DB42 T 789-2012 猪链球菌2型ELISA抗体检测方法.pdf
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1、ICS 11.220B 41备 案 号 : DB42湖 北 省 地 方 标 准DB42/T 789 2012猪 链 球 菌 2型 ELISA抗 体 检 测 方 法 Method of the enzyme-linked immunosobent assay for the detection of atibodiesagainst swine streptocosus suis serotype 2 2012 -01- 06发 布 2012 -03-01实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB42/T 7892011 I 目 次前 言 .II引 言 .III1 范 围 .12
2、 缩 略 词 .13 实 验 原 理 .1 4 实 验 条 件 .15 实 验 材 料 .16 样 品 处 理 .17 实 验 方 法 .28 结 果 判 定 .29 注 意 事 项 .2附 录 A.3 DB42/T 7892011 II 前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 : 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 华 中 农 业 大 学 提 出 。本 标 准 由 湖 北 省 农 业 厅 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 : 华 中 农 业 大 学 动 物 医 学 院 、 武 汉 科 前 动
3、物 生 物 制 品 有 限 责 任 公 司 、 湖 北 省 动 物 疫病 预 防 控 制 中 心 。本 标 准 主 要 起 草 人 : 金 梅 林 、 康 超 、 张 安 定 、 钟 广 汉 、 周 艳 君 、 董 晓 辉 、 陈 焕 春 、 徐 高 原 、 孙 小 美 、李 淑 云 、 宋 念 华 。 DB42/T 7892011 III 引 言猪 链 球 菌 ( Streptococcus suis, SS) 是 一 种 能 引 起 猪 发 病 的 重 要 致 病 菌 , 往 往 造 成 猪 群 感 染 和 大 量 死亡 , 同 时 严 重 危 害 人 类 健 康 甚 至 导 致 死 亡
4、。 根 据 荚 膜 多 糖 分 型 , 猪 链 球 菌 可 分 为 33 个 血 清 型 , 其 中 猪链 球 菌 2 型 是 毒 力 最 强 、 流 行 最 广 的 血 清 型 。 为 了 有 效 地 预 防 和 控 制 猪 链 球 菌 2 型 病 , 制 定 了 猪 链 球菌 2 型 ELISA 抗 体 的 检 测 方 法 , 本 方 法 快 速 、 简 便 , 易 操 作 , 是 监 测 猪 2 型 链 球 菌 病 的 重 要 方 法 。 DB42/T 7892011 1 猪 链 球 菌 2 型 ELISA 抗 体 检 测 方 法1 范 围本 标 准 规 定 了 猪 链 球 菌 2 型
5、ELISA 抗 体 的 检 测 方 法 的 缩 略 词 、 实 验 原 理 、 实 验 条 件 、 实 验 材 料 、样 品 处 理 、 实 验 方 法 、 结 果 判 定 和 注 意 事 项 等 。本 标 准 适 用 于 检 测 猪 血 清 中 的 猪 链 球 菌 2 型 抗 体 。2 缩 略 词下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。ELISA( enzyme-linked immunosorbent assay) : 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 OD630nm值 : 630纳 米 波 长 处 的 吸 光 值3 实 验 原 理酶 联 免 疫 吸 附 试 验 是 将 抗 原
6、 吸 附 在 固 相 载 体 上 , 加 入 待 检 抗 体 , 再 加 相 应 的 酶 标 记 抗 体 , 生 成 抗 原-待 测 抗 体 -酶 标 记 抗 体 的 复 合 物 , 再 与 该 酶 的 底 物 反 应 生 成 有 色 产 物 。 借 助 分 光 光 度 计 的 光 吸 收 计 算 抗体 的 量 。 本 方 法 中 采 用 冷 酚 抽 提 法 , 提 取 并 纯 化 猪 链 球 2 型 菌 的 荚 膜 多 糖 , 以 其 作 为 包 被 抗 原 , 建 立 检测 猪 链 球 菌 2 型 抗 体 的 ELISA 检 测 方 法 。4 实 验 条 件4.1 实 验 室 实 验 操
7、作 宜 在 常 温 ( 18 25 ) 进 行 。4.2 仪 器抗 原 包 被 板 、 微 量 移 液 器 、 移 液 器 吸 头 、 酶 标 检 测 仪 、 恒 温 箱 、 冰 箱 。4.3 人 员注 意 个 人 防 护 和 环 境 保 护 。5 实 验 材 料20 倍 浓 缩 洗 涤 液 、 样 品 稀 释 液 、 酶 标 记 抗 体 、 底 物 液 A、 底 物 液 B、 终 止 液 、 阳 性 对 照 血 清 、 阴性 对 照 血 清 。 配 方 见 附 录 A。 6 样 品 处 理 DB42/T 7892011 2 6.1 样 品 采 集取 动 物 全 血 , 待 血 液 凝 固 后
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