ISO 22303-2008 Tobacco - Determination of tobacco specific nitrosamines - Method using buffer extraction《烟草 烟草专有亚硝胺的测定 缓冲溶液萃取法》.pdf

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1、 Numro de rfrence ISO 22303:2008(F) ISO 2008NORME INTERNATIONALE ISO 22303 Premire dition 2008-07-15Tabac Dosage des nitrosamines spcifiques du tabac Mthode dextraction par solution tampon Tobacco Determination of tobacco specific nitrosamines Method using buffer extraction ISO 22303:2008(F) PDF Exo

2、nration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de c

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6、cation ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-121

7、1 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2008 Tous droits rservsISO 22303:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et

8、 dfinitions 1 4 Principe 1 5 Ractifs 2 6 Appareillage 2 7 Prparation de la solution dextraction et des talons . 3 7.1 Prparation de la solution tampon dextraction 3 7.2 Prparation de ltalon interne 3 7.3 Prparation des talons dtalonnage 3 7.4 Rglage du chromatographe en phase gazeuse et du dtecteur

9、4 7.5 Extraction du tabac et isolation des nitrosamines spcifiques du tabac. 5 7.6 Concentration de lextrait. 5 8 Analyse des donnes et calcul des rsultats 6 9 Rptabilit et reproductibilit 6 10 Rapport dessai . 7 Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes et de courbes dtalonnage 8 Bibliogra

10、phie 10 ISO 22303:2008(F) iv ISO 2008 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO

11、. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique inte

12、rnationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales ado

13、pts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de prop

14、rit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 22303 a t labore par le comit technique ISO/TC 126, Tabac et produits du tabac. ISO 22303:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs v I

15、ntroduction Au cours de llaboration de la prsente Norme internationale, des essais interlaboratoires ont t effectus laide de deux mthodes diffrentes de dosage des nitrosamines spcifiques du tabac: la prsente mthode par extraction par solution tampon et la mthode par extraction au chlorure de mthylne

16、 alcalin (voir Rfrences 2 et 3). Ces tudes montrent quil nexiste aucune diffrence entre les rsultats obtenus avec ces deux mthodes (voir Rfrence 4). La mthode par extraction au chlorure de mthylne alcalin est dcrite dans la Spcification technique ISO/TS 22304, (voir Rfrence 1). NORME INTERNATIONALE

17、ISO 22303:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 1 Tabac Dosage des nitrosamines spcifiques du tabac Mthode dextraction par solution tampon 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie le mode opratoire suivre pour le dosage des nitrosamines spcifiques du tabac (TSNAs): N-nitrosonorni

18、cotine (NNN), N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) et 4-(mthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) par chromatographie en phase gazeuse dans le tabac en feuilles broyes, le tabac manufactur et les produits du tabac manufacturs. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suiv

19、ants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence (y compris les ventuels amendements) sapplique. ISO 1042, Verrerie de laboratoire Fioles jauges un trait ISO 369

20、6, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 nitrosamines spcifiques du tabac TSNAs quatre nitrosamines sont prdominantes dans le tabac: la N-nitrosonornicotine (

21、NNN), la N-nitrosoanatabine (NAT), la N-nitrosoanabasine (NAB) et la 4-(mthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) 4 Principe Les nitrosamines spcifiques du tabac sont extraites dchantillons de tabac broy laide dune solution tampon. La portion aqueuse de la solution tampon est absorbe sur de l

22、a terre de diatomes. Les nitrosamines spcifiques du tabac sont ensuite lues de la terre de diatomes laide de chlorure de mthylne et concentres laide dazote dans un bain deau chauff. Elles sont ensuite spares et quantifies par chromatographie en phase gazeuse avec dtection par chimiluminescence. La q

23、uantification est ralise par une technique dtalonnage interne. ISO 22303:2008(F) 2 ISO 2008 Tous droits rservs5 Ractifs Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. PRCAUTIONS DE SCURIT Les nitrosamines sont considres tre des substances cancrignes; il convient donc de prendre les p

24、rcautions appropries pour la prparation des talons. Toujours porter des gants de laboratoire pour manipuler les solutions titres et pour effectuer les dilutions. 5.1 N-nitrosonornicotine, (NNN, CAS: 1)53759-22-1), w W 98 % (fraction massique). 5.2 N-nitrosoanatabine, (NAT, CAS: 71267-22-6), w W 98 %

25、. 5.3 N-nitrosoanabasine, (NAB, CAS: 1133-64-8), w W 98 %. 5.4 4-(mthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone, (NNK, CAS: 64091-91-4), w W 98 %. 5.5 N-nitrosodi-n-hexylamine, (NDHA, CAS: 6949-28-6) (talon interne), w W 98 %. 5.6 Acide citrique, anhydre (CAS: 77-92-9), w W 99,5 %. 5.7 Phosphate dhydro

26、gne de sodium, (Na 2 HPO 4 ), anhydre (CAS: 7558-79-4), w W 99 %. 5.8 Acide L-ascorbique, (CAS: 50-81-7), w W 99 %. 5.9 Dichloromthane, (CAS: 75-09-02), w W 99,9 %. 5.10 Eau, (CAS: 7732-18-5), au moins conforme la qualit 2 de lISO 3696. 5.11 Azote, (CAS: 7727-37-9), pour vaporateur dluant, w W 99,99

27、5 %. 5.12 Hlium, (CAS: 7440-59-7), pour gaz vecteur, w W 99,995 %. 5.13 Oxygne, (CAS: 7782-44-7), pour gnrer de lozone dans le dtecteur, w W 99,6 %. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Chromatographe en phase gazeuse (CG), avec un dtecteur chimiluminesc

28、ence et un passeur dchantillons (facultatif). 6.2 vaporateur de solvant, pour concentrer lextrait dchantillon. 6.3 Bain ultrasons, pour lextraction de lchantillon. 6.4 Colonne de CG, colonne capillaire en silice fondue dune longueur de 30 m et dun diamtre intrieur de 0,53 mm, revtue dun film de 3,0

29、m de dimthylpolysiloxane 100 %. NOTE Dautres colonnes peuvent tre utilises si elles permettent dobtenir une sparation satisfaisante. 1) CAS: Chemical Abstract Service. ISO 22303:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 3 6.5 Colonne de terre de diatomes calcines, dune capacit de 100 ml. 6.6 Systme de col

30、lecte de donnes chromatographiques, permettant de mesurer les surfaces de pic par des moyens lectroniques. 6.7 Fioles jauges un trait, conformes la classe A de lISO 1042. 6.8 Pipettes en verre jetables, dune longueur de 229 mm. 6.9 Systmes de distribution de solvant inclins en verre, de volumes cons

31、tants, 10 ml et 50 ml. 6.10 Erlenmeyers en verre, dune capacit de 125 ml. 6.11 prouvette gradue en verre, dune capacit de 250 ml. 6.12 Rcipients chantillons, flacons en verre borosilicat pour passeur dchantillons, dune capacit de 2 ml, ferms par un septum revtu de PTFE. 6.13 Tube pour prlvement, dun

32、e capacit de 300 ml. 6.14 Unit de rfrigration, pour stocker des talons 20 C. 7 Prparation de la solution dextraction et des talons 7.1 Prparation de la solution tampon dextraction Les quantits ncessaires pour prparer 2 l de solution tampon sont (21,1 0,1) g dacide citrique (5.6), (25,6 0,1) g dhydro

33、gnophosphate de sodium (5.7) et (7,0 0,1) g dacide L-ascorbique (5.8). Le volume est complt laide deau distille dionise et le mlange est homognis jusqu dissolution de tous les solides. Il convient de prparer la solution tampon une fois par semaine et de la conserver environ 4 C lorsquelle nest pas u

34、tilise. La solution tampon dextraction est limpide et incolore avec un pH de (4,3 0,2). 7.2 Prparation de ltalon interne Prparer ltalon interne en dissolvant le NDHA (5.5) dans le dichloromthane (5.9) de manire obtenir une rponse suffisante dans le chromatogramme. Par exemple, lorsque la masse de lc

35、hantillon est de 1 g et que la dilution finale est de 2 ml, prparer ltalon interne une concentration massique denviron 2,0 g de NDHA par millilitre de dichloromthane. On obtiendra ainsi une concentration massique denviron 1,0 g de NDHA par millilitre dans la dilution finale (en supposant que la rcup

36、ration est complte), permettant la dtection par le systme de chromatographie. Conserver ltalon interne environ 20 C lorsquil nest pas utilis. 7.3 Prparation des talons dtalonnage Le Tableau 1 indique les concentrations types des talons utiliser pour lanalyse dchantillons de tabac. Il convient dutili

37、ser pour ltalonnage au moins quatre niveaux de nitrosamines spcifiques du tabac. Lorsquelles ne sont pas utilises, conserver les solutions titres environ 20 C. ISO 22303:2008(F) 4 ISO 2008 Tous droits rservsTableau 1 Concentrations approximatives de ltalon dans le dichloromthane (g/ml) Niveau NDHA N

38、NN NAT NAB NNK 1 1,00 0,10 0,10 0,05 0,10 2 1,00 0,30 0,30 0,15 0,50 3 1,00 1,50 1,50 1,00 3,00 4 1,00 5,00 5,00 1,50 5,00 5 1,00 8,50 9,00 2,00 7,50 6 1,00 17,00 11,00 3,00 11,00 NOTE Pour une masse dchantillon de 1 g et une dilution finale de 2 ml. 7.4 Rglage du chromatographe en phase gazeuse et

39、du dtecteur Le chromatographe (6.1) est rgl pour des injections en mode splitless et configur pour fonctionner avec un dtecteur chimiluminescence. Un insert de division est utilis dans le dispositif dinjection de type split/splitless. (On na relev aucune contamination dans linsert aprs 50 injections

40、 dchantillons.) Il est recommand de relier lextrmit de la colonne analytique au dtecteur laide dun tube capillaire sans phase, de manire quilibrer les variations de dbit provoques par la pompe vide dans le dtecteur par rapport au dbit mis par la colonne analytique. Un tube capillaire sans phase dune

41、 longueur de 150 cm et dun diamtre intrieur de 0,25 mm est considr comme suffisant pour une colonne analytique dune longueur de 30 m, dun diamtre intrieur de 0,53 mm et dune paisseur de film de 3,0 m. Les raccordements la colonne analytique peuvent tre assurs par des raccords universels tanches la p

42、ression. Le tube est ensuite introduit dans le four et fix lentre du dtecteur. Le Tableau 2 indique les tempratures types et les rampes de temprature utilises pour sparer les nitrosamines spcifiques du tabac. Le Tableau 3 indique les rglages recommands pour lanalyse. Lanalyste peut faire varier ces

43、conditions pour obtenir une meilleure rsolution, rduire la dure de lanalyse ou amliorer la limite de dtection. La Figure A.1 reprsente un chromatogramme dun talon analys dans les conditions donnes dans les Tableaux 2 et 3. Tableau 2 Programme du four de chromatographie Temprature initiale du four (C

44、) 100 Temps initial du four (min) 1,00 Vitesse du programme de temprature 1 du four (C/min) 30 Temprature finale 1 du four (C) 200 Temps final 1 du four (min) 0,00 Vitesse du programme de temprature 2 du four (C/min) 3 Temprature finale 2 du four (C) 235 Temps final 2 du four (min) 0,00 Vitesse du p

45、rogramme de temprature 3 du four (C/min) 30 Temprature finale 3 du four (C) 260 Temps final 3 du four (min) 8,00 Dure totale de fonctionnement (min) 24,82 NOTE Les conditions peuvent tre ajustes pour amliorer la rsolution des pics ou le temps dlution. ISO 22303:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 5

46、Tableau 3 Paramtres du systme Temprature de linterface du dtecteur (C) 275 Temprature du pyrolyseur du dtecteur (C) a500 Dbit dozone vers le dtecteur (ml/min) 5,1 Mode dinjection Splitless Temprature de linjecteur (C) 230 Volume dinjection (l) 2 Pression dhlium (psi) 7,0 Dbit de purge 0,6 min (ml/mi

47、n) 100 Nombre de pompages pour le prlvement dchantillons sur le passeur dchantillons 6 Retard d la viscosit sur le passeur dchantillons 2 Nombre de rinages pour lchantillon sur le passeur dchantillons 0 Nombre de rinages pour le solvant bA sur le passeur dchantillons 4 Nombre de rinages pour le solvant bB sur le passeur dchantillons 4 aLa temprature du dtecteur peut tre rgle pour amliorer la limite de dtection.b Alcool isopr