DB51 T 2631-2019 赤枫组培繁育技术规程.pdf

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1、DB*/T*-2014 - 1 - ICS 65.020.40 B 61 四 川 省 地 方 标 准 DB51 DB51/T 2631 2019 赤枫 组培繁育技术规程 2019-12-17 发布 2020-01-01 实 施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 2631 2019 - I - 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 场地要求 . 1 4 培养基配制 . 2 5 组织培养 . 2 6 炼苗移栽 . 3 7 出圃 . 4 附录 A（资料性附录） MS 培养基配制表 . 5 附录 B（ 资料 性附录） 赤枫 组培瓶苗的质量分级 . 6 附录

2、 C（ 资料 性附录） 赤枫 出圃苗的质量分级 . 7 DB51/T 2631 2019 - II - 前 言 本标准按 GB/T1.1-2009 标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由四川省林业 和草原局 提出并归口。 本标准由四川省林业 和草原局 负责解释。 本标准由四川省市场监督管理局批准。 本 标 准起草 单位：四川七彩林科股份有限公司 本标准主要起草人员： 谢松林、 马建华、沈香兰、李飞鸿、罗雪梅、王小辉、朱晓菲、许艺、何程相、 丁龙梅、杨小霞、向明剑、黄良伟、张艳 DB51/T 2631 2019 - 1 - 赤枫组培繁育技术规程 1 范围 本标准规定了赤枫（ Acer pal

3、matum Sangokaku ）组培快繁技术 的场地要求、培养基配制、组织 培养、炼苗移栽及出圃等。 本标准适用于赤枫组培 育 苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB 6001-1985 育苗技术规程 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 SN/T 2586-2010 进出境组培苗检疫规程 DB51/T1899-2014 千层金组培快繁育苗技术规程 3 场地要求 3.1 组 培室 3.1.1 操作间 操作间主要进行培

4、养基和培养母液的配制及培养基灭菌工作。配制培养基所需化学试剂为 附 表 A.1 所列及 NaOH、 HCl、蔗糖和琼脂等。操作间的配备标准参照 DB51/T1899-2014的规 定 执 行 。 3.1.2 缓冲间 是 从 外部环境到内部洁净环境的过度空间。缓冲间的 配备标准参照 DB51/T1899-2014的规定 执行。 3.1.3 接种室 组培材料的灭菌、接种、继代和生根工作。要求无菌环境。接种室的配备标准参照 DB51/T1899-2014 的规定 执行。 3.1.4 培养间 主要进行植物材料的培养。 要求能 控温控湿，并控制光培养和暗培养的时间，为无菌洁净空间。培 养间的配备标准参照

5、 DB51/T1899-2014的规定 执行。 3.2 炼苗区 是植物材料移栽 前的 过度空间。搭建荫棚 ，有遮阴 喷水设施 。保持温 度 25 30，湿度 85%以上， 光照 3000Lux的半封闭状态。 DB51/T 2631 2019 - 2 - 3.3 苗圃 栽植床排水良好，栽植床采用深沟高畦 ，畦宽 1.6m 2.0m，沟深 20cm 30cm，宽 20cm，沟与沟之间 相连，利于排水。应有定时喷灌设施、排水设施、降温设施、增温设施和补光设施。大田苗床须搭建小 拱棚，保持温度 25 30，湿度 85%以上。 苗圃的建设 按 照 GB 6001-1985的规定 执行。 4 培养基配制

6、4.1 培养容器和接种器械的清洗 培养容器和接种 器械先用洗涤剂 浸泡过夜，后用清 水冲 洗至无泡沫。干燥后备用。 4.2 培养基 配制 4.2.1 培 养 基母液的配制 培养基采用 MS基本培养基，所需各元素见 附录 A。 先按照标准 配制大量元素 、微量元素 、铁盐 、有 机 成分 母液 ，再按照工 作液浓度分 别取用 各 母液 ，同时添加 30g/L蔗糖 ， 6g/L琼脂 ，加热 至 100 后分装 。 4.2.2 激素母液配制 激素采用 6-BA、 IAA和 NAA。 6-BA用 1mol/L NaOH预溶 ， IAA和 NAA用 95%乙醇预溶 然后配制成 1mg/ml 激素 母液

7、。 4.2.3 初代培养基的配制 初代培养基配方为 MS+0.5mg/L IAA。用 1mol/L NaOH调节 pH值为 6.5。分装至 240ml组培瓶中。 配制方法 依照 LY/T 1882-2010的规定执行 。 4.2.4 继代培养基的配制 继代培养基配方为 MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA。用 1mol/L NaOH调节 pH值为 6.5。分装至 240ml 组培瓶中。 配制方法 依照 LY/T 1882-2010的规定执行 。 4.2.5 生根培养基的配制 生根培养基配方为 1/2MS+0.3mg/L NAA。用 1mol/L NaOH调节 pH值为 6.2

8、。分装至 240ml组培瓶中。 配制方法 依照 LY/T 1882-2010的规定执行 。 4.3 培养基灭菌 将分装好的培养基放入灭菌筐中，在 121， 0.5 MPa的环境中灭菌 20min后，冷却凝固后，保存在 无菌环境中备用。 5 组织培养 5.1 外植体来源 选用观赏价值高的优良单株上 的枝条 。 DB51/T 2631 2019 - 3 - 5.2 外植体准备 5.2.1 采集 外植体的采集时间为 6月份的晴天早上。选用生长 健壮、无病虫害、品种纯正母株的当年生枝条， 去除叶片，剪成 3cm左右的带芽茎段。 5.2.2 预处理 将切好的外植体先用洗涤剂浸泡 15min，再在流水下冲

9、洗 60min 120min，直至去除多余泡沫。用滤 纸滤干备用。 5.2.3 表面消毒 将处理好的外植体在超净工作台上，用 50%可湿性多菌灵粉剂 400倍液浸泡 1 h后， 75乙醇灭菌 30 s，最后 0.1升汞灭菌处理 10min。无菌水清洗 5遍后，用无菌滤纸吸干多余水分备用。 5.3 初代培养 在超净工作台上，将灭菌好 的外植体垂直插入 初代 培养基中 。使腋芽芽点位于培养基之上。在光照 2000Lux，光培养 /暗培养为 16h/8h,温度 24，湿度 70%的培养室中培养 30d 40d。 5.4 继代培养 待萌发的腋芽长至 2cm 3cm, 在 超净 工作台上将萌发的腋芽从原

10、外植体上切下，然后转接至继代 培养基中进行继代增殖培 养。选用 240ml 的组培瓶进行继代增殖，每瓶培养基 20ml 30ml，接种密度 为 7 株 /瓶，增殖周期 40d。培养条件同 5.3 的规定。 5.5 生根培养 待增殖后的丛生芽单芽长至 2cm 3cm时，在超净工作台上切割单芽转接于生根培养基上。 培养条件 同 5.3的规 定，培养 30d。 6 炼苗移栽 6.1 炼苗 选取高度 5cm 8cm，单株根系数 5条以上且叶片数 5片以上的组培苗进行炼苗 。组培瓶苗的质量分级 见附录 B。在炼苗区放置 6d后，拧松组培瓶盖，再放置 3d后，完全打开瓶盖，放置 7d左右。期间保持适 当湿

11、度，注意遮阳，防止高温灼伤。 6.2 移 栽 取出组培苗，用清水洗去基部培养基，用 1000ppm可湿性多菌灵粉剂 浸泡 3min 5min后移栽至 混合 基质中，其体积比为： V（草炭）： V（蛭石）： V（珍珠岩） =1:1:1。移栽后喷足定根水，遮阴保湿， 防止前期高温灼伤，后期逐渐放宽 温光条件，使其 与外界环 境一致。每隔 5d 7d用 800ppm的 可湿性多菌 灵粉剂 或 1000ppm代森铵或 600ppm百菌清等喷洒防病。 6.3 后期管理 6.3.1 水分管理 DB51/T 2631 2019 - 4 - 移栽前期保持土壤湿润，不可偏干。夏季应在早晚浇水，入秋后土壤稍干为宜

12、，冬季减少水分。 6.3.2 施肥管理 移栽前期避免施肥，移栽一月后可视 苗木情况适当施肥。夏季以氮肥为主，秋季以磷、钾混合肥为 主。每 2周淋施一次。 6.3.3 病虫害管理 按照 GB 6001-1985育苗技术规程的标准执行。 7 出圃 7.1 出圃要求 7.1.1 苗高 15cm以上，具 5条 以上白嫩粗壮完整根，地径 2mm以上。 7.1.2 要 求小苗 长 势健康良 好，株型匀称，茎秆健壮、叶色正常，无徒长、衰老和受抑制现象，根系 发达，颜色正常，无衰老、病害、生长异常现象，无病虫害，无黄叶、烂叶，无机械损伤。 7.1.3 出圃苗移栽时须保护好根系。 7.2 出圃苗质量分级 出圃苗

13、的质量分级见附录 C。 7.3 出圃苗 检疫 出圃苗的检疫依照 SN/T 2586-2010的规定执行 。 DB51/T 2631 2019 - 5 - A A 附 录 A （资料性附录） MS 培养基配制表 表 A.1 MS培养基所需各物质含量表 MS培养基按表 A.1进行配制。 名称 工作液浓度（ mg/L） 母液浓度 （ g/L） 1L 培养基取用量 大量元素（ 10 ） NH4NO3 1650 16.5 100ml KNO3 1900 19 MgSO4 7H2O 370 3.7 CaCl 2H2O 440 4.4 KH2PO4 170 1.7 微量元素（ 100 ） KI 0.83 0

14、.083 10ml H3BO3 6.2 0.62 MnSO4 4H2O 22.3 2.23 ZnSO4 7H2O 8.6 0.86 Na2MoO4 2H2O 0.25 0.025 CuSO4 5H2O 0.025 0.0025 CoCl2 6H2O 0.025 0.0025 铁 盐（ 100 ） FeSO4 7H2O 27.8 2.78 10ml Na 2-EDTA 2H2O 37.3 3.73 有机成分（ 100 ） 肌醇 100 10 10ml 烟酸 0.5 0.05 盐酸吡哆醇（维生素 B6） 0.5 0.05 盐酸硫胺素（维生素 B1） 0.1 0.01 甘氨酸 2 0.2 DB51/

15、T 2631 2019 - 6 - B B 附 录 B （ 资料 性 附录） 赤枫组培瓶苗的质量分级 表 B.1 赤枫组培瓶苗的质量分级 I级 II级 III级 根数（用符号 RZ表示 ） RZ 7 6 RZ7 5 RZ6 苗高（用符号 HZ表示） 7cm HZ 8cm 6cm HZ7cm 5cm HZ6cm 叶片数（用符号 L表示） L 7 6 L7 5 L6 茎粗（用符号 S表示） S 2mm 1.5mm S2mm 1 S1.5mm 污染情况 完全无污染 根部轻微染菌，面积 5% 根部少量污染，面积 10% 整体感 长势健壮，株型匀称，色泽 翠绿，根部无愈伤组织附着， 根系颜色正常 长势良好，株型匀称，叶 色正常，根部无愈伤组织 附着，根系颜色正 常 长势 正常 ，株型较匀称，基 部少量 黄叶，根部少量愈伤 组织附着，根系颜色正常 DB51/T 2631 2019 - 7 - 附 录 C （ 资料 性附录） 赤枫组培 出圃苗的质量分级 表 C.1 赤枫组培出圃苗的质量分级 I级 II级 III级 根数（用符号 RC表示） RC 15 10 RC15 5 RC10 株高（用符号 HC表示） HC 25cm 20cm HC25cm 15cm RC20cm 地径（用符号 SC表示） SC 4mm 3mm SC4mm 2mm SC3mm