ISO 17792-2006 Milk milk products and mesophilic starter cultures - Enumeration of citrate-fermenting lactic acid bacteria - Colony-count technique at 25C《奶和奶制品.pdf

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1、 Numros de rfrence ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) ISO et FIL 2006NORME INTERNATIONALE ISO 17792 FIL 180 Premire dition 2006-08-01Lait, produits laitiers et ferments msophiles Dnombrement des bactries lactiques fermentant le citrate Technique de comptage des colonies 25 C Milk, milk products and m

2、esophilic starter cultures Enumeration of citrate-fermenting lactic acid bacteria Colony-count technique at 25 C ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fi

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7、e, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO, soit de la FIL aux adresses respectives ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Auguste Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01

8、11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.org E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ii ISO et FIL 2006 Tous droits rservsISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) ISO et FIL 2006 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-pro

9、pos. iv Avant-propos v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et dfinitions 1 4 Principe 2 5 Diluants, milieux de culture et ractifs. 2 6 Appareillage et verrerie 6 7 chantillonnage 7 8 Prparation et ensemencement 7 8.1 Prparation de lchantillon et de la prise dessai 7 8.2 Examen

10、microscopique. 7 8.3 Prparation de la dilution primaire . 8 8.4 Prparation des dilutions dcimales 8 8.5 Ensemencement. 8 9 Mode opratoire 8 9.1 Dnombrement des diffrentes espces de coques fermentant le citrate. 8 9.2 Dnombrement des leuconostocs 9 9.3 Confirmation 9 10 Calcul et expression des rsult

11、ats 9 10.1 Calcul. 9 10.2 Expression des rsultats dessai 10 10.3 Exemple de calcul. 11 11 Fidlit. 11 12 Rapport dessai . 11 Bibliographie 12 ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) iv ISO et FIL 2006 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondia

12、le dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouver

13、nementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans l

14、es Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 7

15、5 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et aver

16、ti de leur existence. LISO 17792 FIL 180 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration internationale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) ISO et FIL 200

17、6 Tous droits rservs v Avant-propos La FIL (Fdration internationale de laiterie) est une fdration mondiale du secteur laitier avec un Comit National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comit National a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux tech

18、niques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchantillonnage pour le lait et les produits laitiers. Les projets de Normes internationales adopts par les quipes dAction et les Comits permanents sont soumis aux Comits Nationaux pour vote. Leur publication comme

19、 Normes internationales requiert lapprobation de 50 % au moins des Comits Nationaux votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne

20、pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. La Norme internationale ISO 17792 FIL 180 a t labore par le comit technique ISO/TC 34 Produits alimentaires, sous-comit SC 5 Lait et produits laitiers, et la Fdration internationale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointe

21、ment par lISO et la FIL. Lensemble des travaux a t confi lquipe dAction mixte ISO-FIL, Ferments de bactries lactiques du comit permanent Mthodes microbiologiques danalyse, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur B. Bianchi-Salvadori (Italie). Cette premire dition de lISO 17792 FIL 180 annul

22、e et remplace la premire dition de la FIL 180:1997, qui a fait lobjet dune rvision technique. NORME INTERNATIONALE ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) ISO et FIL 2006 Tous droits rservs 1 Lait, produits laitiers et ferments msophiles Dnombrement des bactries lactiques fermentant le citrate Technique d

23、e comptage des colonies 25 C 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie des mthodes de dnombrement des bactries lactiques fermentant le citrate, laide dune technique par comptage des colonies 25 C. Ces mthodes sont applicables aux ferments lactiques et aux produits laitiers dans

24、lesquels ces micro-organismes caractristiques sont prsents. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence s

25、applique (y compris les ventuels amendements). ISO 565, Tamis de contrle Tissus mtalliques, tles mtalliques perfores et feuilles lectroformes Dimensions nominales des ouvertures ISO 7218, Microbiologie des aliments Rgles gnrales pour les examens microbiologiques ISO 8261 FIL 122, Lait et produits la

26、itiers Lignes directrices gnrales pour la prparation des chantillons pour essai, de la suspension mre et des dilutions dcimales en vue de lexamen microbiologique 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 bactrie fermentant le citra

27、te bactrie lactique homofermentaire ou htrofermentaire, formant des colonies lenticulaires dun diamtre compris entre 0,5 mm et 1,2 mm dans des milieux slectifs contenant du citrate et les indicateurs spcifiques spcifis dans la prsente Norme internationale NOTE Les bactries lactiques msophiles fermen

28、tant le citrate les plus souvent rencontres appartiennent aux espces suivantes. a) Pour les lactocoques: Lactococcus lactis subsp. lactis biovar diacetylactis. Aspect microscopique: Les lactocoques sont gnralement des cellules sphriques ou ovodes (de 0,4 m 1,0 m), en paires ou en chanes. Elles sont

29、asporules, Gram-positifs, non mobiles et catalase- ngative. ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) 2 ISO et FIL 2006 Tous droits rservsb) Pour les leuconostocs: Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris; Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides; Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum; Leucono

30、stoc lactis. Aspect microscopique: Les leuconostocs sont gnralement des cellules sphriques ou ovodes (de 0,4 m 0,5 m), en paires ou en chanes. Elles sont asporules, Gram-positifs, non mobiles et catalase- ngative. 4 Principe 4.1 Ensemencement de dilutions dcimales de lchantillon dans: a) Milieu de N

31、ickels et Leesment 4modifi par Vogensen et al. 3 , suivi dune incubation en arobiose 25 C pendant 72 h, pour le dnombrement des bactries fermentant le citrate (avec halo) ou non (sans halo). Puis, ajout de X-gal suivi dune incubation en arobiose temprature ambiante pendant 24 h pour la diffrenciatio

32、n entre les espces L. lactis subsp. lactis biovar diacetylactis (colonies blanches avec halo) et leuconostoc (colonies bleues avec ou sans halo). b) Milieu de Nickels et Leesment 4plus vancomycine, suivi dune incubation en arobiose 25 C pendant 3 jours 5 jours, pour le dnombrement des leuconostocs.

33、4.2 Comptage des colonies et confirmation par des essais appropris. 4.3 Calcul du nombre de micro-organismes caractristiques par gramme dchantillon, partir du nombre de colonies obtenu sur les botes de Ptri des niveaux de dilution permettant dobtenir un rsultat significatif. 5 Diluants, milieux de c

34、ulture et ractifs 5.1 Gnralits Sauf spcification contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue et de leau distille ou dminralise, ou de puret quivalente. Les essais servant dterminer si leau est approprie ou non pour des applications microbiologiques ont t publis 2 . ATTEN

35、TION Certains ractifs sont toxiques et/ou dangereux et peuvent provoquer des allergies par inhalation ou par contact avec la peau. 5.2 Composants de base Voir lISO 8261 FIL 122 et lISO 7218. 5.3 Diluant Voir ISO 8261 FIL 122. ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) ISO et FIL 2006 Tous droits rservs 3 5.4

36、 Milieux de culture 5.4.1 Milieu de Nickels et Leesment + X-gal 3NOTE Le principal problme de lusage du milieu de Nickels et Leesment modifi est la faible croissance des bactries lactiques ne fermentant pas le citrate. La croissance de ces bactries est importante, mais ces bactries sont trop petites

37、 et risquent dtre confondues avec les particules du citrate de calcium insoluble. 5.4.1.1 Milieu de base 5.4.1.1.1 Composition Digestion trypsique de casine 20,0 g Extrait de levure 5,0 g Glatine 2,5 g Glucose (C 6 H 12 O 6 ) 5,0 g Lactose (C 12 H 22 O 11 ) 5,0 g Chlorure de sodium (NaCl) 4,0 g Citr

38、ate trisodique dihydrat (C 6 H 5 Na 3 O 7 ,2H 2 O) 2,0 g Agar (de 12,0 g 15,0 g) aEau 1 000 ml aSelon le pouvoir glifiant de lagar. 5.4.1.1.2 Prparation Mettre en suspension dans leau chacun des ingrdients sparment. Chauffer jusqu bullition en agitant frquemment afin de dissoudre compltement tous le

39、s ingrdients. Ensuite, les mlanger soigneusement. Ajouter de leau jusqu un volume de 1 000 ml. Rpartir le milieu dans des flacons et striliser lautoclave rgl 121 C 1 C pendant 15 min. Si ncessaire, ajuster le pH laide dun ractif dajustement (5.5) et du pH-mtre (6.7), de manire quaprs la strilisation

40、, le pH ait une valeur comprise entre 6,6 et 6,7. 5.4.1.2 Solution de lactate de calcium 5.4.1.2.1 Composition Lactate de calcium pentahydrat (C 6 H 10 CaO 6 ,5H 2 O) 8,0 g Eau 100 ml 5.4.1.2.2 Prparation Dissoudre dans leau le lactate de calcium pentahydrat en chauffant. Striliser lautoclave rgl 12

41、1 C 1 C pendant 15 min. ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) 4 ISO et FIL 2006 Tous droits rservs5.4.1.3 Suspension de citrate de calcium 5.4.1.3.1 Composition Dicitrate tricalcique ttrahydrat (C 12 H 10 Ca 3 O 14 ,4H 2 O) 13,3 g Carboxymthylcellulose (CMC) 0,8 g Eau 100 ml 5.4.1.3.2 Prparation Dans un

42、 mortier, broyer le CMC et le citrate de calcium ttrahydrat, pralablement pass dans un tamis ayant une ouverture de maille nominale de 0,8 mm (voir lISO 565). Ajouter lentement de leau prchauffe environ 45 C jusqu obtenir un volume de 100 ml. Mlanger pendant 10 min et filtrer travers un chiffon de c

43、oton. Striliser le filtrat lautoclave rgl 121 C 1 C pendant 15 min. NOTE Environ 30 % du citrate de calcium est perdu au cours de la filtration. 5.4.1.4 Srum de levain Prparer le srum de levain, en ensemenant un srum de levain L-, D- ou LD dans un lait crm ou un lait crm reconstitu dans un autoclave

44、 durant 24 h 25 C 1 C. Filtrer travers un papier-filtre et striliser le filtrat 115 C 1 C pendant 15 min. liminer les sdiments par dcantation et striliser de nouveau 200 ml de filtrat. 5.4.1.5 Solution de X-gal ATTENTION Le X-gal et le NMP sont toxiques et doivent tre manipuls sous une hotte aspiran

45、te. 5.4.1.5.1 Composition 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl- -D-galactopyranoside (X-gal) 400 mg N-Mthyl-2-pyrrolidone (NMP) 100 ml 5.4.1.5.2 Prparation Dissoudre le X-gal dans le NMP et striliser par filtration (voir 6.13) travers un filtre Durapore (par exemple Millipore) 1)de 0,45 m. Conserver la soluti

46、on 20 C. 1) Millipore est le nom du fabricant du produit commercialis. Cette information est donne par souci de commodit lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne saurait constituer un engagement de lISO ou de la FIL lgard de ce produit. ISO 17792:2006(F) FIL 180:2006(F) I

47、SO et FIL 2006 Tous droits rservs 5 5.4.1.6 Milieu complet 5.4.1.6.1 Composition Milieu de base (5.4.1.1) 900 ml Solution de lactate de calcium (5.4.1.2) 100 ml Suspension de citrate de calcium (5.4.1.3) 50 ml Srum de levain (5.4.1.4) 100 ml 5.4.1.6.2 Prparation Juste avant utilisation, faire fondre le milieu de base (5.4.1.1) dans de leau bouillante. Lorsquil est fondu, refroidir le milieu de base une temprature comprise entre 48 C et 50 C. Prchauffer la solution de lactate de calcium (5.4.1.2), l