《中国兽药典》二〇一五年版（一部） 解读汪 霞wangxia@.ppt

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1、中国兽药典二一五年版 （一部） 解读 汪 霞 ,主 要 内 容 一、凡例 二、紫外-可见分光光度法 三、高效液相色谱法（气相色谱法） 四、兽药质量标准分析方法验证指导原则 五、分析方法验证转移确认,凡 例 （总则）,一、中华人民共和国兽药典简称中国兽药典，依据兽药管理条例组织制定和颁布实施，是国家监督管理兽药质量的法定技术标准。中国兽药典一经颁布实施，其同品种的上版标准或其原国家标准即同时停止使用。除特别注明版次外，中国兽药典均指现行版中国兽药典。通用的、效期内最低标准,凡 例 （总则）,二、兽药典收载的凡例、附录对兽药典以外的其他兽用化学、抗生素、生化药品等国家标准具同等效力。其他国家标准：

2、兽药国家标准 化学药品、中药卷第一册、兽药国家标准汇编（兽药地方标准上升国家标准 第一、二、三册）、进口兽药质量标准、农业部公告（未成册）等未收载在本版兽药典中的标准。,凡 例 （总则）,凡 例 （总则）,三、凡例是为正确使用中国兽药典进行兽药质量检定的基本原则，是对中国兽药典正文、附录及与兽药质量检定有关的共性问题的统一规定。凡例是解释和正确使用中国兽药典进行质量检定的基本原则，并把正文品种、附录及质量检定有关的共性问题加以规定，避免在全书中重复说明。凡例中的有关规定具有法定的约束力。,凡 例 （总则）,四、凡例和附录中采用“除另有规定外”这一用语，表示存在与凡例或附录有关规定不一致的情况时

3、，则在正文中另作规定，并按此规定执行。,凡 例 （总则）,六、正文所设各项规定是针对符合兽药生产质量管理规范的产品而言。任何违反兽药GMP或有未经批准添加物质所生产的兽药，即使符合中国兽药典或按照中国兽药典暂不能将其添加物或相关杂质定性为何物质，亦不能认为其符合规定。,正文： 质量标准是按照批准的处方来源、生产工艺、贮藏运输条件所制定的、用以检测兽药质量。,制法：所有兽药的生产工艺应经验证，并经国务院兽医行政管理部门批准，生产过程均应符合兽药GMP的要求。,检查：各杂质检查项目系指该兽药在按既定工艺进行生产和正常贮藏过程中可能含有或产生并需要控制的杂质，如残留溶剂、有关物质等，如果改变生产工艺

4、时需增修订有关项目。,凡 例（正文）,八、中国兽药典各品种项下收载的内容为标准正文。正文系根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的处方来源、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用以检测兽药质量是否达到用药要求并衡量其质量是否稳定均一的技术规定。,凡 例（正文）,申请文号仿产品 不是仿标准,凡 例（正文）,九、正文内容根据品种和剂型的不同，按顺序可分别列有：（1）品名（包括中文名、汉语拼音与英文名）；（2）有机药物的结构式；（3）分子式与分子量；（4）来源或有机药物的化学名称；（5）含量或效价规定；（6）处方；（7）制法；（8）性状；（9）鉴别；（10）检查；（11）含量测定；（12）类别；（1

5、3）作用与用途；（14）用法与用量；（15）注意事项；（16）不良反应；（17）休药期；（18）规格；（19）贮藏；（20）制剂等。,凡 例（附录）,十、附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。制剂通则系按照兽药剂型分类，针对剂型特点所规定的基本技术要求；通用检测方法系各正文品种进行相同检查项目的检测时所应采用的统一的设备、程序、方法及限度等；指导原则系为执行兽药典、考察兽药质量、起草与复核兽药标准等所制定的指导性规定。,凡 例（附录）,十四、制法项下主要记载兽药的重要工艺要求和质量管理要求。（1）所有兽药的生产工艺应经验证，并经国务院兽医行政管理部门批准，生产过程均应符合兽药GMP的要

6、求。（2）来源于动物组织提取的兽药，其所用动物种属要明确，所用脏器均应来自经检疫的健康动物，涉及牛源的应取自无牛海绵状脑病地区的健康牛群；来源于人尿提取的兽药，均应取自健康人群。上述兽药均应有明确的病毒灭活工艺要求以及质量管理要求。（3）直接用于生产的菌种、毒种、来自人和动物的细胞、DNA重组工程菌及工程细胞，来源途径应经国务院兽医行政管理部门批准并应符合国家有关的管理规范。,凡 例（项目与要求）,十五、性状项下记载兽药的外观、臭、溶解度以及物理常数等。（1）外观性状是对兽药的色泽和外表感观的规定。,凡 例（项目与要求）,十五、（2）溶解度是兽药的一种物理性质。 对在特定溶剂中的溶解性能需做质

7、量控制时，在该品种项下另作具体规定。试验法：除另有规定外，称取研成细粉的供试品或量取液体供试品，置252一定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解。,凡 例（项目与要求）,十六、鉴别项下规定的试验方法，系根据反映该兽药某些物理、化学或生物学等特性所进行的兽药鉴别试验，不完全代表对该兽药化学结构的确证。,凡 例（项目与要求）,十七、检查项下包括反映兽药的安全性与有效性的试验方法和限度、均一性与纯度等制备工艺要求等内容。 安全性检查项目： 制法要求、有关物质、高聚物、残留溶剂、抑菌剂的控制、溶液颜色与澄清度、细菌内毒素或热

8、原、无菌、过敏反应、异常毒性、微生物限度、无机离子、渗透压摩尔浓度 有效性检查项目： 溶出度、释放度、含量均匀度、组分测定、崩解时限、融变时限、乳化稳定性、溶解性,凡 例（项目与要求）,采用色谱法检测有关物质时，杂质峰（或斑点）不包括溶剂、辅料或原料药的非活性部分等产生的色谱峰（或斑点）。必要时，可采用适宜的方法对上述非杂质峰（或斑点）进行确认。处方中含有抑菌剂的注射剂和眼用制剂，应建立适宜的检测方法对抑菌剂的含量进行控制。正文已明确列有抑菌剂检查的品种必须依法对产品中使用的抑菌剂进行该项检查，并应符合相应的限度规定。,凡 例（项目与要求）,各类制剂，除另有规定外，均应符合各制剂通则项下有关的

9、各项规定。例子：【检查】 其他 应按照各制剂通则项下规定的检验项目进行检查。各制剂通则项下带【 】的要 做，不带的不做。如软膏剂含量均匀度。,凡 例（项目与要求）,十八、含量测定项下规定的试验方法，用于测定原料药及制剂中有效成分的含量，一般可采用化学、仪器或生物测定方法。原料药：纯度达到98.5%以上时，首选容量法；非水法测定盐酸盐含量时革除醋酸汞的使用，采取电位滴定或是筛选合适的溶媒确保终点突跃指示剂变色明显UV吸收系数小于100的、多组分物质不宜采用紫外分光光度法，多考虑HPLC制剂：容量法、永停滴定法、紫外分光光度法等专属性不强的方法或测定复方制剂含量时，多考虑HPLC法；一般采用外标法

10、，前处理繁杂的，采用内标法。,凡 例（项目与要求）,十九、类别、作用与用途，系指兽药的主要作用与用途或学科的归属划分，不排除在临床实践的基础上作其他类别药物使用。二十、用法与用量，系指常用的给药方法和除另有规定外成年畜禽的常用剂量。,凡 例（项目与要求）,二十一、制剂的规格，系指每一支、片或其他每一个单位制剂中含有主药的重量（或效价）或含量（）或装量。注射液项下，如为“1ml10mg”，系指1ml中含有主药10mg；对于列有处方或标有浓度的制剂，也可同时规定装量规格。,凡 例（项目与要求）,二十二、贮藏项下的规定，系为避免污染和降解而对兽药贮存与保管的基本要求，以下列名词术语表示：遮光 系指用

11、不透光的容器包装，例如棕色容器或黑纸包裹的无色透明、半透明容器；避光 系指避免日光直射；密闭 系指将容器密闭，以防止尘土及异物进入；密封 系指将容器密封以防止风化、吸潮、挥发或异物进入；熔封或严封 系指将容器熔封或用适宜的材料严封，以防止空气与水分的侵入并防止污染；,凡 例（项目与要求）,阴凉处 系指不超过20；凉暗处 系指避光并不超过20；冷处 系指210；常温 系指1030。除另有规定外，贮藏项下未规定温度的一般系指常温。,凡 例（项目与要求）,二十三、制剂中使用的原料药和辅料，均应符合本版兽药典的规定；本版兽药典未收载者，必须制定符合兽药用要求的标准，并需经国务院兽医行政管理部门批准。本

12、版兽药典收载的药用辅料标准是对在品种【类别】项下规定相应用途辅料的基本要求。制剂生产企业使用的药用辅料即使符合本版兽药典药用辅料标准，也应进行药用辅料标准的适用性验证。药用辅料标准适用性验证应充分考虑药用辅料的来源、工艺，以及制备制剂的特点、给药途径、使用对象以及使用剂量等相关因素的影响。,凡 例（项目与要求）,在采用本版兽药典或中国药典收载的药用辅料时，还应考虑制备制剂的给药途径、制剂用途、配方组成、使用剂量等其他因素对其安全性的影响。根据制剂的安全风险的程度，选择相应等级的药用辅料。特别是对注射剂、眼用制剂等高风险制剂，在适用性、安全性、稳定性等符合要求的前提下应尽可能选择供注射用级别的药

13、用辅料。采用本版兽药典或中国药典收载的药用辅料对制剂的适用性及安全性等可能产生影响时，生产企业应根据制剂的特点，采用符合要求的药用辅料，并建立相应的药用辅料标准（更高要求或增加项目）。,凡 例（检验方法和限度）,凡 例（检验方法和限度）,凡 例（检验方法和限度）,凡 例（检验方法和限度）,二十四、采用本版兽药典规定的方法进行检验时应对方法的适用性进行确认。二十五、本版兽药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版兽药典规定的方法为准。,凡 例（检验方法和限度）,二十六、本版兽药典中规定的各种纯度和限

14、度数值以及制剂的重（装）量差异，系包括上限和下限两个数值本身及中间数值。规定的这些数值不论是百分数还是绝对数字，其最后一位数字都是有效位。试验结果在运算过程中，可比规定的有效数字多保留一位数，而后根据有效数字修约规则进舍至规定有效位。计算所得的最后数值或测定读数值均可按修约规则进舍至规定的有效位，取此数值与标准中规定的限度数值比较，以判断是否符合规定的限度。,凡 例（检验方法和限度）,修约口诀：四舍六入五考虑，五后非零则进一，五后全零看五前，五前偶舍奇进一，不论数字多少位，都要一次修约成。例：将12.1498修约到一位小数，12.1将12.1498修约到两位有效位数，12将1.050修约到一位

15、小数，1.0将0.350修约到一位小数，0.4将0.0325修约到两位有效位数，0.032将15.4546修约为两位有效位数，15,凡 例（检验方法和限度）,二十七、原料药的含量（），除另有注明者外，均按重量计。如规定上限为100以上时，系指用本兽药典规定的分析方法测定时可能达到的数值，它为兽药典规定的限度或允许偏差，并非真实含有量；如未规定上限时，系指不超过101.0。例：双羟萘酸噻嘧啶项下，按干燥品计算，含C11H14N2SC23H16O6应为97.0%103%。,凡 例（检验方法和限度）,二十七、制剂的含量限度范围，系根据主药含量的多少、测定方法误差、生产过程不可避免的偏差和贮存期间可能

16、产生降解的可接受程度而制定的，生产中应按标示量100%投料。高投料时要有理由并验证。,凡 例（标准品、对照品）,二十八、标准品系指用于生物检定或效价测定的标准物质，其特性量值一般按效价单位（或g）计；对照品系指采用理化方法进行鉴别、检查或含量测定时所用的标准物质，其特性量值一般按纯度（%）计。标准品与对照品的建立或变更批号，应与国际标准品或原批号标准品或对照品进行对比，并经过协作标定。然后按照国家兽药标准物质相应的工作程序进行技术审定，确认其质量能够满足既定用途后方可使用。标准品与对照品均应按其标签或使用说明书所示的内容使用或贮藏。,凡 例（计量）,二十九、试验用的计量仪器均应符合国务院质量技

17、术监督部门的规定。三十、（2）本版兽药典使用的滴定液和试液，其浓度要求精密标定的滴定液用“XXX滴定液（YYYmol/L）”表示；作其他用途不需精密标定其浓度时，用“YYYmol/L XXX溶液”表示，以示区别。,凡 例（计量）,三十、（3）水浴温度 除另有规定外，均指98100；热水 系指7080；微温或温水 系指4050；室温（常温） 系指1030；冷水 系指210；冰浴 系指约0；放冷 系指放冷至室温。,凡 例（计量）,（7）液体的滴，系在20时，以1.0ml水为20滴进行换算。 （8）溶液后标示的“（110）”等符号，系指固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液；未

18、指明用何种溶剂时，均系指水溶液；两种或两种以上液体的混合物，名称间用半字线“-”隔开，其后括号内所示的“:”符号，系指各液体混合时的体积（重量）比例。例：盐酸溶液（91000）；冰醋酸-水-二乙胺（5:5:2） （10）乙醇未指明浓度时，均系指95（ml/ml）的乙醇。,凡 例（计量）,（9）本版兽药典所用药筛，选用国家标准的R40/3系列，分等如下：筛号 筛孔内径（平均值） 目号一号筛 2000m70m 10目 二号筛 850m29m 24目 三号筛 355m13m 50目 四号筛 250m9.9m 65目五号筛 180m7.6m 80目 六号筛 150m6.6m 100目 七号筛 125m

19、5.8m 120目 八号筛 90m4.6m 150目 九号筛 75m4.1m 200目,凡 例（精确度）,三十二、（1）“精密称定”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一；“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求；“量取”系指可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具。取用量为“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的10。例：取5ml 用量筒取5.0ml 用刻度吸管取5.00ml或精密量取5ml 用移液管,凡 例（精确度）,三十二、（1）称取“0.1g”，系指称取重量可为0.060.14g；称取“2g”，系指称取重

20、量可为1.52.5g；称取“2.0g”，系指称取重量可为1.952.05g；称取“2.00g”，系指称取重量可为1.9952.005g。,凡 例（精确度）,三十二、（2）恒重，除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量；干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30分钟后进行。注意：采用烘箱或恒温减压干燥箱干燥时，应待温度升至规定值并达到平衡后，再放入供试品。减压干燥时，称量瓶盖勿放入减压干燥器中，且开启前应缓缓旋开进气阀，以免气流吹散供试品。,凡 例（精确度）,三十二、（3）试验中规定“按干燥品（

21、或无水物，或无溶剂）计算”时，除另有规定外，应取未经干燥（或未去水、或未去溶剂）的供试品进行试验，并将计算中的取用量按检查项下测得的干燥失重（或水分、或溶剂）扣除。,凡 例（精确度）,三十二、（4）试验中的“空白试验”，系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果；含量测定中的“并将滴定的结果用空白试验校正”，系指按供试品所耗滴定液的量（ml）与空白试验中所耗滴定液的量（ml）之差进行计算。,凡 例（精确度）,三十二、（5）试验时的温度，未注明者，系指在室温下进行；温度高低对试验结果有显著影响者，除另有规定外，应以252为准。例：为防止HNO2的分解与逸失，用亚硝酸钠滴

22、定液进行永停滴定时，须在30以下进行。,凡 例（试药、试液、指示剂）,三十三、试验用的试药，除另有规定外，均应根据附录试药项下的规定，选用不同等级并符合国家标准或国务院有关行政主管部门规定的试剂标准。试液、缓冲液、指示剂与指示液、滴定液等，均应符合附录的规定或按照附录的规定制备。,凡 例（试药、试液、指示剂）,三十四、试验用水，除另有规定外，均系指纯化水。酸碱度检查所用的水，均系指新沸并放冷至室温的水。三十五、酸碱性试验时，如未指明用何种指示剂，均系指石蕊试纸。,凡 例（说明书、包装、标签）,三十七、兽药说明书应符合兽药管理条例及国务院兽医行政管理部门对说明书的规定。三十八、直接接触兽药的包装

23、材料应符合国务院药品监督管理部门的有关规定，均应无毒、洁净，与内容兽药应不发生化学反应，并不的影响内容兽药的质量。,紫外-可见分光光度法,在190800nm波长范围内测定物质的吸光度。用于鉴别、杂质检查和定量测定对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂末端吸收干扰测定，注意溶剂的使用范围均不能小于截止使用波长。水、乙腈 200nm甲醇、乙醇 205nm三氯甲烷 245nm,紫外-可见分光光度法,溶剂检查：以空气为空白（即空白光路中不置任何物质），将溶剂置1cm石英吸收池中测定其吸光度。,紫外-可见分光光度法,测定法空白：一般为配制供试品溶液的同批溶剂；用同体积的溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入

24、等量的相应试剂，并用同样方法处理，制得。 比色池：1cm石英吸收池。吸光度读数：一般为0.30.7。狭缝波带宽度：应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。,紫外-可见分光光度法,测定波长：在规定的吸收峰波长2nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。,紫外-可见分光光度法,1、鉴别和检查 分别按各品种项下规定的方法进行。2、含量测定 一般有以下几种。（1）对照品比较法（2）吸收系数法：吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。（

25、3）计算分光光度法（4）比色法,高效液相色谱法,色谱柱：反相、正相、离子交换、手性分离等。 品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温。注意： 如使用缓冲液或含盐溶液作为流动相，在试验结束后，应先用不含盐的流动相冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出来，再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液冲洗。长期保存时，反相柱可贮存于甲醇或乙腈中，正相柱可贮存于经脱水处理的正己烷中，离子交换柱可贮存于含5%甲醇或含0.05%叠氮化钠的水中。,高效液相色谱法,检测器,高效液相色谱法,流动相：用高纯度的试剂配制流动相；水应为新鲜制备的高纯水。pH值应用pH计进行调节，偏差不超过0.2pH值单位。用0.45m或0.22m滤膜过

26、滤，用前脱气处理。应贮存于玻璃、聚四氟乙烯等容器内，不能贮存在塑料容器中。缓冲盐溶液应尽量新鲜配制使用。,高效液相色谱法,色谱条件：不可改变：填充剂种类、流动相组分、检测器类型；可适当改变：色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等。,高效液相色谱法,调整流动相组分比例时， 当小比例组分的百分比例X小于等于33时，允许改变范围为0.7X1.3X；当X大于33时，允许改变范围为X-10X+10。使用二极管阵列检测器检查峰纯度。 例1 两组分50:50，调节范围为40:6060:40.例2 两组分2:98，调节范围为1.4:98.62.6:97.4.例3

27、 三组分60:35:5，对于35%的组分，调节范围为50:45:570:25:5；对于5%的组分，调节范围为58.5:35:6.561.5:35:3.5.,高效液相色谱法,系统适用性试验理论板数：应指明测定物质，一般为待测物质或内标物质的理论板数。 分离度：除另有规定外，待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5。灵敏度：通常以信噪比(S/N)来表示。系统适用性试验中可以设置灵敏度实验溶液来评价色谱系统的检测能力。有关物质检查时尤为重要。,高效液相色谱法,拖尾因子：以峰高作定量参数时，除另有规定外，T值应在0.951.05之间；以峰面积作定量参数时，严重拖尾会对积分造成影响，此时应在品

28、种正文项下对拖尾因子作出规定。重复性：采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积的RSD应不大于2.0%。采用内标法时，通常配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子,其RSD应不大于2.0%。,高效液相色谱法,测定法内标法：可避免样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。外标法加校正因子的主成分自身对照法（杂质检查）不加校正因子的主成分自身对照法（杂质检查）面积归一化法：用于杂质检查时，由于仪器响应的线性限制，峰面积归一化法一般不宜用于微量杂质的检查。,高效液相色谱法

29、,超高效液相色谱仪是适应小粒径(约2m)填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。相比于HPLC，UPLC的运行时间更短、分离度更好、灵敏度更高、溶剂用量更少。若需使用小粒径(约2m)填充剂，输液泵的性能，进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也应作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。,高效液相色谱法,方法转换 验证：重点考虑灵敏度、分离度符合性 转换前提：色谱柱柱效一致，首选同品牌、同填料但粒径小的柱。 转换需调整的参数：流速、进样量、梯度洗脱程序。,高效液相色谱法,方法转换 提示1：原方法中

30、系统适用性试验*含分离度、灵敏度，比对转换前后方法测试结果，出峰顺序和个数均一致，系统适用性试验结果符合要求，定性和定量无需验证。*不含灵敏度，定性、定量、溶出度、含量均匀度测定无需验证；有关物质需验证灵敏度，达到对照（品）溶液二十分之一即可。,高效液相色谱法,方法转换 提示2：原方法中没有系统适用性试验要求，溶出度、含量均匀度无需验证；定性要求峰纯度、分离度满意即可；有关物质要求峰纯度、分离度满意，且灵敏度符合要求；定量（包括中药制剂）要求峰纯度、分离度满意即可；无法进行分离度比较，可进行23种条件强制破坏试验后进行测定，比较两者图谱，杂质个数和相对峰面积输出应基本一致。,气相色谱法,载气源

31、：氦气、氮气、氢气。注：新方法中应注明载气流速。 进样部分：溶液直接进样、自动进样、顶空进样。注：顶空进样方法中，应注明平衡温度、平衡时间、传输线温度、定量环温度等。 色谱柱：填充柱、毛细管柱。 柱温箱：柱温 检测器：FID、ECD，等。温度设置：柱、进样口（高于柱温3050）、检测器（FID比柱温高，不低于150 ，通常为250350 ）,兽药质量标准分析方法验证指导原则,需验证的情况：建立兽药质量标准、兽药生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订。验证项目：鉴别试验，限量或定量检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，制剂中其他成分（如防腐剂等）测定，兽药溶出度、释放度中溶出量的测定。

32、验证指标：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。在分析方法验证中，须采用标准物质进行试验。,兽药质量标准分析方法验证指导原则, 已有重现性验证，不需要验证中间精密度。 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 视具体情况予以验证。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,准确度：方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（）表示。1、化学药含量测定原料药：对照品与另一方法比较。制剂： 处方量空白辅料中添加对照品；制剂中添加对照品与另一方法比较准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,

33、2、化学药杂质定量测定 原料药中添加已知杂质； 制剂处方量空白辅料中添加已知杂质； 与另一方法比较； 不加校正因子的主成分自身对照法计算。3、中药化学成分测定用对照品进行加样回收率测定，即向已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的被测成分对照品，依法测定。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,4、校正因子的准确度绝对（或定量）校正因子是指单位面积的色谱峰代表的待测物质的量。待测物质与所选定的参照物质的绝对校正因子之比，即为相对校正因子。相对校正因子可采用替代物（对照品）和被替代物（待测物）标准曲线斜率比值进行比较获得；采用紫外吸收检测器时，可将替代物（对照品）和被替代物（待测物）在规定波长和

34、溶剂条件下的吸收系数比值进行比较，计算获得。 GC和HPLC的相对重量校正因子，正文项下描述为待测物峰面积与相对校正因子的乘积进行结果计算。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,5、数据要求同一浓度（相当于100%浓度水平），至少测定6份。3种不同浓度（化学药1.21、11、0.81左右；中药1.51、11、0.51左右），每种3份测定。应报告测定方法、测定结果和RSD%或置信区间。样品中待测成分含量和回收率限度关系可参考表2。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,表2 样品中待测成分含量和回收率限度,兽药质量标准分析方法验证指导原则,精密度：在规定的测试条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所

35、得结果之间的接近程度。重复性：同实验室、同时间、同人员。中间精密度：同实验室、不同时间、不同人员。重现性：不同实验室、不同人员。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,精密度的数据要求表3 样品中待测成分含量和精密度RSD可接受范围,兽药质量标准分析方法验证指导原则,专属性：在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）存在下，采用的分析方法能正确测定被测物的能力。如方法专属性不强，应采用多种不同原理的方法予以补充。1、鉴别反应应呈阴性反应,兽药质量标准分析方法验证指导原则,2、含量测定和杂质测定杂质可得：向试样中加入杂质或辅料，考察分离度或测定结果。杂质不可得：与另一得到验证方法比较；加速破坏试验。比较

36、测定结果或杂质个数。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,检测限：试样中被测物能被检测出的最低量。检测限作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。1、直观法2、信噪比法 3:1或2:13、基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法按照LOD=3.3/S公式计算，式中LOD：检测限；响应值的偏差；S：标准曲线的斜率。4、数据要求上述计算方法获得的检测限数据须用含量相近的样品进行验证。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,定量限：被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求。1、直观法2、信噪比法 10:13、基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法4、数据要求上述计算方法获得的定量限数据须

37、用含量相近的样品进行验证。应附测试图谱，说明测试过程和定量限结果，包括准确度和精密度验证数据。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,线性：在设计的范围内，测试响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。至少制备5份不同浓度的对照品溶液。数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图（或其他数学模型）。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,范围：分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。含量测定：测试浓度的80120；含量均匀度检查：测试浓度的70130，特殊剂型，如气雾剂和喷雾剂，范围可适当放宽；溶出度或释放度：一般为限度的30，或为下限的-20至上限的+20；杂质测定：规定限

38、度的20；含量测定与杂质检查同时，峰面积归一化法：杂质规定限度的-20至含量限度（或上限）的20。校正因子测定时，范围一般应根据其应用对象的测定范围确定。,兽药质量标准分析方法验证指导原则,耐用性：在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。可以先采用均匀设计确定主要影响因素，再通过单因素分析等确实变动范围。典型变动因素：被测溶液的稳定性、样品的提取次数、时间等。液相：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。气相：不同品牌或批号的色谱柱、固定相、不同类型的担体、载气流速、柱温、进样口和检测器温度等。,分析方法验证转移确认,方法验证（上一部分已介绍） 实验室

39、通过试验设计和测试，证明被验证的方法适用于该方法拟定的检测用途。（兽药典：方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。）,分析方法验证转移确认,方法验证（上一部分已介绍）在建立兽药质量标准时，分析方法需经验证，这项工作大多是由产品研发者来完成，从新产品雏形开始质量控制方法研究就要介入，随着产品研发过程的不断深入，产品的质量控制方法也在根据产品的变化而不断调整和优化，最终形成一个终产品质量控制方法，方法验证工作贯穿于新产品研发始终。当兽药生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。,分析方法验证转移确认,方法转移 方法研发实验室建立了分析方法经过验证

40、后，其他实验室使用这个方法进行检测，出现方法在2个（方法研发和方法接收）不同实验室之间转移，方法接收实验室要证明其能够成功地在本实验室运行该方法，就是方法转移了。,分析方法验证转移确认,方法转移 研发实验室 接收实验室 质控实验室、分地点质控实验室、合同公司质控实验室、产品购买公司质控实验室、注册或复核检验实验室 比对性测试 被测样品数量、方法的重要性和复杂性、接收实验室设备及人员情况、研发实验室提供样品及其检验报告。,分析方法验证转移确认,方法确认 一是对象是药典分析方法或法定分析方法 二是证明药典分析方法或法定分析方法适用于被测样品 三是证明方法使用人员有能力成功地操作药典分析方法或法定分析方法。 提示：无需进行方法验证,分析方法验证转移确认,方法确认 无需确认的项目：干燥失重、炽灼残渣、重金属、热分析法、各种湿法化学分析，如酸值测定、用简单仪器进行的检验，如pH值测定等。 需要确认：专属性；被测物浓度在定量限附近的限度检查，常见的如残留溶剂检查；较高浓度的限度检查和含量测定，常见的如有关物质较高的限度检查、水分等。新标准要进行方法确认,回 顾 一、凡例 二、紫外-可见分光光度法 三、高效液相色谱法（气相色谱法） 四、兽药质量标准分析方法验证指导原则 五、分析方法验证转移确认,谢 谢！,