DB21 T 4355-2025 花生抗白绢病鉴定技术规程.pdf

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1、 ICS 65.020.20 CCS 21B 05 辽宁省地方标准DB21/T 43552025 花生抗白绢病鉴定技术规程Rule for evaluation of resistance to peanut stem rot caused by Sclerotium rolfsii 2025-12-16 发布2026-01-16 实施辽宁省市场监督管理局发 布DB21/T 43552025 I 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农

2、村厅提出并归口。本文件起草单位：沈阳农业大学。本文件主要起草人：黄玉茜、丁奥、高洁、韩迪、田培聪、王趁、刘闯、杜思彤、王雯睿。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：沈阳市和平区太原北街2号，联系电话：024-23447862。文件起草单位通讯地址：沈阳市沈河区东陵路120号，联系电话：024-88487148。DB21/T 43552025 1 花生抗白绢病鉴定技术规程1范围本文件规定了花生抗白绢病鉴定的准备、接种、调查、抗病性评价和鉴定结果汇总等技术内容。本文件适用

3、于花生白绢病抗性的鉴定及评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4407.2 经济作物种子 第 2 部分：油料类3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4准备4.1培养基4.1.1PDA 培养基称取 200 g 马铃薯，洗净去皮切碎，加入 1000 mL 水，煮沸 20 min30 min，纱布过滤，补水至 1000 mL，加入 15 g 琼脂和 20 g 葡萄糖，搅拌均匀后分装至 250 mL 三角瓶，121高压灭菌

4、20 min。4.1.2燕麦片培养基 称取 20 g 燕麦片于 500 mL 三角瓶内，加入 10 mL 水搅拌至燕麦片呈湿润状态，121高压灭菌 20 min。4.2接种物4.2.1病原物分离从具有白绢病典型症状的花生植株上收集茎秆基部的菌核，将收集到的菌核用 75%乙醇处理 30 s，再用 30%次氯酸钠表面消毒 2 min，将消毒后的菌核用无菌水冲洗后于无菌环境中自然风干，将风干后的菌核置于 PDA 平板培养基表面，于 25培养箱内培养至菌核萌发，产生菌丝。花生白绢病症状见附录 B。4.2.2 病原物鉴定 观察菌丝和菌核形态，使用 rDNA-LSU 基因片段引物进行 PCR 扩增测序，鉴

5、定为齐整小核菌DB21/T 43552025 2（Sclerotium rolfsii Sacc.），经致病性测定后确定为供接种菌株。花生白绢病菌丝和菌核形态见附录 A。4.2.3 病原物保存 在 4条件下保存菌株，或用 20%的甘油溶液于-40条件下长期保存，备用。4.2.4 接种物繁殖 菌株接种于 PDA 培养基上，25下培养至长出菌丝。从菌落边缘取菌饼转移至燕麦片培养基上，置于 25培养箱中培养至菌丝长满所有燕麦片，备用于接种。4.3鉴定植株培养4.3.1室内选用长 10 cm宽 10 cm高 8 cm 的花盆播种籽粒饱满的花生种子 4 粒，保苗 3 株。每个品种播种3 盆，置于人工气候

6、箱内培养，培养条件为：温度 28/23（昼/夜）、光周期 16 h/8 h（昼/夜）、光照强度 400 mol/(m2s)600 mol/(m2s)、相对湿度 60%70%，定期浇水。种子质量应符合 GB 4407.2的规定。4.3.2田间4.3.2.1 圃地选择选择地势平坦、地力均匀、排灌方便，具备良好自然发病条件的地块。4.3.2.2 试验设计单个小区面积 3 m4.2 m，按随机区组排列。在单个小区内，每个鉴定材料种植 7 行，单粒播种，保苗 100 株，设 3 次重复。鉴定材料播种时间、耕作管理方式与生产田相同。5接种5.1室内5.1.1接种时期以4叶期为宜。5.1.2接种方法采用燕麦

7、埋土接种法。每个品种接种9株，将培养好的带菌燕麦片（接种物）埋入植株茎基部周围2 cm深的土层中，每株1 g。5.1.3接种后管理接种后的植株管理同本文件4.3.1。5.2田间5.2.1接种时期以结荚初期为宜。DB21/T 43552025 3 5.2.2接种方法采用燕麦埋土接种法。每个品种随机选择 10 株，将培养好的带菌燕麦片（接种物）埋入植株茎基部周围 2 cm 深的土层中，每株 1 g。5.2.3接种前后管理鉴定材料整个生长季不施用杀菌剂，同一项操作在同一天完成。要保持田间大气湿度，若遇干旱天气，应及时浇灌，满足发病条件。6病情调查6.1调查时间6.1.1室内接种4 d后开始调查，每2

8、 d调查1次，共7次。6.1.2田间接种7 d后开始调查，每3 d调查1次，共7次。6.2调查方法目测每份鉴定材料群体发病情况，逐株调查，根据症状描述，记录每份材料病情级别。病情以严重度（即植株所表现的系统性病害症状程度）进行衡量。病情级别、相对应的症状描述见表1。表 1 花生抗白绢病鉴定病情级别划分病情级别 症状描述 0植株无病害症状；1植株茎基部变褐，全株无系统症状；3植株茎基部软腐，出现云纹状病斑，全株25%发生枯黄萎蔫等系统症状；5植株病斑环绕茎基部一圈，全株 25%50%发生枯黄萎蔫等系统症状；7植株茎基部组织腐烂、皮层脱落，全株50%发生枯黄萎蔫等系统症状；6.3计算病情指数根据调

9、查鉴定材料的植株数和每株的病情级别，按公式（1）计算病情指数（Disease index:DI）：（1）式中：DI病情指数；s 各病情级别的代表数；n 各病情级别的植株数；N 调查总植株数；S 最高病情级别的代表数。DB21/T 43552025 4 7抗病性评价7.1计算相对抗病指数供鉴材料的相对抗病指数（RRI）按公式（2）计算：品种病情指数最感品种病情指数（2）7.2抗性评价标准依据供鉴材料相对抗病指数（RRI）确定其抗性水平，花生抗白绢病评价标准见表2。表 2 花生抗白绢病评价标准相对抗病指数（RRI）抗性评价RRI=1.0免疫（Immunity；IM）1.0RRI0.80高抗（Hig

10、hly Resistant；HR）0.80RRI0.50抗（Resistant；R）0.50RRI0.20感（Sensitive；S）0.20RRI0高感（Highly Sensitive；HS）7.3重复鉴定初次鉴定时表现为免疫、高抗和抗病的花生品种应在次年进行田间重复鉴定。7.4抗性评价 对初次鉴定结果和重复鉴定结果进行比较，以记载的最高病情级别为最终鉴定结果，并依此结果 对鉴定材料进行抗性评价。8鉴定结果汇总花生抗白绢病鉴定结果整理后填入鉴定结果表格，见表 3。表 3 年花生抗白绢病鉴定结果编号品种名称来源病情级别平均病指 抗性评价0级1级3级5级7级播种日期：接种日期：接种生育期：接种

11、病原菌分离物编号：调查日期：鉴定技术负责人（签字）：DB21/T 43552025 5 附录A （资料性）花生白绢病菌A.1 学名 花生白绢病病原菌为齐整小核菌（Sclerotium rolfsii Sacc.），属无性型真菌，有性世代为罗氏阿太菌Athelia rolfsii（Curzi）Tu.Kimbrough，属担子菌门真菌。A.2 形态描述 花生白绢病菌丝体在PDA培养基上菌落圆形，初期为白色，后变成黄褐色；菌丝呈辐射状生长，后期菌丝紧密聚集形成菌核，菌核初期为白色小球体，后期菌核增大变成黄褐色，最后变成黑褐色或茶褐色。菌核坚硬、表面光滑、圆球形，直径0.4 mm1.7 mm。图 A.

12、1 花生白绢病菌在 PDA 培养基上的菌落形态（A：菌丝形态图、B：菌核形态图）BADB21/T 43552025 6 附录B （资料性）花生白绢病症状B.1 病名 花生白绢病 peanut stem rot caused by Sclerotium rolfsii。B.2 症状描述 白绢病是花生的一种重要土传真菌性病害。花生在不同生长阶段均可受白绢病菌侵染，主要为害植株的茎部、果柄及荚果。植株茎基部变褐、软腐，呈现云纹状病斑，病斑环绕茎基部一圈后幼苗逐渐萎黄枯死，茎基部长出白色绢丝状菌丝覆盖病部，并逐渐蔓延至植株中下部茎秆，在分枝间、植株间蔓延。受害茎基部组织腐烂、皮层脱落，余下纤维状组织，出现植株叶片变黄、边缘焦枯，直至整株枯萎的系统症状。环境潮湿时，菌丝会扩散至茎基部、附近土壤和周围的杂草上，进而扩展到附近的地面并传染到其他植株上，此时的菌丝体会形成褐色、油菜籽状菌核。图 B.1 花生白绢病田间症状