DIN 10326-2007 Milk products and ice cream - Determination of sucrose and glucose content - Enzymatic method《奶制品和冰淇淋 蔗糖和葡萄糖含量的测定 酶催化法》.pdf
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1、Dezember 2007DEUTSCHE NORM Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DINPreisgruppe 9DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. Jede Art der Vervielfltigung, auch auszugsweise, nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., Berlin, gestattet.ICS 67.100.01!$H
2、t“1378158www.din.deDDIN 10326Milcherzeugnisse und Speiseeis Bestimmung des Gehaltes an Saccharose und Glucose Enzymatisches VerfahrenMilk products and ice cream Determination of sucrose and glucose content Enzymatic methodProduits laitiers et glace Dtermination de la teneur en saccharose et en gluco
3、se Mthode enzymatiqueAlleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 BerlinErsatz frDIN 10326:1986-02www.beuth.deGesamtumfang 12 SeitenDIN 10326:2007-12 2 Inhalt Seite Vorwort . 3 1 Anwendungsbereich 4 2 Normative Verweisungen. 4 3 Begriffe 4 4 Kurzbeschreibung 4 5 Chemikalien. 5 6 Gerte. 6
4、7 Probenahme 6 8 Durchfhrung 7 9 Auswertung . 8 10 Untersuchungsbericht . 11 Literaturhinweise . 12 DIN 10326:2007-12 3 Vorwort Diese Norm wurde vom Normenausschuss Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte, Arbeitsausschuss Milch und Milchprodukte Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbei
5、tet. nderungen Gegenber DIN 10326:1986-02 wurden folgende nderungen vorgenommen: a) der Titel wurde klarer strukturiert; b) die Vorschrift zur Probenvorbereitung wurde allgemeiner gefasst; c) die Berechnungsformel wurde korrigiert; d) die Przisionsdaten wurden redaktionell korrigiert (anstelle R war
6、 sRangegeben worden); e) die Norm wurde technisch und redaktionell berarbeitet und ergnzt und damit an die derzeit gltigen Gestaltungsregeln angepasst. Frhere Ausgaben DIN 10326: 1971-05, 1986-02 DIN 10326:2007-12 4 1 Anwendungsbereich Diese Norm legt ein enzymatisches Verfahren zur Bestimmung des G
7、ehaltes an Saccharose und Glucose in Milcherzeugnissen und Speiseeis fest. 2 Normative Verweisungen Die folgenden zitierten Dokumente sind fr die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte
8、Ausgabe des in Bezug genommenen Dokuments (einschlielich aller nderungen). DIN EN ISO 707, Milch und Milchprodukte Leitfaden zur Probenahme 3 Begriffe Fr die Anwendung dieses Dokuments gelten die folgenden Begriffe. 3.1 Saccharosegehalt der nach dieser Norm bestimmte Massenanteil an Saccharose in Mi
9、lcherzeugnissen und Speiseeis, angege-ben in Gramm je 100 Gramm der Probe 3.2 Glucosegehalt der nach dieser Norm bestimmte Massenanteil an Glucose in Milcherzeugnissen und Speiseeis, angegeben in Gramm je 100 Gramm der Probe 4 Kurzbeschreibung In dem von Fett und Eiwei befreiten, wssrigen Extrakt de
10、r Probe wird Saccharose durch das Enzym -Fructosidase zu Glucose und Fructose gespalten. Glucose wird in Gegenwart des Enzyms Hexokinase (HK) durch Adenosin-5-triphosphat (ATP) zu Glucose-6-phosphat (G-6-P) phosphoryliert, welches anschlieend in Gegenwart des Enzyms Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase
11、(G6P-DH) durch Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat (NADP) zu Gluconat-6-phosphat oxidiert wird. Die Menge der bei dieser Reaktion gebildeten reduzierten Form des Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphats (NADPH) wird durch Messung des Extinktionsanstiegs der Probenlsung bei 340 nm (alternativ 334 n
12、m oder 365 nm) bestimmt und ist der gesamten im Testansatz vorhandenen Glucose (aus Saccharose stammende Glucose und freie Glucose) proportional. In einem Parallelansatz wird die vorhandene freie Glucose ohne vorherige Spaltung der Saccharose durch -Fructosidase in gleicher Weise durch Phosphorylier
13、ung und Oxidation zu Gluconat-6-phospat bestimmt. Die Differenz der Extinktionen zwischen den Prfanstzen mit und ohne Katalyse durch -Fructosidase ist propor-tional der aus Saccharose freigesetzten Glucose und somit auch dem Saccharosegehalt der Probe. Die Bestimmung basiert somit auf folgenden Reak
14、tionsprinzipien: Saccharose + H2O seFructosida-Glucose + Fructose Glucose + ATP (Adenosin-5-triphosphat) HKG-6-P + ADP (Adenosin-5-diphosphat) G-6-P + NADP+DH-G6PGluconat-6-phosphat + NADPH + H+DIN 10326:2007-12 5 5 Chemikalien 5.1 Allgemeines Sofern nicht anders angegeben, sind analysenreine Chemik
15、alien zu verwenden. Das zur Herstellung der Probenlsung verwendete Wasser muss mindestens die Reinheit von destilliertem Wasser haben. Zur Her-stellung der Enzym- und Coenzymlsungen sowie der Pufferlsungen ist frisch bidestilliertes Wasser zu verwenden. 5.2 Kaliumhexacyanoferrat(II)-Lsung, Massenkon
16、zentration (K4Fe(CN)6 3 H2O) = 36 g/l 3,6 g Kaliumhexacyanoferrat(II)-Trihydrat werden mit Wasser zu 100 ml gelst. 5.3 Zinksulfat-Lsung, Massenkonzentration (ZnSO4 7 H2O) = 72 g/l 7,2 g Zinksulfat-Heptahydrat werden mit Wasser zu 100 ml gelst. 5.4 Natronlauge, Stoffmengenkonzentration c(NaOH) = 2 mo
17、l/l 8 g Natriumhydroxid werden mit Wasser zu 100 ml gelst. 5.5 Citrat-Pufferlsung, pH = 4,6 3,45 g Citronensure-Monohydrat (C6H8O7 H2O) und 4,55 g Trinatriumcitrat-Dihydrat (C6H5Na3O7 2 H2O) werden in 70 ml bidestilliertem Wasser gelst. Der pH-Wert wird mit Natronlauge (5.4) auf 4,6 eingestellt und
18、die Lsung mit bidestilliertem Wasser auf 100 ml aufgefllt. Die Lsung ist bei 4 C etwa 1 Jahr haltbar. 5.6 -Fructosidase-Lsung, aus Hefe (EC 3.2.1.26)1)1; Lyophilisat mit 300 U/mg ( 5 000 mkat/kg)2). 5 mg -Fructosidase werden mit 2 ml bidestilliertem Wasser gelst (750 U/ml 12,5 kat/ml)2). Diese Lsung
19、 ist bei 4 C etwa 1 Woche haltbar. 5.7 Triethanolamin-Pufferlsung, pH = 7,6 14,0 g Triethanolamin-Hydrochlorid (C6H15NO3 HCl) und 0,25 g Magnesiumsulfat (MgSO4 7 H2O) werden in 70 ml bidestilliertem Wasser gelst. Der pH-Wert wird mit Natronlauge (5.4) auf 7,6 eingestellt und die Lsung mit bidestilli
20、ertem Wasser auf 100 ml aufgefllt. Die Lsung ist bei 4 C etwa 4 Wochen haltbar. 5.8 Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat-Lsung (NADP), Massenkonzentration (NADP-Na2) = 10 g/l 60 mg -NADP-Dinatriumsalz (Massenanteil w 98 %) werden in 6 ml bidestilliertem Wasser gelst. Die L-sung ist bei 4 C etwa 4
21、Wochen haltbar. 5.9 Adenosin-5-triphosphat-Lsung (ATP), Massenkonzentration (ATP-Na2H2 3 H2O) = 50 g/l 300 mg ATP-Trihydrat (w 100 %) und 300 mg Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3) werden in 6 ml bidestil-liertem Wasser gelst. Die Lsung ist bei 4 C etwa 4 Wochen haltbar. 1) en: Enzyme Commission Number
22、 DIN 10326:2007-12 6 5.10 Hexokinase-Suspension (HK), aus Hefe (EC 2.7.2.1); Kristallsuspension, = 2 mg/ml in Ammonium-sulfat-Lsung (c = 3,2 mol/l), 140 U/mg ( 2 333 mkat/kg)2). Die Suspension ist bei 4 C etwa 1 Jahr haltbar. 5.11 Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase-Suspension (G6P-DH), aus Hefe (EC 1.
23、1.1.49); Kristallsus-pension, = 1 mg/ml in Ammoniumsulfat-Lsung (c = 3,2 mol/l, 140 U/mg ( 2 333 mkat/kg)2). Die Sus-pension ist bei 4 C etwa 1 Jahr haltbar. Fr die enzymatische Bestimmung befinden sich Fertigreagenzien im Handel, bei deren Verwendung die Arbeitsvorschrift des Herstellers zu bercksi
24、chtigen ist. 6 Gerte 6.1 Analysenwaage, Skalenteilungswert 0,1 mg 6.2 Spektralphotometer, geeignet zum Messen bei 340 nm ANMERKUNG Es drfen auch Spektralphotometer, die eine Messung bei 365 nm bzw. 334 nm mit Hg-Lampen ge-statten, verwendet werden. 6.3 Messkvetten aus Glas oder Kunststoff, Schichtdi
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