ISO 6493-2000 Animal feeding stuffs - Determination of starch content - Polarimetric method《饲料中淀粉含量的测定 旋光法》.pdf

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1、Aliments des animaux Dtermination de la teneur en amidon Mthode polarimtrique Animal feeding stuffs Determination of starch content Polarimetric method ISO 2000 Premire dition 2000-02-01 ISO 6493 NORME INTERNATIONALE Numro de rfrence ISO 6493:2000(F)ISO 6493:2000(F)DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2

2、000 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du

3、 comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Version franaise parue en 2011 Publi en Suisse ii ISO 2000 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation in

4、ternationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique c

5、r cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internati

6、onales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication c

7、omme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de n

8、e pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 6493 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comit SC 10, Aliments des animaux. Les Annexes A et B de la prsente Norme internationale sont informatives uniquement. ISO 6493:200

9、0(F) ISO 2000 Tous droits rservs iiiNORME INTERNATIONALE ISO 6493:2000(F) Aliments des animaux Dtermination de la teneur en amidon Mthode polarimtrique 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode pour la dtermination de la teneur en amidon par polarimtrie dans les alime

10、nts des animaux et les matires premires des aliments des animaux. La mthode nest pas applicable aux produits qui, en plus de lamidon, contiennent dautres substances qui sont optiquement actives pendant lanalyse et ne se dissolvent pas dans lthanol 40 %. On peut citer comme exemples de ce type de pro

11、duits la pulpe de pomme de terre, les chips de betterave, les sous-produits de betterave, la levure, les produits base de soja, le lupin et les produits riches en inuline (par exemple les racines de chicore et le topinambour). Dans ces cas, un dosage enzymatique de la teneur en amidon peut tre utili

12、s. Cette mthode nest pas applicable pour la quantification de lamidon lorsque la teneur en amylose dpasse 40 % (par exemple amidon de mas riche en amylose de type Hylon VII). ATTENTION Suivant lintensit du traitement chaleur/humidit qua subi le produit, une teneur en amidon trop faible peut tre dter

13、mine. 2 Rfrences normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente Norme internationale. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvisions de ces publications n

14、e sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente Norme internationale sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document normatif en rfre

15、nce sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 3310-1, Tamis de contrle Exigences techniques et vrifications Partie 1: Tamis de contrle en tissus mtalliques ISO 3696, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai

16、 ISO 6498, Aliments des animaux Prparation des chantillons pour essai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins de la prsente Norme internationale, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 amidon polymre vgtal naturel compos de chanes longues non ramifies dunits de glucose lies par des liais

17、ons a-1,4 (amylose) et/ou de chanes longues ramifies par des liaisons a-1,6 dunits de glucose elles-mmes lies par des liaisons a-1,4 (amylopectine) 3.2 teneur en amidon fraction massique damidon et de ses produits de dcomposition de masse molculaire leve, insoluble dans lthanol 40 % et dtermine conf

18、ormment la prsente Norme internationale NOTE La teneur en amidon est exprime en grammes par kilogramme. ISO 2000 Tous droits rservs 14 Principe Une prise dessai est dcompose avec de lacide chlorhydrique dilu, puis lamidon solubilis est glatinis et partiellement hydrolys. Le pouvoir rotatoire total d

19、e la solution clarifie est dtermin. Une correction est ralise pour tenir compte du pouvoir rotatoire caus par dautres substances qui sont solubles dans lthanol 40 % et optiquement actives aprs traitement lacide chlorhydrique dilu. La teneur en amidon est calcule en multipliant le pouvoir rotatoire c

20、orrig par un facteur connu. 5 Ractifs Utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique reconnue. 5.1 Eau, conforme au minimum la qualit 3 selon lISO 3696. 5.2 thanol (C 2 H 5 OH), 40 % (fraction volumique). 5.3 Rouge de mthyle, solution dans lthanol 96 % (fraction volumique), (rouge de mthyle) =

21、 1 g/l. 5.4 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 0,31 mol/l. Vrifier la concentration par titrage avec une solution dhydroxyde de sodium 0,100 mol/l en utilisant du rouge de mthyle comme indicateur. Une partie aliquote de 10 ml dacide chlorhydrique doit neutraliser (31,0 0,1) ml de la solution dhydroxyde d

22、e sodium. ATTENTION Une concentration en acide chlorhydrique trop faible ou trop leve conduira des valeurs incorrectes de la teneur en amidon dtermine. 5.5 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 7,73 mol/l. 5.6 Solutions de clarification, de Carrez, comme suit. 5.6.1 Solution de ferrocyanure de potassium, cK

23、 4 Fe(CN) 6 = 0,25 mol/l. Dans une fiole jauge de 1 l, dissoudre 106 g de ferrocyanure de potassium trihydrat K 4 Fe(CN) 6 ,3H 2 O dans de leau. Diluer jusquau trait avec de leau. 5.6.2 Actate de zinc, solution dans de lacide actique 0,5 mol/l, cZn(CH 3 CO 2 ) 2 = 1 mol/l. Dans une fiole jauge de 1

24、l, dissoudre 219,5 g dactate de zinc dihydrat Zn(CH 3 CO 2 ) 2 ,2H 2 O et 30 g dacide actique glacial dans de leau. Diluer jusquau trait avec de leau. 5.7 Solution de saccharose, (C 12 H 22 O 11 ) = 100,0 g/l. 6 Appareillage Appareillage courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Ba

25、lance analytique, permettant de peser 1 mg prs. 6.2 pH-mtre, permettant des mesures 0,1 unit de pH prs. ISO 6493:2000(F)2 ISO 2000 Tous droits rservs6.3 Bain deau bouillante, dune capacit suffisante pour maintenir leau au point dbullition pendant limmersion des fioles coniques. ATTENTION Si le bain

26、deau nest pas constamment en bullition, une teneur en amidon trop leve sera dtermine. 6.4 Polarimtre, permettant des lectures au moins 0,01 prs et adapt pour des tubes de 200 mm de long. Mesurer le pouvoir rotatoire une longueur donde de 589,3 nm (raie D du sodium). En cas dutilisation de tubes pola

27、rimtriques de longueur diffrente, adapter la lecture la longueur correspondante. Un saccharimtre peut tre utilis si la prcision de son chelle de mesure est au moins gale celle du polarimtre. Dans ce cas, convertir les lectures en degrs. Le polarimtre peut tre talonn avec la solution de saccharose (5

28、.7). Cette solution de saccharose conduit un pouvoir rotatoire de 13,30 pour un mesurage (20 1) C avec un tube polarimtrique de 200 mm. 6.5 Burette. 6.6 Rfrigrants reflux. 6.7 Fioles jauges, dune contenance de 100 ml. Si les fioles jauges doivent tre surmontes dun rfrigrant reflux (voir 9.3.3), lemp

29、loi de fioles coniques col large selon Kohlrausch est recommand. NOTE Les fioles coniques selon Kohlrausch sont des fioles jauges disponibles dans le commerce utilises pour le dosage du sucre. 7 chantillonnage Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Norme internationa

30、le. Une mthode dchantillonnage recommande est donne dans lISO 64971 . Il est important que le laboratoire reoive un chantillon qui soit rellement reprsentatif et qui nait pas t endommag ou modifi pendant le transport ou le stockage. 8 Prparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour ess

31、ai conformment lISO 6498. Sil est solide, broyer lchantillon pour laboratoire (gnralement 500 g) de sorte quil passe compltement au travers dun tamis de 0,5 mm douverture de maille conforme lISO 3310-1. Mlanger soigneusement. 9 Mode opratoire 9.1 Dtermination de la consommation dacide 9.1.1 Peser en

32、viron 2,5 g de lchantillon pour essai prpar, 1 mg prs, et transfrer quantitativement dans une fiole conique de 50 ml. Ajouter 25 ml deau et agiter jusqu ce que la suspension soit homogne. 9.1.2 Placer les lectrodes du pH-mtre (6.2) dans la suspension et, laide dune burette, ajouter de lacide chlorhy

33、drique (5.4) jusqu ce que le pH de la suspension soit gal 3,0 0,1. Vrifier si la consommation dacide totale de la prise dessai a t compense en agitant vigoureusement la suspension et en la laissant reposer pendant 2 min. Si au cours de cette priode le pH a augment jusqu une valeur suprieure 3,1, ISO

34、 6493:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 3ajouter de lacide chlorhydrique (5.4), laide de la burette, autant de fois que ncessaire jusqu ce quil ny ait plus dacide consomm. 9.1.3 Calculer la consommation dacide de la prise dessai partir du volume dacide chlorhydrique (5.4) ajout. 9.2 Dtermination d

35、u pouvoir rotatoire total 9.2.1 Peser environ 2,5 g de lchantillon pour essai prpar (m 1 ), 1 mg prs, et transfrer quantitativement dans une fiole jauge de 100 ml (6.7) sche. Ajouter 25 ml dacide chlorhydrique (5.4). Agiter jusqu ce que la suspension soit homogne, puis ajouter 25 ml dacide chlorhydr

36、ique (5.4). 9.2.2 Compenser la consommation dacide de la prise dessai (voir 9.1) en ajoutant de lacide chlorhydrique dune concentration approprie pour que le volume du contenu de la fiole ne varie pas de plus de 1 ml. EXEMPLE Si 5,0 ml dacide chlorhydrique 0,1 mol/l est utilis en 9.1.2 pour la compe

37、nsation dun chantillon riche en carbonate de calcium, la consommation dacide de la prise dessai est de 0,5 mmol (9.1.3). Dans ce cas, ajouter 0,5 ml dacide chlorhydrique 1,0 mol/l en 9.2.2. ATTENTION Si la concentration dacide chlorhydrique dans la suspension scarte de 0,31 mol/l, une teneur en amid

38、on errone sera dtermine. Une concentration dacide chlorhydrique trop leve ou trop faible conduira respectivement des valeurs trop faibles ou trop leves de la teneur en amidon dtermine. 9.2.3 Immerger la fiole dans le bain deau bouillante (6.3). Pendant les trois premires minutes, agiter vigoureuseme

39、nt la fiole intervalles rguliers pour viter les agglomrats et obtenir une distribution thermique uniforme dans la suspension. Lors de lagitation, maintenir la fiole immerge. Si plusieurs analyses sont ralises, immerger les fioles pendant des intervalles de temps appropris permettant de maintenir le

40、bain deau au point dbullition. Au bout de 15 min 5 s, sortir la fiole conique du bain. Ajouter immdiatement 30 ml deau (5.1) une temprature ne dpassant pas 10 C et remuer. Refroidir une temprature denviron 20 C dans un bain deau froide courante. ATTENTION Si la fiole reste trop longtemps dans le bai

41、n deau bouillante ou si la chute de temprature est trop lente, la teneur en amidon dtermine sera trop faible. Ajouter 5 ml de solution de ferrocyanure de potassium (5.6.1) et agiter pendant 1 min. Ajouter 5 ml de solution dactate de zinc (5.6.2) et agiter nouveau pendant 1 min. Diluer jusquau trait

42、avec de leau, mlanger et filtrer. Jeter les premiers millilitres de filtrat. Dterminer le pouvoir rotatoire du filtrat ( a 1 ) avec le polarimtre ou le saccharimtre (6.4). 9.3 Dtermination du pouvoir rotatoire des substances solubles dans lthanol 9.3.1 Peser environ 5 g de lchantillon pour essai prp

43、ar (m 2 ), 1 mg prs, et transfrer quantitativement dans une fiole jauge de 100 ml (6.7) sche. Ajouter 40 ml dthanol (5.2). Agiter jusqu ce que la suspension soit homogne, puis ajouter 40 ml dthanol (5.2). 9.3.2 Compenser la consommation dacide de la prise dessai (voir 9.1) en ajoutant de lacide chlo

44、rhydrique dune concentration approprie pour que le volume du contenu de la fiole ne varie pas de plus de 1 ml. En principe, la quantit dacide chlorhydrique ajouter est le double de celle ajoute en 9.2.2. ISO 6493:2000(F)4 ISO 2000 Tous droits rservs9.3.3 Agiter vigoureusement et laisser reposer pend

45、ant 1 h temprature ambiante. Pendant cette priode, agiter vigoureusement au moins toutes les 10 min. Si la teneur en lactose de lchantillon dpasse 50 g/kg (comme dans le cas du lactosrum en poudre ou du lait crm en poudre), dissoudre lchantillon en chauffant la fiole surmonte dun rfrigrant reflux da

46、ns un bain deau (50 2) C pendant 30 min. Diluer jusquau trait avec de lthanol (5.2), mlanger et filtrer. Jeter les premiers millilitres de filtrat. Introduire laide dune pipette 50 ml du filtrat dans une fiole jauge de 100 ml (6.7). Ajouter 2,0 ml dacide chlorhydrique (5.5) et remuer vigoureusement.

47、 Mettre en place un rfrigrant reflux sur la fiole et limmerger dans le bain deau bouillante (6.3). Au bout de 15 min 5 s, sortir la fiole conique du bain. Ajouter immdiatement 30 ml deau (5.1) une temprature ne dpassant pas 10 C et remuer. Refroidir une temprature denviron 20 C dans un bain deau froide courante. Ajouter 5 ml de solution de ferrocyanure de potassium (5.6.1) et agiter pendant 1 min. Ajouter 5 ml de solution dactate de zinc (5.6.2) et agiter nouvea