DIN EN ISO 19020-2017 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the immunoenzymatic detection of staphylococcal enterotoxins in foodstuffs (ISO 19020 2017) German vers.pdf

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1、September 2017DEUTSCHE NORM Preisgruppe 14DIN Deutsches Institut fr Normung e. V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e. V., Berlin, gestattet.ICS 07.100.30!%b82“2632115www.din.deDIN EN ISO 19020Mikrobiologie der Lebensmittelkett

2、e Horizontales Verfahren fr den immunenzymatischen Nachweis von Staphylokokken-Enterotoxinen in Lebensmitteln (ISO 19020:2017);Deutsche Fassung EN ISO 19020:2017Microbiology of the food chain Horizontal method for the immunoenzymatic detection of staphylococcal enterotoxins in foodstuffs (ISO 19020:

3、2017);German version EN ISO 19020:2017Microbiologie de la chane alimentaire Mthode horizontale de dtection des entrotoxines staphylococciques par test immuno-enzymatique dans les aliments (ISO 19020:2017);Version allemande EN ISO 19020:2017Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berl

4、in www.beuth.deGesamtumfang 31 SeitenDDIN-Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL)DIN EN ISO 19020:2017-09 2 Nationales Vorwort Dieses Dokument (EN ISO 19020:2017) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 2

5、75 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat von DIN (Deutschland) gehalten wird. Das zustndige deutsche Normungsgremium ist der Arbeitsausschuss NA 057-01-06 AA Mikrobiologie der Lebensmittelkette“ des DIN-Normenausschusses Lebensmittel und landwirtschaftliche Produ

6、kte“ (NAL). Fr die in diesem Dokument zitierten internationalen Dokumente wird im Folgenden auf die entsprechenden deutschen Dokumente hingewiesen: ISO 3696 siehe DIN ISO 3696 ISO 7218 siehe DIN EN ISO 7218 Nationaler Anhang NA (informativ) Literaturhinweise DIN ISO 3696, Wasser fr analytische Zweck

7、e Anforderungen und Prfungen DIN EN ISO 7218, Mikrobiologie von Lebensmitteln und Futtermitteln Allgemeine Anforderungen und Leitlinien fr mikrobiologische Untersuchungen EUROPISCHE NORM EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EN ISO 19020 Juni 2017 ICS 07.100.30 Deutsche Fassung Mikrobiologie der Lebensm

8、ittelkette Horizontales Verfahren fr den immunenzymatischen Nachweis von Staphylokokken-Enterotoxinen in Lebensmitteln (ISO 19020:2017) Microbiology of the food chain Horizontal method for the immunoenzymatic detection of staphylococcal enterotoxins in foodstuffs (ISO 19020:2017) Microbiologie de la

9、 chane alimentaire Mthode horizontale de dtection des entrotoxines staphylococciques par test immuno-enzymatique dans les aliments (ISO 19020:2017) Diese Europische Norm wurde vom CEN am 14. Mai 2017 angenommen. Die CEN-Mitglieder sind gehalten, die CEN/CENELEC-Geschftsordnung zu erfllen, in der die

10、 Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europischen Norm ohne jede nderung der Status einer nationalen Norm zu geben ist. Auf dem letzten Stand befindliche Listen dieser nationalen Normen mit ihren bibliographischen Angaben sind beim CEN-CENELEC-Management-Zentrum oder bei jedem CEN-Mitglie

11、d auf Anfrage erhltlich. Diese Europische Norm besteht in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Franzsisch). Eine Fassung in einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch bersetzung in seine Landessprache gemacht und dem Management-Zentrum mitgeteilt worde

12、n ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen. CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland

13、, Litauen, Luxemburg, Malta, den Niederlanden, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, der Schweiz, Serbien, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der Tschechischen Republik, der Trkei, Ungarn, dem Vereinigten Knigreich und Zypern. EUROPISCHES KOMITEE FR NORMUNG EUROPEAN COMMITTEE FOR S

14、TANDARDIZATION COMIT EUROPEN DE NORMALISATION CEN-CENELEC Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brssel 2017 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten. Ref. Nr. EN ISO 19020:2017 DEN ISO 19020:2

15、017 (D) 2 Inhalt Seite Europisches Vorwort 3 Vorwort 4 Einleitung 5 1 Anwendungsbereich . 6 2 Normative Verweisungen . 6 3 Begriffe 6 4 Kurzbeschreibung . 7 5 Reagenzien . 7 6 Gerte . 7 7 Probennahme 8 8 Durchfhrung 8 8.1 Vorbereitung der Prfmenge 8 8.2 Lagerung der Untersuchungsprobe 9 8.3 Extrakti

16、on . 9 8.4 Konzentration des Extrakts (vorgeschrieben fr Milch und Milchprodukte) 10 8.5 Gewinnung des konzentrierten Extrakts 11 8.6 Lagerung und Schritte vor dem Nachweis 11 8.7 Nachweis . 11 8.8 Leistungskriterien . 12 9 Qualittskontrolle . 12 10 Angabe der Ergebnisse 12 11 Besttigung 12 12 Leist

17、ungsmerkmale des Verfahrens . 12 13 Untersuchungsbericht . 15 (informativ) Ergebnisse aus Ringversuchen: 2013 16 Anhang A(informativ) Ergebnisse aus Ringversuchen: 2014 22 Anhang B(informativ) Anmerkung zu Fehlerquellen 28 Anhang CLiteraturhinweise . 29 DIN EN ISO 19020:2017-09 EN ISO 19020:2017 (D)

18、 3 Europisches Vorwort Dieses Dokument (EN ISO 19020:2017) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products“ in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren“ erarbeitet, dessen Sekretariat von DIN gehalten wird. Diese Europische Norm muss den

19、Status einer nationalen Norm erhalten, entweder durch Verffentlichung eines identischen Textes oder durch Anerkennung bis Dezember 2017, und etwaige entgegenstehende nationale Normen mssen bis Dezember 2017 zurckgezogen werden. Es wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Doku

20、ments Patentrechte berhren knnen. CEN ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Dieses Dokument wurde im Rahmen eines Normungsauftrages erarbeitet, den die Europische Kommission und die Europische Freihandelszone dem CEN erteilt haben. Entsprechen

21、d der CEN-CENELEC-Geschftsordnung sind die nationalen Normungsinstitute der folgenden Lnder gehalten, diese Europische Norm zu bernehmen: Belgien, Bulgarien, Dnemark, Deutschland, die ehemalige jugoslawische Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, K

22、roatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta, Niederlande, Norwegen, sterreich, Polen, Portugal, Rumnien, Schweden, Schweiz, Serbien, Slowakei, Slowenien, Spanien, Tschechische Republik, Trkei, Ungarn, Vereinigtes Knigreich und Zypern. Anerkennungsnotiz Der Text von ISO 19020:2017 wurde von CEN als

23、EN ISO 19020:2017 ohne irgendeine Abnderung genehmigt. DIN EN ISO 19020:2017-09 EN ISO 19020:2017 (D) 4 Vorwort ISO (die Internationale Organisation fr Normung) ist eine weltweite Vereinigung von Nationalen Normungsorganisationen (ISO-Mitgliedsorganisationen). Die Erstellung von Internationalen Norm

24、en wird normalerweise von ISO Technischen Komitees durchgefhrt. Jede Mitgliedsorganisation, die Interesse an einem Thema hat, fr welches ein Technisches Komitee gegrndet wurde, hat das Recht, in diesem Komitee vertreten zu sein. Internationale Organisationen, staatlich und nicht-staatlich, in Liaiso

25、n mit ISO, nehmen ebenfalls an der Arbeit teil. ISO arbeitet eng mit der Internationalen Elektrotechnischen Kommission (IEC) bei allen elektrotechnischen Themen zusammen. Die Verfahren, die bei der Entwicklung dieses Dokuments angewendet wurden und die fr die weitere Pflege vorgesehen sind, werden i

26、n den ISO/IEC-Direktiven, Teil 1 beschrieben. Im Besonderen sollten die fr die verschiedenen ISO-Dokumentenarten notwendigen Annahmekriterien beachtet werden. Dieses Dokument wurde in bereinstimmung mit den Gestaltungsregeln der ISO/IEC-Direktiven, Teil 2 erarbeitet (siehe www.iso.org/directives). E

27、s wird auf die Mglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berhren knnen. ISO ist nicht dafr verantwortlich, einige oder alle diesbezglichen Patentrechte zu identifizieren. Details zu allen whrend der Entwicklung des Dokuments identifizierten Patentrechten finden sich

28、in der Einleitung und/oder in der ISO-Liste der empfangenen Patenterklrungen (siehe www.iso.org/patents). Jeder in diesem Dokument verwendete Handelsname wird als Information zum Nutzen der Anwender angegeben und stellt keine Anerkennung dar. Eine Erluterung zum freiwilligen Charakter von Normen, de

29、r Bedeutung ISO-spezifischer Benennungen und Ausdrcke, die sich auf Konformittsbewertung beziehen, sowie Informationen ber die Beachtung der WTO-Grundstze zu technischen Handelshemmnissen (TBT, en: Technical Barriers to Trade) durch ISO enthlt der folgende Link: www.iso.org/iso/foreword.html. Dieses

30、 Dokument wurde vom Europischen Komitee fr Normung (CEN) und dessen Technischen Komitee CEN/TC 275 Lebensmittelanalytik Horizontale Verfahren, in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee ISO/TC 34 Food products, Unterkomitee SC 9 Microbiology, in bereinstimmung mit der Vereinbarung zur technischen

31、 Zusammenarbeit zwischen ISO und CEN (Wiener Vereinbarung) erarbeitet. DIN EN ISO 19020:2017-09 EN ISO 19020:2017 (D) 5 Einleitung Staphylokokken-Enterotoxine (SEs) sind Proteine, die in Lebensmitteln durch bestimmte Stmme der koagulase-positiven Staphylokokken (CPS, en: coagulase positive staphyloc

32、occi), vorwiegend Staphylococcus aureus, produziert werden knnen. Diese SEs sind hitze- und surebestndige Toxine, die belkeit, Erbrechen, Bauchschmerzen und Durchfall verursachen, wenn sie aufgenommen wurden. Durch ihre Stabilitt knnen SEs noch vorhanden sein, selbst wenn koagulase-positive Staphylo

33、kokken nicht nachgewiesen werden knnen. Die SEs bestehen aus einer Gruppe von mehr als 20 strukturell verwandten kugelfrmigen monomeren Proteinen mit Molekulargewichten von 19 kDa bis 30 kDa 1. Diese Proteine sind unter verschiedenen Umweltbedingungen, wie etwa Wrmebehandlung, Gefrieren und Vernderu

34、ngen des pH-Werts, vergleichsweise stabil; auerdem sind sie resistent gegen proteolytischen Abbau. blicherweise, und in Abhngigkeit von der Sensibilitt der betroffenen Personen, knnen Nanogramm-Mengen (ng) des Enterotoxins eine Vergiftung mit den oben beschriebenen Symptomen verursachen. Aufgrund de

35、s Einflusses von SEs auf die menschliche Gesundheit hat die Europische Union Gesetze verabschiedet, um den Verbraucherschutz durch die Festlegung mikrobiologischer Kriterien fr Lebensmittel, wie etwa die Keimzhlung von CPS und den Nachweis von SEs, zu strken 2. Fr den Nachweis und/oder die Quantifiz

36、ierung der SEs wurden verschiedene Verfahren entwickelt. Einige dieser Verfahren basieren auf Enzymimmunoassays (EIA). Andere Verfahren beruhen auf der chemischen Analyse, bei der Flssigkeitschromatographie mit Tandem-Massenspektrometrie (LC-MS/MS, en: liquid chromatography with tandem mass spectrom

37、etry) zum Nachweis und zur Quantifizierung von SEs genutzt wird. Da sich letztere Verfahren aktuell in Entwicklung befinden, wurden die EIA-Verfahren als Ausgangsbasis fr die Normung eines Nachweisverfahrens fr SEs gewhlt. Das Ziel ist es, SEs mithilfe von handelsblichen Testkits nachzuweisen. Diese

38、s Dokument beschreibt die Verfahrensanweisung fr die Extraktion von SEs aus Lebensmittelproben. Darber hinaus wurden die Leistungskriterien der Kits vor der Anwendung an fnf Arten von Lebensmittelmatrizes auf Grundlage der in diesem Dokument festgelegten Kriterien bewertet. Die Rckmeldungen zu versc

39、hiedenen Ausbrchen von Lebensmittelvergiftungen durch Staphylokokken wurden als Funktion der aufgenommenen Dosen modelliert 3. Fr diesen Zweck wurden Daten aus der Literatur sowie Daten vom Referenzlabor fr CPS der Europischen Union verwendet. Das Benchmark-Verfahren der Umweltschutzbehrde der USA (

40、US EPA, en: United States Environmental Protection Agency) wurde auf diesen Datensatz angewandt und half, die Benchmark-Dosis (BMD) zu ermitteln 4. Die BMD ist als die Dosis einer Gefhrdung (Staphylokokken-Enterotoxine) definiert, die fhig ist, gesundheitliche Symptome in einem gegebenen Prozentsatz

41、 der exponierten Bevlkerung auszulsen. Die untere Grenze der BMD (BMDL, en: BMD lower limit) ist das untere 95-%- (oder 90-%-)Konfidenzintervall der BMD. Dieser Wert wurde genutzt, um den akzeptablen Wert fr die Nachweisgrenze 50 (LOD50, en: limit of detection 50) der verschiedenen handelsblichen SE

42、-Nachweiskits festzulegen. DIN EN ISO 19020:2017-09 EN ISO 19020:2017 (D) 6 1 Anwendungsbereich Dieses Dokument legt ein Screening-Verfahren fr den Nachweis der Staphylokokken-Enterotoxine SEA, SEB, SECs, SED und SEE in Lebensmitteln fest. Es besteht aus zwei Hauptschritten: a) Extraktion gefolgt vo

43、n einer auf dem Dialyseprinzip beruhenden Konzentration, und b) ein immunenzymatischer Nachweis unter Anwendung handelsblicher Nachweiskits. Dieses Dokument ist anwendbar fr das Screening von Staphylokokken-Enterotoxinen SEA bis SEE in Produkten, die fr den menschlichen Verzehr bestimmt sind. Andere

44、 Staphylokokken-Enterotoxine wie z. B. die Arten SEG, SEH, SEI, SER, SES und SET knnen auch Krankheiten verursachen. Aufgrund fehlender handelsblicher Nachweiskits behandelt dieses Dokument nur die Typen SEA bis SEE, es kann jedoch vorbehaltlich der Validierung der Methode fr andere Typen von Toxine

45、n anwendbar sein. 2 Normative Verweisungen Die folgenden Dokumente werden im Text in solcher Weise in Bezug genommen, dass einige Teile davon oder ihr gesamter Inhalt Anforderungen des vorliegenden Dokuments darstellen. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatier

46、ten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). ISO 3696, Water for analytical laboratory use Specification and test methods ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs General requirements and guidance for microbiological exam

47、inations 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begriffe. ISO und IEC stellen terminologische Datenbanken fr die Verwendung in der Normung unter den folgenden Adressen bereit: IEC Electropedia: unter http:/www.electropedia.org/ ISO Online Browsing Platform: unter http:/www

48、.iso.org/obp 3.1 Staphylokokken-Enterotoxin A, B, C, D, E SEA, SEB, SEC, SED, SEE Exoprotein SEA, SEB, SEC, SED und SEE, produziert durch enterotoxigene Stmme koagulase-positiver Staphylokokken, vorwiegend Staphylococcus aureus, mit einem Molekulargewicht im Bereich von 19 kDa bis 30 kDa 3.2 Spezifi

49、tt SP (en: specificity) Anzahl der gefundenen negativen Proben geteilt durch die Anzahl der getesteten Blindproben DIN EN ISO 19020:2017-09 EN ISO 19020:2017 (D) 7 3.3 Empfindlichkeit SE (en: sensitivity) Anzahl der gefundenen positiven Proben geteilt durch die Anzahl der getesteten Proben bei einer vorgegebenen Kontaminationsstufe 3.4 Nachweisgrenze 50 LOD50 (en: limit of determination 50) Konzentratio