DB6110 T 008-2021 天麻萌发菌、蜜环菌菌种生产技术规程.pdf

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1、I C S 6 5.0 2 0.2 0B 3 8DB6110商 洛 市 地 方 标 准D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 1天 麻 萌 发 菌、蜜 环 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程T e c h n i c a l S p e c i f i c a t i o n f o r p r o d u c t i o n o f G a s t r o d i a E l a t a B l.g e r m i n a t i o n f u n g i a n d a r m i l l a r i a m e l l e a2 0 2 1-1 2-0 8 发 布 2 0

2、2 2-0 1-0 8 实 施商 洛 市 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 1目 次前 言.I I1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 术 语 和 定 义.14 生 产 环 境 与 设 施.25 萌 发 菌、蜜 环 菌 菌 种 的 制 备.36 菌 种 质 量.57 入 库.58 标 志、包 装、运 输、贮 藏.69 生 产 档 案.6附 录 A 培 养 基 配 方（规 范 性 附 录）.7D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 1前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1-2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则

3、 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草。本 文 件 由 丹 凤 县 永 福 工 贸 有 限 责 任 公 司 提 出。本 文 件 由 商 洛 市 农 业 农 村 局 归 口。本 文 件 起 草 单 位：丹 凤 县 永 福 工 贸 有 限 责 任 公 司、丹 凤 县 良 种 天 麻 产 业 园、丹 凤 县 农 业 技 术 服 务 中心。本 文 件 主 要 起 草 人：张 建 民、梁 富 斌、王 秋 颖、杨 丹 军、黄 涛、庆 立 红、王 晓 敏、梁 育 凡、王 新 悦。本 文 件 由 丹 凤 县 永 福 工 贸 有 限 责 任 公 司 负 责 解 释

4、。本 文 件 首 次 发 布。联 系 方 式 如 下：单 位：丹 凤 县 永 福 工 贸 有 限 责 任 公 司电 话：0 9 1 4-3 1 7 7 8 8 1地 址：丹 凤 县 峦 庄 镇 河 口 村 丹 凤 县 良 种 天 麻 产 业 园邮 编：7 2 6 2 0 2D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 11天 麻 萌 发 菌、蜜 环 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 天 麻 萌 发 菌、蜜 环 菌 菌 种 生 产 技 术 的 术 语 和 定 义、生 产 环 境 与 设 施、萌 发 菌 和 蜜 环 菌菌 种 的 制 备、菌 种 质 量、入

5、库、标 志、包 装、运 输、贮 藏 以 及 生 产 档 案 等 技 术 要 求。本 文 件 适 用 于 天 麻 萌 发 菌 和 蜜 环 菌 菌 种 的 生 产。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 1 9 1 包 装 储 运 图 示 标 志G B 4 8 0 6.7 食 品 安 全 国 家 标 准 食 品 接 触

6、 用 塑 料 材 料 及 制 品G B 5 7 4 9 生 活 饮 用 水 卫 生 标 准G B/T 1 2 7 2 8 食 用 菌 术 语N Y/T 5 2 8 食 用 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程N Y/T 2 3 7 5 食 用 菌 生 产 技 术 规 范N Y 5 0 9 9 无 公 害 食 品 食 用 菌 栽 培 基 质 安 全 技 术 要 求3 术 语 和 定 义G B/T 1 2 7 2 8 界 定 的 以 及 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件，为 使 用 方 便，以 下 重 复 列 出 了 G B/T 1 2 7 2 8中 的 某 些 术 语 和 定 义

7、。3.1 天 麻（G a s t r o d i a e l a t a B L.）天 麻，又 名 赤 箭、神 草、鬼 督 邮、定 风 草 等。多 年 生 兰 科 草 本 异 养 植 物，以 干 燥 的 块 茎 入 药，药 材名 称 天 麻。3.2 萌 发 菌（g e r m i n a t i o n f u n g i）为 天 麻 种 子 提 供 营 养 的 石 斛 小 菇、紫 其 小 菇 等 小 菇 属 真 菌。3.3 蜜 环 菌（a r m i l l a r i a m e l l e a）为 天 麻 提 供 营 养 物 质 的 伞 菌 目 小 皮 伞 科 蜜 环 菌 属 真 菌。3

8、.4 母 种（s t o c k c u l t u r e）经 各 种 方 法 选 育 出 来 的 具 有 结 实 性 的 的 菌 丝 体 纯 培 养 物 及 其 继 代 培 养 物，也 称 一 级 菌 种、试 管 种。3.5 原 种（m o t h e r s p a w n）由 母 种 移 植、扩 大 培 养 而 成 的 菌 丝 体 纯 培 养 物，也 称 二 级 菌 种。D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 123.6 栽 培 种（c u l t i s p a w n）由 原 种 移 植、扩 大 培 养 而 成 用 于 栽 培 的 菌 丝 体 纯 培 养 物，栽 培 种

9、 只 能 用 于 栽 培，不 可 再 次 扩 大 繁 殖菌 种，也 称 三 级 菌 种。3.7 菌 索（r h i z o m o r p h）真 菌 菌 丝 体 集 合 而 成 的 绳 索 状 结 构。3.8 蒴 果（c a p s u l e）呈 倒 卵 形、卵 形 或 纺 锤 形 的 天 麻 果 实。4 生 产 环 境 与 设 施4.1 场 地菌 种 生 产 车 间 应 建 在 空 气 新 鲜，无 污 染，交 通 便 利 的 地 方，水、电 方 便。4.2 车 间 设 置 和 布 局应 设 置 原 辅 料 仓 库、原 料 处 理 场 地、洗 涤 室、配 料 室、灭 菌 室、预 冷 室、接

10、 种 间、培 养 室、质 检 室、保 藏 室、贮 藏 库 等，布 局 科 学 合 理。4.3 建 筑 要 求车 间 内 地 面 应 平 整 且 经 硬 化 处 理，便 于 清 洗 消 毒 和 机 械 作 业，且 不 易 沾 染 杂 菌 孢 子。4.4 设 施 要 求4.4.1 灭 菌 室应 配 备 高 压 或 常 压 灭 菌 设 备，水 电 安 全 方 便，通 风 良 好。4.4.2 预 冷 室应 配 备 降 温、空 气 净 化 设 备。4.4.3 接 种 间为 封 闭 式 房 间，设 作 业 通 道，更 衣 室、缓 冲 间、风 淋 室、无 菌 室 等，室 内 平 整 光 滑，配 有 紫 外

11、灯 和臭 氧 等 消 毒 设 施。4.4.4 培 养 室应 配 备 控 温、控 湿 和 新 风 系 统 设 施。4.4.5 保 藏 室配 备 冰 箱 或 冰 柜，用 于 保 藏 母 种 和 原 种。4.4.6 贮 藏 库应 配 备 制 冷 降 温 设 备，通 风 良 好，避 光 凉 爽，用 于 贮 藏 栽 培 种。D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 135 萌 发 菌、蜜 环 菌 菌 种 的 制 备5.1 采 集 分 离 材 料5.1.1 萌 发 菌 种 菌每 年 5 月 6 月，在 有 野 生 天 麻 分 布 的 山 林 下，收 集 枯 枝 落 叶，与 天 麻 蒴 果 拌 匀

12、 后 覆 土，两 个 月 后 取萌 发 的 原 球 茎 作 为 分 离 材 料；或 在 野 外 采 集 的 原 球 茎 中 将 侵 入 原 球 茎 的 萌 发 菌 分 离 出 来，获 取 萌 发 菌 种菌。5.1.2 蜜 环 菌 种 菌蜜 环 菌 种 菌 分 离 材 料 主 要 有 蜜 环 菌 菌 索、带 菌 索 的 天 麻 块 茎、蜜 环 菌 子 实 体 和 孢 子 等。5.1.2.1 蜜 环 菌 菌 索在 夏 秋 季 节 雨 晴 之 后，采 集 枯 树 枝 或 枯 树 桩 上 白 色 生 长 点 及 红 色 幼 嫩 的 蜜 环 菌 菌 索 作 为 分 离 材 料；或 者 将 有 蜜 环 菌

13、 菌 丝 的 枯 树 枝、枯 树 桩 带 回 室 内 培 养，待 其 长 出 蜜 环 菌 菌 索 后，将 幼 嫩 菌 索 作 为 分 离 材料。5.1.2.2 带 菌 索 的 天 麻 块 茎在 天 麻 采 收 季 节，挑 选 健 康 的、带 菌 索 的 白 麻、母 麻 或 营 养 繁 殖 茎 作 为 分 离 材 料。5.1.2.3 蜜 环 菌 子 实 体在 天 麻 种 植 区 域 或 野 生 蜜 环 菌 生 长 的 地 方，采 取 发 育 正 常、无 病 虫 害、尚 未 开 伞 的 子 实 体 作 为 分 离材 料。5.1.2.4 孢 子收 集 子 实 体 成 熟 后 散 出 的 孢 子 作

14、为 分 离 材 料。5.2 母 种 的 制 备5.2.1 P D A 培 养 基 配 方配 方 应 符 合 附 录 A.1 的 规 定。5.2.2 萌 发 菌 母 种 的 制 备选 取 健 壮 的 原 球 茎，清 除 泥 土，用 自 来 水 冲 洗 干 净，然 后 用 无 菌 水 冲 洗 数 次 后，置 于 经 灭 菌 处 理 的培 养 皿 中，用 0.1%氯 化 汞 溶 液 浸 泡 3 m i n 5 m i n，用 灭 菌 小 剪 刀 将 原 球 茎 剪 成 2 段 3 段，在 链 霉 素 液 中 蘸一 下，接 入 P D A 平 面 培 养 基 中，2 5 培 养 5 d 1 0 d，待

15、 发 出 菌 丝 后，挑 取 菌 丝 接 入 P D A 平 板 培 养 基，如 此反 复 几 次，即 可 得 到 纯 化 的 母 种。5.2.3 蜜 环 菌 母 种 的 制 备5.2.3.1 菌 索 制 备 法切 取 部 份 蜜 环 菌 菌 索 组 织，用 无 菌 水 冲 洗 2 次 3 次，放 入 0.1%氯 化 汞 溶 液 中 浸 泡 0.5 m i n 1 m i n，再次 用 无 菌 水 冲 洗 2 次 3 次，洗 去 残 存 的 药 液，在 链 霉 素 液 中 蘸 一 下，用 无 菌 滤 纸 吸 干 表 面 附 着 水 后，接入 P D A 培 养 基 中，在 2 5 培 养 3

16、d 4 d，可 发 现 接 种 点 处 开 始 发 出 少 许 绒 状 白 色 菌 丝，继 续 培 养 至 接 种 点D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 14处 刚 产 生 菌 索 分 枝 时，立 即 用 接 种 铲 截 取 其 中 生 长 旺 盛 且 幼 嫩 的 菌 索 部 分，接 入 P D A 培 养 基 中，2 5 恒温 培 养，菌 索 长 满 培 养 基 后 即 为 纯 化 的 母 种。5.2.3.2 带 菌 索 的 天 麻 块 茎 制 备 法清 除 带 菌 索 的 天 麻 块 茎 表 面 泥 土，用 无 菌 水 冲 洗 2 次 3 次，在 0.1%氯 化 汞 溶 液

17、 中 浸 泡 1 m i n 1.5 m i n，再 次 用 无 菌 水 冲 洗 2 次 3 次，将 带 有 蜜 环 菌 菌 索 的 天 麻 块 茎 剪 成 1 c m 的 小 段 或 小 块，在 链 霉 素 液 中 浸 泡片 刻，用 无 菌 滤 纸 吸 干 表 面 附 着 水 后，同 菌 索 制 备 法 进 行 培 养 和 分 离 获 得 纯 化 后 的 母 种。5.2.3.3 子 实 体 制 备 法清 除 蜜 环 菌 子 实 体 表 面 泥 土，切 除 菌 柄 基 部，用 7 5%酒 精 擦 拭 表 面 2 次 3 次，将 子 实 体 撕 开，在 菌盖 和 菌 柄 交 界 处 或 菌 褶

18、处 挑 取 小 块 组 织 接 入 P D A 培 养 基 中，在 2 5 培 养 5 d 7 d，在 接 种 处 刚 产 生 菌 索 分枝 时，同 菌 索 制 备 法 进 行 培 养 和 分 离 获 得 纯 化 后 的 母 种。5.2.3.4 孢 子 制 备 法开 伞 的 子 实 体 截 去 菌 柄 的 下 半 部，用 7 5%的 酒 精 擦 拭 表 面 2 次 3 次，然 后 菌 褶 向 下 插 在 孢 子 收 集 装置 的 支 架 上，将 支 架 置 于 无 菌 培 养 皿 中，盖 上 钟 罩，收 集 孢 子。待 孢 子 落 于 皿 内 后，用 无 菌 水 制 成 孢 子悬 液 接 种

19、于 P D A 培 养 基，在 2 5 培 养 3 d d 天，在 接 种 点 处 开 始 发 出 少 许 绒 状 白 色 菌 丝 后，同 菌 索 制 备 法进 行 培 养 和 分 离 获 得 纯 化 后 的 母 种。5.2.4 鉴 定5.2.4.1 萌 发 菌 萌 发 实 验挑 取 萌 发 菌 母 种 连 同 培 养 基 少 许，转 接 在 经 灭 菌 处 理 的 阔 叶 树 树 叶 上，2 5 培 养 至 菌 丝 长 满 树 叶 时，取 长 满 萌 发 菌 的 树 叶 和 天 麻 蒴 果 拌 匀，放 入 组 培 瓶 内 海 绵 上 于 2 2 培 养，期 间 加 无 菌 水 保 持 海 绵

20、 湿 润。2 个 3 个 月 后，若 有 原 球 茎，证 明 该 菌 种 即 为 萌 发 菌，即 可 对 其 扩 繁。5.2.4.2 蜜 环 菌 伴 栽 试 验采 取 天 麻 常 规 种 植 的 拌 栽 试 验 对 蜜 环 菌 进 行 鉴 定。5.3 原 种 的 制 备5.3.1 原 种 培 养 基 配 方萌 发 菌 和 蜜 环 菌 原 种 培 养 基 配 方 应 符 合 附 录 A.2 的 规 定。5.3.2 萌 发 菌 原 种 的 制 备将 萌 发 菌 原 种 培 养 基 装 入 菌 种 袋 或 瓶 中，装 袋 或 瓶 以 容 积 的 4/5 为 宜，高 压 灭 菌 1.5 h 2 h 或

21、 常 压 灭菌 8 h 1 0 h 后，移 入 预 冷 室 冷 却 至 室 温，接 入 萌 发 菌 母 种，2 5 培 养 至 菌 丝 长 满 整 个 培 养 基 后，所 得 菌种 即 为 原 种。5.3.3 蜜 环 菌 原 种 的 制 备将 蜜 环 菌 原 种 培 养 基 装 入 菌 种 袋 或 瓶 中，同 萌 发 菌 原 种 的 制 备 方 法，2 5 培 养 至 菌 索 长 满 整 个 培 养基 后，所 得 菌 种 即 为 原 种。5.4 栽 培 种 的 制 备D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 155.4.1 栽 培 种 培 养 基 配 方萌 发 菌 和 蜜 环 菌 栽

22、 培 种 培 养 基 配 方 应 符 合 附 录 A.3 的 规 定。5.4.2 萌 发 菌 栽 培 种 的 制 备将 萌 发 菌 母 种 接 入 P D A 液 体 培 养 基 中，2 5 培 养 5 d 7 d 后，将 培 养 好 的 液 体 接 入 萌 发 菌 栽 培 种 培 养基 中，或 将 萌 发 菌 母 种 直 接 接 入 萌 发 菌 栽 培 种 培 养 基 中，2 5 培 养 至 菌 丝 长 满 整 个 培 养 基 后，即 得 萌 发菌 栽 培 种。5.4.3 蜜 环 菌 栽 培 种 的 制 备5.4.3.1 蜜 环 菌 枝 条 菌将 直 径 0.5 c m 1.5 c m 的

23、树 枝 截 成 1.5 c m 2.5 c m 的 小 段，在 水 中 浸 泡 4 8 h，使 树 枝 充 分 吸 水 后 装 入 瓶中，装 入 量 以 瓶 容 积 的 4/5 为 宜，再 加 水 至 瓶 口 后 封 盖，高 温 灭 菌 后 接 入 蜜 环 菌 固 体 或 经 活 化 培 养 的 液体 原 种，2 5 培 养 至 菌 索 长 满 所 有 培 养 基，即 得 蜜 环 菌 栽 培 种。5.4.3.2 蜜 环 菌 固 体 干 菌将 蜜 环 菌 栽 培 种 培 养 基 装 入 菌 种 袋 或 瓶 中，同 萌 发 菌 原 种 的 制 备 方 法，2 5 培 养 至 菌 索 长 满 整 个

24、 培养 基 后，即 得 蜜 环 菌 栽 培 种。5.5 菌 种 保 藏5.5.1 母 种 保 藏萌 发 菌 和 蜜 环 菌 保 藏 条 件 相 同，于 1 4 下 冰 箱 或 冰 柜 中 保 藏。5.5.2 原 种 和 栽 培 种 保 藏萌 发 菌 和 蜜 环 菌 保 藏 条 件 相 同，4 6 下 保 存 在 贮 藏 库 中。6 菌 种 质 量6.1 母 种 质 量萌 发 菌 母 种 菌 丝 应 长 满 斜 面 培 养 基，粗 壮 均 匀，无 杂 菌 和 异 味。蜜 环 菌 母 种 菌 索 应 长 满 斜 面 培 养 基，粗 壮 均 匀，有 锁 状 联 合，无 杂 菌 和 异 味。6.2 原

25、 种、栽 培 种 质 量无 杂 菌，无 害 虫，上 下 一 体，袋（瓶）壁 有 少 量 水 珠、无 积 水，菌 块 完 整、不 萎 缩、不 散 碎、有 弹性、无 异 味。萌 发 菌 原 种 和 栽 培 种 颜 色 洁 白，蜜 环 菌 原 种 和 栽 培 种 呈 白 色 至 棕 红 色。7 入 库制 备 好 的 菌 种，经 检 验 合 格 后 及 时 入 库。7.1 记 录生 产 中 各 环 节 应 详 细 记 录 备 案。D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 167.2 留 样各 级 菌 种 都 应 留 样 备 查，母 种 留 样 的 数 量 应 为 每 个 批 号 3 支 5

26、支，原 种 和 栽 培 种 每 批 次 5 瓶（袋）7 瓶（袋），于 0 6 下 贮 存 至 正 常 生 产 条 件 下 该 批 菌 种 生 产 出 天 麻 止。8 标 志、包 装、运 输、贮 藏8.1 标 志原 种 和 栽 培 种 标 志 内 容 应 包 含 产 品 名 称、生 产 单 位、生 产 许 可 证 号、保 质 期、保 藏 条 件。8.2 包 装包 装 材 料 应 按 G B 4 8 0 6.7 规 定 的 要 求 执 行。8.3 运 输在 0-1 5 条 件 下 运 输，不 得 与 有 毒 有 害 物 品 混 合 运 输。9 生 产 档 案建 立 生 产 档 案，保 存 不 少

27、于 2 年。_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 17附 录 A（规 范 性 附 录）培 养 基 配 方A.1 P D A 培 养 基马 铃 薯 2 0 0 g，葡 萄 糖 2 0 g，琼 脂 2 0 g，水 1 0 0 0 m l，p H 自 然。A.2 原 种 培 养 基A.2.1 萌 发 菌 原 种 培 养 基青 冈、板 栗 等 阔 叶 树 的 木 屑 7 7.5%、麸 皮 1 5%、玉 米 粉 5%、葡 萄 糖 1%、石 膏 粉 1%、磷 酸

28、二 氢 钾 0.3%、硫 酸 镁 0.2%。A.2.2 蜜 环 菌 原 种 培 养 基阔 叶 树 木 屑 8 7.5%、麸 皮 1 0%、葡 萄 糖 1%、石 膏 粉 1%、磷 酸 二 氢 钾 0.3%、硫 酸 镁 0.2%。A.3 栽 培 种 培 养 基A.3.1 萌 发 菌 栽 培 种 培 养 基青 冈、板 栗 等 阔 叶 树 的 木 屑 7 7.5%、麸 皮 1 5%、玉 米 粉 5%、葡 萄 糖 1%、石 膏 粉 1%、磷 酸 二 氢 钾 0.3%、硫 酸 镁 0.2%。A.3.2 蜜 环 菌 栽 培 种 培 养 基阔 叶 树 木 屑 或 阔 叶 树 枝 8 7.5%、麸 皮 1 0%、葡 萄 糖 1%、石 膏 粉 1%、磷 酸 二 氢 钾 0.3%、硫 酸 镁 0.2%。D B 6 1 1 0/T 0 0 8 2 0 2 1