GB T 14926.26-1994 实验动物 小鼠脑脊髓炎病毒检验方法.pdf

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1、GBT 14926.2694 1 主题内容与适用范围 本标准规定了小鼠脑脊髓炎病毒（以下简称TMEV）的检验方法、试剂等，适用于检测实验小鼠TMEV病毒的感染情况。 2 引用标准 GBT 14926.18 实验动物 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法 GBT 14926.24 实验动物 小鼠肺炎病毒检验方法 3 材料和试剂 3.1 TMEV毒种：GDVII毒株。 3.2 BHK21传代细胞。 3.3 人“O”型红细胞。 3.4 酶标仪。 4 检验步骤 4.1 制备ELISA 抗原：取GDVII感染发病小鼠的脑，研磨，制成10悬液，3000rmin离心10min，取上清液接种于长成致密单层的BH

2、K21细胞，吸附1.52h，加维持液培养5天左右，当细胞病变（CPE）达到时收获，浓缩提纯抗原方法见 GBT 14926.18中4.1.2.2。 4.2 制备IFA，IEA抗原片：将GDVII病毒感染BHK21细胞，培养5天，涂片，涂片程序，抗原的鉴定和保存见 GBT 14926.18中4.2.3。 4.3 制备GDVII免疫血清：取清洁鼠或SPF级小鼠腹腔注射GDVII鼠脑病毒液（血凝素的滴度为11024），每次0.05mL只，每周一次，连续三周，最后一次免疫的同时，腹腔注射0.2mL180实体瘤细胞，710天搜集腹水和血液。 4.4 制备GDVII阴性血清：采集无GDVII病毒感染的小鼠群

3、血清，为阴性小鼠群血清。 4.5 制备GDVII血凝素抗原：取感染GDVII病毒发病鼠的鼠脑，用2牛血清白蛋白的Eagles液作成10悬液，冻融两次，3000rmin离心10min，取上清液，与0.5胰酶胺11比例混合后即为血凝素抗原。 5 检验方法和结果判定 5.1 间接ELISA法见GBT 14926.18中4.1。 5.2 IFA法，见GBT 14926.18中4.2。 5.3 IEA法，见GBT 14926.18中4.2。 5.4 HI法：用8单位血凝素抗原，待与被检血清混合置4作用1h后，再加入0.5人“O”型页码，1/2GB/T 14926.26942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92626R.htm血细胞，置于 4冰箱，1h后读取结果，待检样品HI滴度120判为阳 性（见GBT 14926.24中5.3）。当检样出现阳 性时，选用同一种方法或另一种方法重试。如为阳性则判为阳性结果。 6 结果报告 根据判定结果，作出报告。 页码，2/2GB/T 14926.26942006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbBE92626R.htm