（C） Asp（D）Arg（E）Thr10 (西北大学 2004 年考研试题)血红蛋白的辅基是( )。（A）血红素 A（B）铁原卟啉 VI（C）铁原卟啉 IX（D）铁原卟啉 X（E）铁原卟啉 V11 (西北大学 2004 年考研试题)分离含有二硫键

4、的肽段可以用( )。（A）SDSPAGE 电泳（B）对角线电泳（C）琼脂糖电泳（D）Western BloWing（E）上述技术都不可以12 (西北大学 2004 年考研试题)下列蛋白中不是结合蛋白的是( )。（A）黏蛋白（B）细胞色素 c（C）血红蛋白（D）清蛋白（E）脱氢酶13 (西北大学 2004 年考研试题)通过凯氏定氮法测得某样品的总蛋白氮为 15g，则该样品含有的蛋白质为( )。（A）2814g（B） 1856g（C） 1407g（D）938g（E）696g14 (西北大学 2004 年考研试题)用于氨基酸序列分析仪测定氨基酸序列所用的主要试剂是( ) 。（A）DNS（B） DNF

5、B（C） DMSO（D）PITC（E）氨肽酶15 (浙江工业大学 2006 年考研试题)在 pH70 时，下列哪种氨基酸带正电荷 ?( )（A）Glu（B） Pro（C） His（D）Thr16 (浙江工业大学 2006 年考研试题)组成谷胱甘肽的氨基酸是( )。（A）Gin、Cys 和 Gly（B） Glu、Cys 和 Gly（C） Gin 和 Gly（D）Gin 和 Cys17 (浙江工业大学 2006 年考研试题)疯牛病的致病因子是一种( )。（A）mRNA（B）蛋白质（C） rRNA（D）hnRNA（E）核酸18 (浙江工业大学 2006 年考研试题)以下氨基酸中哪一种为二氨基一羧基氨

6、基酸?( )（A）Leu（B） Glu（C） Gly（D）Pro（E）Lys19 (浙江工业大学 2006 年考研试题)一个六肽的结构是 Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp，下列关于该肽的陈述哪一种是错误的?( )（A）该肽在 pH 12 的条件下向正极迁移（B）该肽在 pH 3 的条件下向负极迁移（C）该肽在 pH 11 的条件下向负极迁移（D）该肽在 pH 5 的条件下向负极迁移20 (浙江工业大学 2006 年考研试题)下列关于蛋白质结构的叙述，哪些是正确的?( )（A）二硫键对稳定蛋白质的构象起重要作用（B）蛋白质的一级结构决定高级结构（C）氨基酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分

7、子的内部（D）氢键是维持高级结构的主要作用力（E）当蛋白质放入水中时，带电荷的氨基酸侧链趋向于排列在分子的外面21 (浙江工业大学 2006 年考研试题)下列哪些是必需氨基酸?( )（A）Thr（B） Phe（C） Met（D）Tyr（E）Leu二、填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。22 (西北大学 2004 年考研试题)对紫外区光线有吸收的氨基酸残基是_、_、_。23 (浙江工业大学 2006 年考研试题)_和_是相对分子质量小且含羟基的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中形成内部氢键。24 从生化代谢途径来看，脚气病和汞中毒的作用位点都是_复合体。25 线粒体 ATPADP 转

8、位酶(ATPADPtranslocase) 在细胞中的作用是_。26 高等动物体内，糖的贮存形式是_。27 进行逆转录反应的引物可根据实验的具体情况选择。一般有三种，分别是Oligo(dT)、基因特异引物和_。28 自然界中的氮(N 2)是以 _的形式固定下来而进入生物分子。29 代谢途径有线性的、分支的和环形的。一般说来，分解代谢途径呈_，合成代谢途径呈_。30 _是人体维持血糖稳定的最重要器官。31 长时间饥饿时，脑细胞会转向利用_提供能量。32 脂肪酸合成的限速步骤是_。33 在 20 种标准氨基酸中，异亮氨酸(Ile)和_都含两个手性碳原子。34 角蛋白的二级结构是 螺旋(-helix

9、)，胶原蛋白的二级结构是_。35 从广东到西藏，人体内的_浓度升高，导致 Hb 与氧的亲和力下降。36 羧肽酶不能水解的肽，其 C 末端可能是 Pro 或 Arg 或 Lys，另一种可能性是_。37 蛋白在体内的折叠需要分子伴侣、二硫键异构酶(PDI)和_。38 粗肌丝的肌球蛋白分子头部有_结合位点和肌动蛋白结合位点。39 抑制剂的浓度增加使测得的 Km 值增加和 Vmax 减小，则属于_。40 纤维素中的 D-葡萄糖单体通过 (14) 糖苷键连接，而淀粉中 D-葡萄糖单体通过_连接。41 有些磷脂和糖脂的骨架不是甘油而是_，因此它们又被称为鞘脂。42 水通道蛋白以四聚体形式存在，这个四聚体中

10、包含_个水通道。43 激酶是一类有_参与，催化磷酸化的反应。44 RNA 干扰能触发与短 dsRNA 中任何一链互补的 mRNA 的_。45 氯霉素可抑制_酶的活性，从而抑制蛋白质的合成。46 调控转录的各种蛋白因子总称为_。47 氨酰 tRNA 合成酶既能识别 tRNA，也能识别相应的_。48 真核生物的蛋白因子与 DNA 相互作用的基元主要有_和_。49 rRNA 前体的加工主要包括核苷酸链的水解切除和_。50 反转录酶可催化 cDNA 合成、水解模板 RNA 和_。51 DNA 复制时，引发前体和引发酶构成_。52 (武汉大学 2005 年考研试题：)净电荷的差异是 Native-PAG

11、E 分离蛋白质基础。（A）正确（B）错误53 (武汉大学 2005 年考研试题)在球状蛋白质中，-转角几乎总是出现在蛋白质的表面。（A）正确（B）错误54 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)稳定蛋白质二级结构的次级键是疏水键、氢键、盐键等。（A）正确（B）错误55 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)蛋白质肽链的基本结构单位为 L 一氨基酸残基。（A）正确（B）错误56 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)单克隆抗体是由抗原的同一个抗原决定簇刺激机体产生的。（A）正确（B）错误57 (浙江工业大学 2006 年考研试题)双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，但二肽没有双缩脲反应。（A）正确

12、（B）错误58 (浙江工业大学 2006 年考研试题)完全由非必需氨基酸组成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同时给予，可以维持氮平衡。（A）正确（B）错误59 甲硫氨酸(Methionine) 含有一个活泼甲基，因此，是机体甲基化反应中甲基的主要直接供体。（A）正确（B）错误60 葡萄糖对乳糖操纵子的转录活性起激活作用（A）正确（B）错误61 用分光光度法测定核酸浓度时，1OD 260 表示所有待测核酸浓度为 50gmL。（A）正确（B）错误62 胞浆的 NADH 能通过线粒体内膜进入线粒体，然后被氧化产能。（A）正确（B）错误63 糖酵解途径的限速酶是磷酸果糖激酶-1，它的最强激活剂是产物果糖-

13、1，6-双磷酸。（A）正确（B）错误64 人体 HDL 水平升高有助于防止动脉粥样硬化症。（A）正确（B）错误65 PCR 反应的原理是模拟生物的 DNA 半保留复制过程。（A）正确（B）错误66 精氨酸是一氧化氮生物合成的前体。（A）正确（B）错误67 目前的进化理论认为，线粒体和叶绿体都起源于内共生细菌。（A）正确（B）错误68 对试验大鼠注射解偶联剂，如 DNP 时，可能会引起体温升高。（A）正确（B）错误69 牛海绵状脑病(疯牛病)、羊瘙痒病等传染性疾病的主要病因是被称为朊病毒(prion)的蛋白非正常折叠所致。（A）正确（B）错误70 二级主动运输消耗的能量直接来自于另一被运输物质的

14、浓度梯度。（A）正确（B）错误71 构成乙酰胆碱受体离子通道的 、 和 亚基属于同源蛋白。（A）正确（B）错误72 生物大分子在与配体结合行使功能的过程中，其构象是动态的。（A）正确（B）错误73 离子泵维持细胞膜两侧离子浓度梯度，而离子通道则消除离子浓度梯度。（A）正确（B）错误74 因为蛋白中的氨基酸是 L 构型，所以 -helix 是右手螺旋。（A）正确（B）错误75 氢键是推动蛋白质折叠的最主要积极因素。（A）正确（B）错误76 巯基乙醇对红细胞定型试剂的灭活是指其破坏了 IgM 的可变区(V) 结构。（A）正确（B）错误77 丝氨酸蛋白水解酶在催化蛋白水解的过程中，Ser 的侧链基团

15、既是酸又是碱。（A）正确（B）错误78 生物物种随基因组增大，独特基因减少，家族基因增多。（A）正确（B）错误79 每种类型的无义密码子都被带有突变反密码子的 tRNA 抑制。（A）正确（B）错误80 酶可以降低生化反应的活化能，因此可以改变反应的平衡常数。（A）正确（B）错误81 tRNA 一般具有一柄三环，其空间结构呈“三叶草”型。（A）正确（B）错误82 转录时，RNA 聚合酶的前端产生负超螺旋，以增强一些启动子的效率。（A）正确（B）错误83 被终止的 RNA 聚合酶可通过剪切 RNA 转录物产生新的 3端来重新开始转录。（A）正确（B）错误84 相对于启动子的位置，CRP(cAMP

16、受体蛋白) 的结合位点是可变的。（A）正确（B）错误85 蛋白合成时，核糖体沿着 mRNA 的 3至 5方向移动。（A）正确（B）错误86 细胞器基因组都是环状 DNA 分子。（A）正确（B）错误87 rDNA 基因簇中的基因都具有完全相同的序列。（A）正确（B）错误88 小鼠基因组的中性位点的年替换率大于人类的基因组。（A）正确（B）错误89 为什么说化学渗透学说是二十世纪最伟大的统一理论之一?90 核酸的合成对于细胞正常的生长是非常重要的。核苷酸是核酸合成的原料。请问在各种核苷酸的合成代谢过程中，细胞如何调节不同核苷酸之间量的平衡?91 在基因工程中，为了从宿主细胞分离获得外源基因的产物，

17、需要根据目的蛋白的特性采用相应的技术。列出 5 种常用蛋白质分离纯化技术，并说明它们分别根据蛋白质的什么特性。92 有一蛋白质粗提液，已知其包含的蛋白成分及其某些性质如下表，请简要写出纯化 -半乳糖普酶的合理实验步骤。93 蛋白质(如天然酶、抗体酶)、核酸(如 RNA 核酶)、多糖(如人工酶环糊精)和某些脂类分子集合都可以高效地催化化学反应。从酶这个角度看，这些具有明显区别的概念或对象的共同机制是什么?94 以 G-蛋白偶联受体、G-蛋白与腺苷酸环化酶的作用为例，描述细胞信号转导的基本途径和产生细胞应答的机制。95 简述生物物种保持稳定的分子基础。96 已知真核生物的核糖体由 4 种 rRNA

18、 和 80 多种不同的核糖体蛋白组成，为什么真核生物细胞内 rRNA 的基因拷贝数远多于核糖体蛋白的基因?97 简述原核生物与真核生物基因表达调控的主要特点。研究生入学考试生物化学（蛋白质）历年真题试卷汇编 7 答案与解析一、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。1 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质2 【正确答案】 C【知识模块】 蛋白质3 【正确答案】 A【知识模块】 蛋白质4 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质5 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质6 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质7 【正确答案】 D【知识模块】 蛋白质8

19、【正确答案】 C【知识模块】 蛋白质9 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质10 【正确答案】 C【知识模块】 蛋白质11 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质12 【正确答案】 D【知识模块】 蛋白质13 【正确答案】 D【知识模块】 蛋白质14 【正确答案】 D【知识模块】 蛋白质15 【正确答案】 C【知识模块】 蛋白质16 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质17 【正确答案】 B【知识模块】 蛋白质18 【正确答案】 E【知识模块】 蛋白质19 【正确答案】 C【知识模块】 蛋白质20 【正确答案】 A,B,E【知识模块】 蛋白质21 【正确答案】 A,B,C,E【知识模块】 蛋白质

20、二、填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。22 【正确答案】 酪氨酸 苯丙氨酸 色氨酸【知识模块】 蛋白质23 【正确答案】 Ser Thr【知识模块】 蛋白质24 【正确答案】 丙酮酸脱氢酶25 【正确答案】 将 ADP 输入内膜，将 ATP 输出内膜26 【正确答案】 糖元27 【正确答案】 随机六聚体引物28 【正确答案】 NH 329 【正确答案】 分支的或环形的 线性的30 【正确答案】 肝脏31 【正确答案】 酮体32 【正确答案】 在乙酰 COA 羧化酶作用下将乙酰 COA 转变成丙二酰 COA33 【正确答案】 Thr34 【正确答案】 三股螺旋35 【正确答案】

21、2,3-二磷酸甘油酸36 【正确答案】 环肽37 【正确答案】 肽基脯氨酰异构酶38 【正确答案】 ATP39 【正确答案】 竞争与非竞争性抑制的混合抑制40 【正确答案】 一(1 ， 4)糖苷键41 【正确答案】 鞘氨醇42 【正确答案】 843 【正确答案】 ATP44 【正确答案】 降解45 【正确答案】 肽酰转移46 【正确答案】 反式作用因子47 【正确答案】 氨基酸48 【正确答案】 亮氨酸拉链 锌指结构49 【正确答案】 甲基化50 【正确答案】 DNA-pol 活性51 【正确答案】 引发复合体52 【正确答案】 A【知识模块】 蛋白质53 【正确答案】 A【知识模块】 蛋白质

22、54 【正确答案】 B【试题解析】 稳定蛋白质二级结构的次级键是氢键。【知识模块】 蛋白质55 【正确答案】 B【试题解析】 蛋白质肽链的基本结构单位大多是 L- 一氨基酸残基，但也有的是D-氨基酸残基。【知识模块】 蛋白质56 【正确答案】 B【试题解析】 单克隆抗体是针对一个抗原决定簇、又是由单一的 B 淋巴细胞克隆产生的抗体。【知识模块】 蛋白质57 【正确答案】 A【知识模块】 蛋白质58 【正确答案】 B【试题解析】 完全由必需氨基酸组成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同时给予，可以维持氮甲衡。【知识模块】 蛋白质59 【正确答案】 B【试题解析】 S-腺苷甲硫氨酸由 L-甲硫氨酸和 A

23、TP 经 S-腺苷甲硫氨酸合成酶催化合成，含有一个活化了的甲基，因此，是机体甲基化反应中甲基的主要直接供体，而不是甲硫氨酸。60 【正确答案】 B【试题解析】 乳糖操纵子的完全表达需要 CAP-cAMP 参与，cAMP(环磷酸腺苷)可促进 CAP(代谢物基因活化蛋白 )与启动子结合。环境中葡萄糖存在时，使 cAMP浓度降低，所以葡萄糖对乳糖操纵子的表达有抑制作用。61 【正确答案】 B【试题解析】 用分光光度法测定核酸浓度时，1 OD 260 表示待测核酸浓度时，DNA的浓度为 50ggmL，RNA 的浓度为 40gmL，寡核苷酸的浓度为 30gmL。62 【正确答案】 B【试题解析】 胞浆的

24、 NADH 不能自由通过线粒体内膜进入线粒体，必须通过穿梭作用才能进入线粒体然后被氧化产能，包括磷酸甘油穿梭作用和苹果酸-天冬氨酸穿梭怍用。63 【正确答案】 B【试题解析】 糖酵解途径的限速酶是磷酸果糖激酶-1，它的最强激活剂是产物果糖一 2，6 一双磷酸。64 【正确答案】 A65 【正确答案】 A66 【正确答案】 A67 【正确答案】 A68 【正确答案】 A69 【正确答案】 A70 【正确答案】 B【试题解析】 二级主动运输消耗的能量直接来自于一级主动运输所产生的自由能梯度，而不是浓度梯度。71 【正确答案】 B【试题解析】 同源蛋白是在不同生物体内行使相同或相似功能的蛋白质。构成

25、乙酰胆碱受体离子通道的 、 、 和 亚基虽然同源性很高，但不属于同源蛋白。72 【正确答案】 A73 【正确答案】 A74 【正确答案】 B【试题解析】 因为右手螺旋比左手螺旋稳定，蛋白质中大多数 -helix 是右手螺旋，但也存在左手螺旋。75 【正确答案】 B【试题解析】 推动蛋白质折叠的最主要积极因素是疏水作用力。76 【正确答案】 A77 【正确答案】 B【试题解析】 丝氨酸蛋白水解酶在催化蛋白水解的过程中，Ser 的侧链基团是作为进攻的亲核基团。78 【正确答案】 B【试题解析】 基因组大小是由于基因组各种重复序列在扩增、缺失和分化过程中所致的数量差异造成的。生物物种随基因组增大，基

26、因组各种重复序列增加，但仍属同一基因家族，并非家族基因增加。独特基因数量的变化与基因组大小的变化无关。79 【正确答案】 B【试题解析】 不是每种类型的无义密码子都被带有突变反密码子的 tRNA 抑制，每种抑制 tRNA 一般都只识别 UAG 终止密码子。80 【正确答案】 B【试题解析】 反应的活化能与反应速度有关，酶可以降低生化反应的活化能，从而增加反应速度；但反应的平衡常数与反应体系的自由能变化有关，与活化能无关，酶不能改变反应的平衡常数。81 【正确答案】 B【试题解析】 tRNA 一般具有一柄三环，其二级结构呈 “三叶草”型，而其空间结构通过折叠形成倒 L 形。82 【正确答案】 B

27、【试题解析】 转录时，在 RNA 聚合酶的前端产生正超螺旋，后端形成负超螺旋，以增强一些启动子的效率。83 【正确答案】 A84 【正确答案】 A85 【正确答案】 B【试题解析】 蛋白合成时，核糖体沿着 mRNA 的 5至 3方向移动。86 【正确答案】 B【试题解析】 大多数细胞器基因组都是环状 DNA 分子，但也有少数低等真核生物的线粒体基因组是线状 DNA 分子。87 【正确答案】 B【试题解析】 rDNA 基因簇中，只有各重复单位的基因具有完全相同的序列。88 【正确答案】 B【试题解析】 小鼠基因组的中性位点的年替换率与人类的基因组基本上是相同的。89 【正确答案】 化学渗透学说假

28、设能量转换和偶联机构具有以下特点：由磷脂和蛋白多肽构成的膜对离子和质子具有选择性；具有氧化还原电位的电子传递体不匀称地嵌合在膜内；膜上有偶联电子传递的质子转移系统； 膜上有转移质子的 ATP 酶。当氧化进行时，呼吸链起质子泵作用，质子被泵出线粒体内膜之外侧(膜间隙)，造成了膜内外两侧间跨膜的电化学势差，光合电子传递链的电子传递会伴随膜内外两侧产生质子动力，并由质子动力推动 ATP 的合成。化学渗透假说将膜电位差和能量的产生联系起来，将线粒体内膜中电子传递、质子动势的建立、ADP 磷酸化的关系统一在一起，很好地解释了氧化磷酸化和光合磷酸化及其他能量转化的作用机制。因此说，化学渗透学是 20 世纪

29、最伟大的统一理论之一。90 【正确答案】 嘌呤核苷酸生物合成的调节：嘌呤核苷酸的从头合成受其两个终产物腺苷酸和鸟苷酸的反馈控制。主要控制点有三个。第一个控制点在合成途径的第一步反应，即氨基被转移到 5 一磷酸核糖焦磷酸上以形成 5 一磷酸核糖胺。催化该反应的酶是一种变构酶，它可被终产物 AMP 和 GMP 所抑制。因此，无论是AMP 或是 GMP 的过量积累均会导致有 PRPP 开始的合成途径第一步反应的抑制。另两个控制点分别位于次黄苷酸后分枝途径的第一步反应，这就使得 GMP 过量的变构效应仅抑制其自身的形成，而不影响 AMP 的形成。反之，AMP 的积累抑制其自身的形成，而不影响 GMP

30、的生物合成。大肠杆菌中嘌呤核苷酸生物合成的反馈控制机制如图附录 9-1 所示，不同生物的调节方式略有不同。 嘧啶核苷酸生物合成的调节：大肠杆菌中嘧啶核苷酸的生物合成可在三个控制点上受到终产物的反馈控制。合成途径的第一个调节酶是氨甲酰磷酸合成酶，它受 UMP 的反馈抑制。另两个调节酶是天冬氨酸转氨甲酰酶和 CTP 合成酶，它们受 CTP 的反馈抑制。前者被抑制将影响鸟苷酸和胞苷酸的合成；后者只与胞苷酸的合成有关。嘧啶核苷酸生物合成的调节机制如图附录 9-2 所示。91 【正确答案】 以下是五种常用的蛋白质分离纯化技术。 (1)根据分子大小不同的纯化方法。 1)透析：利用蛋白质分子不能透过半透膜的

31、性质，使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖等分开。 超过滤：是利用压力或离心力，强行使水和其他小分子溶质通过半透膜，而蛋白质被截留在膜上，以达到浓缩和脱盐的目的。 2)密度梯度 (区带 )离心：蛋白质颗粒的沉降不仅决定于它的大小，也决定于它的密度，如果蛋白质颗粒在具有密度梯度的介质中离心时，质量、密度大的颗粒比质量、密度小的颗粒沉降得快，并且每种蛋白质颗粒沉降到与自身密度相等的介质密度梯度时即停滞不前，最后各种蛋白质在离心管中被分离成各自独立的区带。 3)凝胶过滤：当不同分子大小的蛋白质流经凝胶层析时，比凝胶珠孔径大的分子不能进入珠内网状结构，即被排阻在凝胶珠之外。随着溶剂在凝胶珠之间的孔隙

32、向下移动并最先流出柱外；比网孔径小的分子能不同程度地自由出入凝胶珠的内外。这样由于不同大小的分子所经的路径不同而得到分离，大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。 (2)利用溶解度差别的纯化方法。 1)等电点沉淀：蛋白质是带正电荷和负电荷基团的两性电解质，蛋白质分子的电荷性质和数量则因 pH 不同而变化。蛋白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉淀，其溶解度达到最低点，不同的蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时溶解度最低的原理，可以把蛋白质混合物分开。 2)盐析法：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐(以(NH 4)2SO4 为最佳)，使水活度降

33、低，原来溶液中的大部分甚至是全部的水转变成盐离子的水化水，从而使蛋白质水化层被破坏，疏水表面暴露，由于疏水作用蛋白质聚集而沉淀。 3)有机溶剂分级分离法：向蛋白质溶液中加入一定量的极性有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮)，引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数，而增加带电质点的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝集而沉淀。(3)根据电荷不同的纯化方法 1)电泳：根据蛋白质在一定的 PH 溶液中所带电荷，成为带电颗粒，在电场中向相反的电极方向泳动，进行蛋白质的分离。由于蛋白质的质量和电荷量不同，其在电场中的泳动率也不同，从而将蛋白质分离成泳动速率快慢不等的条带。 2)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)圆盘电泳：以聚

34、丙烯酰胺凝胶为支持物，有 3 种物理效应：样品的浓度效应；凝胶对被分离分子的筛选效应(颗粒小的移动快，颗粒大的移动慢)；一般电泳分离的电荷效应。 3)毛细管电泳：能用于分离多种生物分子，包括氨基酸、多肽、蛋白质、DNA 片段和核酸以及多种小分子，如药物，甚至金属离子。 等电聚集电泳：在外电场作用下，各种蛋白质将移向并聚集(停留) 于等于其等电点的 pH 梯度处，形成一个很窄的区带。 4)层析聚焦电泳：根据蛋白质的等电点差异分离蛋白质混合物的柱层析方法，其原理是：当用特种多缓冲液滴洗填充在柱中的特种多缓冲液交换剂时，就会在层析柱中自上而下自动地建立起连续的 pH 梯度，同时加在柱上端的蛋白质样品

35、也随多缓冲液的展开按各自的等电点聚焦在相应的 pH 区段，并在展开过程中随 pH 梯度下移，蛋白质混合物的各组分先后从柱中流出，达到分离纯化的目的。 5)离子交换层析：蛋白质是两性电解质，在一定的 pH 溶液中可解离成带电荷的胶体颗粒，可与柱内离子交换脂颗粒表面的相反电荷相吸引，然后用盐溶液洗脱，带电量小的蛋白质先被洗脱，随着盐浓度的增加，带电量多的也被洗脱，分部收集洗脱的蛋白质溶液，达到分离蛋白质的目的。 (4)利用选择性吸附的纯化方法(吸附层析)。 利用待纯化的分子和杂质分子与吸附剂之间的吸附能力及解吸性质不同而达到分离目的的方法，典型的吸附剂有胶、氧化铝、活性炭等。 1)羧基磷灰石层析：

36、用于分离蛋白质或核酸。蛋白质中带负电基团与羧基磷灰石晶体表面的 Ca2结合，正电基团与 PO42-相互作用。最重要的用途是把单链 DNA 和双链 DNA 分开(亲和力大小：双链DNA单链 DNA) 2)疏水作用层析：根据蛋白质表面的疏水性差别而发展起来的纯化技术。在疏水作用层析中，不是暴露的疏水基因促进蛋白质与蛋白质之间的相互作用，而是连接在支持介质(如琼脂糖)上的疏水基因与蛋白质表面上暴露的疏水基因结合。 (5)利用配体的特异生物亲和力的纯化方法。 亲和层析利用共价连接有特异配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白质或其他分子的层析技术。将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附

37、剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。包括凝集素亲和层析、免疫亲和层析、金属螯合层析、染料配体层析、共价层析等。实验室常用的亲和层析比如 GST 亲和层析和 His-Ni 亲和层析。92 【正确答案】 (1)向蛋白质粗提液中加入硫酸铵至 30，可以沉淀出蛋白 4 和5：离心得到上清，弃沉淀；(2)向上清中缓慢加入酸或碱，滴定至 pH 为 3 7，可以沉淀出

38、蛋白 1；离心得到上清，弃沉淀：(3)浓缩上清至较小体积(根据选择的分子筛规格而定，如 500ul)，将其上样到分子筛上，通过凝胶层析法可以除去蛋白 2 和 3。93 【正确答案】 S(底物)P(产物)这个反应之所以能够进行，是因为有相当部分的 S 分子己被激活成为活化(过渡态)分子，活化分子越多，反应速度越快。酶 (E)的作用机制是与 S 暂时结合形成一个新化合物 ES， ES 的活化状态(过渡态)比无催化剂的该化学反应中反应物活化分子含有的能量低得多。ES 再反应产生 P，同时释放 E。E+SHESE+PE 可与另外的 S 分子结合，再重复这个循环。降低整个反应所需的活化能，使在单位时间内

39、有更多的分子进行反应，反应速度得以加快。蛋白质(如天然酶、抗体酶)、核酸 (如 RNA 核酶) 、多糖(如人工酶环糊精) 和某些脂类分子集合都行驶了酶的功能，使化学反应的活化能降低，可以高效地催化化学反应。94 【正确答案】 胞外信号分子作为配体结合到细胞膜上 G-蛋白偶联受体上，引发 G 蛋白亚基分离并脱离膜受体，激活腺苷酸环化酶，催化 cAMP 的产生，cAMP浓度升高后可特异性激活蛋白激酶 A(PKA)，被霍华德 PKA 转位进入细胞核内，使基因调控蛋白磷酸化，进而与靶基因调控序列结合，调控靶基因的表达情况，完成细胞应答反应。95 【正确答案】 生物物种保持稳定的分子基础可以从 DNA、

40、RNA 和蛋白质三个层面加以阐释;在 DNA 层面：DNA 具有规则的双螺旋结构及严格的碱基配对原则； DNA-POL 具有模板依赖性，复制时碱基严格配对；DNA 复制过程具有错配修复机机制：错配修复系统；尿嘧啶-N-糖苷酶系统； DNA 受到损伤后可被修复：光复活暗修复；重组修复；SOS 反应； 基因的回复突变。突变型重新获得野生型表现的回复过程；有的碱基突变发生在非编码区或者编码区的内含子部分，则可能不影响基因产物；致死突变。某些大的突变 (如错位与移码、大片段缺失或插入等)或关键位点的突变导致产生的蛋白质失去功能或功能异常，当这个蛋白质在生长发育过程中又非常重要的时候，有可能导致个体在性

41、成熟前死亡，这样突变基因就无法传递到后代中去。在 RNA 层面： 以 DNA 为模板通过碱基配对进行转录合成；RNA 转录酶具有校正阅读功能；RNA 转录需要各种顺式元件和反式元件的结合，是一个高度调控的过程：RNA 成熟为 mRNA 的过程经过很多转录后加工过程。在蛋白质层面：mRNA 自身序列的稳定性(帽子、polyA 结构等)；密码子与反密子通过氢键配对；胺酰-tRNA 合成酶的选择性。与底物之间以氢键相连，既能识别特异氨基酸，又能识别特异 tRNA；氨酰-tRNA 合成酶可通过水解作用纠正非正确组合的氨基酸与 tRNA 三问形成的共价联系，即纠正酰化的错误； 密码子的简并性。因为编码很

42、多氨基酸的三联密码予不止一个，它们就有简并性，因此就算发生碱基突变也不一定会改变这个三联密码子编码的氨基酸；抑制突变效应。当发生突变时，生物体采取了一种措施，原来此密码子对应的反密码子也突变为与密码予配对，从而阅读后的产物和突变后的产物一样这样就对突变进行了抑制。这种突变的 tRNA 也被称为校正 tRNA，因其对基因突变具有代偿作用；最后还有一点，就是转录和翻译过程是基因携带的遗传信息表达的过程，只要基因结构不变，其余变化可以得到最终的恢复。转录和翻译产物均具有较短的生物半寿期，不会影响基因的结构。这一点对 RNA 和蛋白质合成的忠实性都适用。96 【正确答案】 细胞内的 RNA 的半衰期比

43、蛋白质要短得多，因此要有大量基因不断表达才能保证细胞功能正常行使。要合成蛋白质需要合成 tuRNA，mRNA 可以经过核糖体多次阅读，所以只要一次转录就能产生大量同样的蛋白，但细胞无法一次转录产生大量同样的行使功能的 rRNA，在有限空间的细胞质内，细胞形成了选择性扩增 rRNA 基因的机制，使其拷贝数成倍增加。因此，真核生物细胞内rRNA 的基因拷贝数远多于核糖体蛋白的基因，这也是一种适应机制。97 【正确答案】 从表达系统上讲，原核生物有以下特点：RNA 聚合酶只有一种，其 因子决定 RNA 聚合酶对启动子的识别特异性； 转录与翻译偶联进行；转录后修饰、加工过程比较简单。从调控方式上讲，原

44、核生物有以下特点：转录调节区很小，一般位于转录起点上游不远处；基因调控主要发生在转录水平上，可分为负调控和正调控；存在通过特殊代谢物调节基因活性的机制，包括可诱导调节和可阻遏调节两种方式；操纵子模型的普遍性； 存在应急反应机制； 转录后水平的微调机制(包括mRNA 稳定性、反义 RNA、稀有密码子、魔斑核苷酸水平等 )。从表达系统上讲，真核生物有以下特点：基因结构本身的复杂性，存在外显子、内含子及选择性表达、剪切等过程；RNA 聚合酶有三种，在细胞核中的位置及负责转录的基因都不同；活性染色质结构发生变化，包括对核酸酶敏感、 DNA拓扑结构变化、DNA 碱基修饰变化、组蛋白变化等； 转录与翻译在细胞不同区域进行；转录后修饰、加工过程较复杂。从调控方式上讲，真核牛物有以下特点：真核表达调控最明显特征是能在特定时间和特定细胞中激活特定基因，从而实现“预定的” 、有序的、不可逆转的分化发育过程；真核调控有两大类，一类是针对环境变化的瞬时调控，与原核类似，一类是不可逆的发育调控过程；真核基因转录调节区很大，可能远离启动子：转录前和转录水平是基因表达调控的关键环节； 正性调节占主导。