GA T 204-2019 法庭科学 血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯检验 顶空气相色谱法.pdf

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1、 代替 GA/T 204 1999 GA/T GA/T ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA 法庭科学 血液、尿液中苯、甲苯、乙苯 和二甲苯检验 顶空气相色谱法 Forensic sciences Examination method for benzene, toluene, ethylbenzene and dimethyl benzene in blood and urine HSGC - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替 GA

2、/T 204-1999血、尿中的苯、甲苯、乙苯、二甲苯的定性及定量分析方法 ， 与 GA/T 204-1999相比 ， 除编辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准名称（见封面 ， 1999年 版 的 封面 ）； 修改了试剂和材料（见第 5章， 1995年版的第 5章） ； 增加了仪器及设备（见第 6章） ； 修改了定性分析和定量分析的有关内容（见第 7章， 1999年版的第 7章） ； 修改了定性结果评价和定量结果评价的 有 关内容（见第 8章， 1999年版的第 8章） 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会

3、毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：司法鉴定科学研究 院 、公安部物证鉴定中心。 本标准主要起草人：刘伟、沈敏、沈保华、卓先义、向平、于忠山、王芳琳、何毅。 GA/T 1 法庭科学 血液、尿液中 苯、甲苯、乙苯和 二甲苯 检验 顶空 -气相色谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学血液、尿液 中 苯、甲苯、乙苯和二甲苯的 顶空 -气相色谱 （ HS-GC）定性定量 检验方法 。 本标准适用于 法庭科学 血液、尿液中 苯、甲苯、乙苯和二甲苯 的定性分析和定量分析 。 其他可疑样 品 中苯、甲苯、乙苯和二甲苯的 定性分析和定量分析可参照使用。 2 规

4、范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，采用顶空 -气相色谱法定性定量 ， 以保留时间 作 为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用内标法或外标法 进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 二 级水。试剂

5、包括： a) 叔丁醇，色谱纯 ； b) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯标准物质 的纯度，移 取适量， 分别用甲醇配制 1.0mg/mL 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、 对二甲苯标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售溶液标准物质； 2） 0.1mg/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二 甲苯标准物质溶液各 1.0mL 分别于 10mL 容量瓶中，用水定容至 10mL，混匀，密封，分 别配置成 浓度为 0.1mg/mL 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲

6、苯、对二甲苯标准工作溶 液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用水稀释得到； 3） 5.0mg/mL 内标物质溶液：根据内标 叔丁醇 标准物质的纯度，移 取适量， 用 水 配制 5.0mg/mL 叔丁醇 内标 物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。 或采用市售溶液标准物质 ； GA/T 2 4） 0.04mg/mL 内标 工作溶液：移取 5.0mg/mL 内标物质溶液 适量用水稀释 配制成浓度为 0.04mg/mL 的叔丁醇 内标 工 作溶液，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 月。实验中所用其他 浓度的 内标

7、工作溶液均由 1.0mg/mL 内标物质溶液用水稀释得到 。 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料 包括： a) 顶空瓶； b) 硅橡胶 垫； c) 铝帽 ； d) 密封 钳； e) 注射器 （ 1mL） 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪：配有氢 火焰离子化检测器 （ FID）； b) 顶空自动进样器 c) 分析天平：感量 0.1mg； d) 恒温水浴锅。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 检材样品制备 移取血液或尿液检材样品 200L及水（ 若采用内标法 ， 则 为 叔丁醇内标工作溶液 ） 500L置于

8、 10mL 顶空瓶中，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，供仪器分析。 若采用顶空自动进样器，封盖后直接供仪器分析；若采用手动进样，封盖后将顶空瓶置于恒温电加 热器中 65下加热 10min，抽取液上气体 400L。 7.1.1.2 质控样品制备 移 取 0.2g/mL苯（或甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯） 标准溶液 100L及 水（ 若采用 内标法 ， 则 为 叔丁醇内标工作溶液 ） 500L作为 添加 样品 ； 另取 水 600L（内标法，则为 水 100L及 叔丁 醇 内标工作液 500L） 作为空白样品， 与检材样品平行操作， 供仪器分析 。 7.1.2 仪器 检测 7.1

9、.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 顶空自动进样 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整： a) 加热箱温度： 65； b) 定量环温度： 105； GA/T 3 c) 传输线温度： 110； d) 气相循环时间： 15min（色谱柱 1、色谱柱 2）， 25min（色谱柱 3）； e) 顶空瓶加热平衡时间： 10.0min； f) 顶空 瓶加压时间 ： 0.10min； g) 定量环充满时间 ： 0.10min； h) 定量环平衡时间 ： 0.05min； i) 进样时间： 1.00min。 7.1.2.1.2 顶空手动进样 将样品置于 65恒温水浴中加热 10mi

10、n，用 1mL注射器吸取瓶内液面上气体 0.4mL，进样。 7.1.2.1.3 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际 情况 进行调整： a) 色谱柱 ： 1） DB-ALC1柱（ 30m0.32mm1.8m）或等效色谱柱； 2） DB-ALC2柱（ 30m0.32mm1.2m）或等效色谱柱 ； 注： DB-ALC1、 DB-ALC2 柱 是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 40保持 3min，以 10/min速率升至 150

11、，保持 1min； c) 进样口温度： 150； d) 检测器温度： 300； e) 氢气流量 ： 40mL/min； f) 空气流量 ： 400mL/min； g) 载气：高纯氮； h) 柱流 量 ： 8.0mL/min。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品液上气体，按 7.1.2.1 的 分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 制备 准确移取血液或尿液检材样品 200L两份分别置于 10mL顶空瓶中，按 7.1.1.1进行操作。 用单点校正法定量时，配置单点浓度的苯（ 或 甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）标准 溶液，准确移取标准溶液 200L 两份

12、分别置于 10mL 顶空瓶中， 加水 （ 若采用内标法 ， 则 为 叔丁醇内标 工作溶液 ） 500L（标准溶液中目标物含量应为检材样品中目标物含量的 (10050)%） ， 作为单点 校正样 品， 与检材样品平行操作，供仪器分析。 用 标 准曲线法定量时， 配制 系列浓度的苯（ 或 甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）标准 溶液（ 参 见附录 A中 A.1），准确移取 标准溶液 200L各 两 份 分别置于 10mL顶空瓶中 ， 加水（ 若采用内标 法 ， 则 为 叔丁醇内标工作溶液 ） 500L（ 检材 样品中目标物的含量应在 标 准曲线的线性范围内），作为 系列浓度 标准曲线 样品

13、， 与检材样品平行操作，供仪器分析。 7.2.2 仪器 检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1规定的条件分析。 GA/T 4 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和 单点 校正 或标准曲线样品 液上气体，按 7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析 1次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算 含量 7.2.3.1.1 内标 -标准 曲线法 记录 检材 样品 和 标准曲线样品 中目标物 及 内标物的峰面积值，以 标准曲线 样品中目标物与内标 物 的峰面积比为纵坐标、 标准曲线 样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材 样品中目标物 与 内标 物 的峰面积

14、比，按公式 （ 1） 计算含量 ： = . (1) 式中： W 检材 样品中 目标物 的含量 ，单位为微克每毫升 （ g/mL）； Y 检材 样品中 目标物 与内标物的峰面积比； a线性方程的截距； b线性方程的斜率。 7.2.3.1.2 内标 -单点校正 法 记录 检材 样品 和 单点 校正样品 中目标物 及 内标物的峰面积值， 按公式 （ 2） 计算校正因子 ， 按公式 （ 3） 计算含量 ： = 标 内 内 标 . (2) 式中： f 校正因子； M 标 标准 样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g） ； A 内 标准 样品中内标物峰面积值； M 内 标准 样品中内标物添加量，单位为

15、微克 （ g） ； A 标 标准 样品中 目标物 峰面积值。 = 样 内 内 样 . (3) 式中： W 检材样品中目标物的含量，单位为微克每毫升（ g/mL）； f 校正因子； A 样 检材样品中目标物峰面积值； M 内 检材样品中 内标物添加量，单位为微克（ g）； A 内 检材样品中内标物峰面积值； M 样 检材样品的取样量，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.1.3 外标 -标准 曲线法 记录 检材 样品 和 标准曲线样品 中目标物的峰面积值，以 标准曲线 样品中目标物峰面积值为纵坐标、 标准曲线 样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品中目标物的峰面积

16、GA/T 5 值，按公式 （ 4） 计算含量 ： = 样 . (4) 式中： W 检材 样品中 目标物 的含量 ，单位为微克每毫升 （ g/mL）； A样 检材 样品中 目标物 峰面积值 ； a线性方程的截距； b线性方程的斜率。 7.2.3.1.4 外 标 -单点校正 法 记录 检材 样品 和 单点 校正样品 中目标物的峰面积值， 按公式 （ 5） 计算含量 ： = 样 标 标 样 . (5) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品 中目标物峰面积值； M 标 标准 样品中标准物添加量，单位为微克 （ g） ； A 标 标准 样品 提取液

17、 中目标物峰面积值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为毫升 （ mL）。 7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（ 6）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (6) 式中： RD相对相差 ，用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两 份检材 样品平行定量测定的含量数值； X 两 份检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1.0%之内） ， 且经 两种 不同色谱 柱的分析 ，结果一致 ， 空白样

18、 品无干扰，则可判断检材样品中检出目 标物。必要时，用 气相色谱 -质谱 确证。 方法的检出限参见附录 A， 相关谱图参见附录 B。 8.1.2 阴性结果评价 检材样品中 未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰 ，出现与内标溶液一致的色谱峰，空白样品无干 扰 ， 或 检材样品中 未出现 与目标物标准溶液一致的色谱峰 ， 添加样品中 出现与目标物标准溶液一致的色 谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 GA/T 6 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 10%（有凝血块的血样 不大于 15） ，定量数据可靠，其含量按两份检材的 平均值计算。如果检材样品中目标物含量的 RD 1

19、0%（有凝血块的血样 大于 15） ，定量数据不可靠。 应按 7.2重新提取检验 。 苯、甲苯、乙苯、二甲苯中毒诊断参考资料参见附录 C。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 方法学有效性验证 A.1 标准曲线 配制苯（甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）质量浓度为 0.50g/mL、 1.0g/mL、 2.0g/mL、 5.0g/mL、 10.0g/mL、 25.0g/mL、 50.0g/mL的 标准溶液 ，按 7.1.1.1操作，以苯（甲苯、乙苯、邻二甲 苯、间二甲苯、对二甲苯）与内标叔丁醇的峰面积比对苯（甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲 苯）质量浓度做标准曲线， 线性相

20、关系数 （ r） 均不小于 0.995。 A.2 检出限和定量限 本方法各化合物的检出限均为 0.2g/mL， 定量 限 均为 0.5g/mL。 GA/T 8 附 录 B （资料性附录） 苯、甲苯、二甲苯、乙苯及内标的气相色谱图 B.1 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯和内标气相色谱图见图 B.1（色谱柱 1条件） 。 图 B.1 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯标准品和内标气相色谱图 B.2 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯和内标气相色谱图见图 B.2（色谱柱 2条件） 。 图 B.2 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯标准品和内标气相色谱图 G

21、A/T 9 附 录 C （资料性附录） 苯、甲苯、乙苯、二甲苯中毒诊断参考资料 C.1 中毒症状 急性苯中毒主要表现为中枢神经系统症状，轻者出现黏膜刺激症状，患者诉头痛、头晕、恶心、呕 吐等，随后出现兴奋或酒醉状态，严重时发生昏迷、抽搐、血 压下降、呼吸和循环衰竭。慢性中毒以造 血 系统损害为主要表现，有头晕、头痛、乏力、失眠、记忆力减退等神经衰弱症候群的表现，造血系统 损害以白细胞数减少最为常见。中毒晚期可出现全血细胞减少、致再生障碍性贫血。 吸入较高浓度甲苯蒸汽后可出现头晕、头痛、恶心、呕吐、四肢无力、意识模糊、步态蹒跚，重症 者有躁动、抽搐或昏迷，并伴有眼和上呼吸道刺激症状，可出现眼结膜

22、和咽部充血。直接吸入液体后可 出现肺炎、肺水肿、肺出血及麻醉症状。 二甲苯蒸汽可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的呼吸困难、甚至死亡，吸入高浓度的二 甲苯还可使食欲丧失、恶心、呕吐、腹痛，有时可引起肝肾可逆性损伤。 C.2 尸检所见 急性苯中毒死亡尸体以中枢神经病变为主，大脑白质广泛水肿，血管周围神经组织疏松和淋巴细胞 浸润，胶质细胞周围出现大空泡，并有脱髓鞘现象 。 气管 黏膜、胸膜及非严重淤血和出血，有明显肺水 肿。接触极高浓度死亡以肺脏明显出血和水肿为主要病变，大脑仅有轻度血管充血，肝肾可无明显异常， 体内富含脂肪的组织中的苯含量与接触浓度平行。慢性苯中毒死亡尸体皮肤苍白，贫血貌，全身散在出 血斑点，继发性感染灶，鼻与口腔黏膜溃疡，肝、脾、淋巴结可无肿大或轻度肿大，骨髓象呈再生障碍 性贫血或白血病表现。 C.3 致死浓度 苯的血中致死浓度为 0.95g/mL；甲苯的血中致死浓度为 10g/mL；二甲苯的血中致死浓度为 3g/mL40g/mL。 _