GB T 17816-1999 饲料中总抗坏血酸的测定 邻苯二胺荧光法.pdf

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1、GB/T 17816一1999前主口本标准参考了美国公职分析化学家协会AOAC(l995年版)45.1. 1445. 1. 16、维生素制品中的维生素c和食品中的总维生素c)的规定，在技术内容上，综合上述三种方法，在操作步骤上作了相应的变更，以便于实际操作。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人g屈利文、钱肪.巳，1中华人民共和国国家标准 饲料中总抗坏血酸的测定邻苯二肢荧光法G8/T 178161999 1 范围Delerminalion of lolal ascorbic acid in feeds 。-Phenyl

2、enedlaminef1uorometry 本标准规定了用邻苯二胶荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法。本标准适用于单一饲料、配合饲料、预混料及浓缩饲料。不适用以酶化抗坏血酸形式添加的各种饲料中抗坏血酸的自由i定。在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为0.022阅/mL.2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 6682 1992 分析实验室用水规格和试验方法3 方法原理先将试样中抗坏血酸在弱酸性条件下提取出来，提取液中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血

3、酸，与邻苯二胶(OPDA)反应生成有荧光的喳喔叶中(quinoxaline)，其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比。另外，根据脱氢抗坏血酸与棚酸可形成珊酸脱氢抗坏血酸络合物而不与邻苯二胶反应，以此作为空白l1F除试样中荧光杂质的干扰。4 试剂本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。实验主用水应符合GB/T6682中三级水的规格。4. 1 偏磷酸-乙酸溶液称取15g偏磷酸，加入40mL冰乙酸及250mL水，加温，搅拌，使之逐渐溶解.冷却后加水至500mL。于4C冰箱可保存710天。4.2 0.15 mol/L硫酸溶液取10mL硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200mL。4. 3

4、偏磷酸乙酸-硫酸溶液以口.15mol/L硫酸溶液(4.2)为稀释液代替水，其余同4.1配制。4.4 50%乙酸纳溶液:称取500g乙酸锵(CH，COONa 3H，O).如水至1000mL. 4.5 棚酸-乙酸销溶液:称取3g棚酸，溶于100mL乙酸纳溶液(4.4)中。临用前配制。4.6 邻苯工胶溶液:称取20mg邻苯二胶，于1脑用前用水稀释至100mL。4.7 抗坏血酸标准溶液(1mg/mLl准确称取50mg抗坏血酸，用溶液(4.1)溶于50mL容量瓶中，并稀释至刻度。临用前配制。48 抗坏血酸标准工作溶液(100吨/mLl，取10mL抗坏血酸标准溶液(4.7) .用溶液(4.1)稀释至国家质

5、量技术监督局1999-08-10批准2000 - 02 -01实施2t)i GB/T 17816-1999 100 mL，稀释前测试pH值，如其pH大于2.2时，则应用溶液(4.3)稀释。4.9 ().04%百里盼蓝指示剂溶液:称取0.1g百里酣蓝，加0.02mol/L氢氧化饷溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化纳的用最为10.75mL，磨溶后用水稀释至250mLo 变色fE围，pH值等于1.2为红色;pH值等于2.8为黄色;pH值大于4.0为政色。4. 10 活性炭的活化z加200g炭粉于1L盐酸。+9)中，加热回流12h，过滤.用水洗至无铁离子(Fe I )为止，授于1l0120C烘箱中干

6、燥，备用。检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氟化梆与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入.如有铁离子则产生蓝色沉淀。5 仪器、设备5. 1 荧光分光光度计:激发波长350nm，发射波长430nm , 1 cm石英比色皿。5.2 实验室用样品粉碎机。5. 3 实验室常用仪器、设备。6试样制备取具有代表性样品，用四分法缩分至200g，然后粉碎至过0.45mm(40曰)筛，混匀后装于密封容器，保存备用。7 测定步骤7. 1 试样中碱性物质量的预检称取试样1g于烧杯中J日10mL偏磷酸一乙酸溶液(4.1)，用百里盼蓝指示剂检查pH值.如里红色，即叮用偏磷酸乙酸溶液作样品提取稀释液。若呈黄色或

7、蓝色，则滴加偏磷酸乙酸硫酸溶液(1.3), 使其变红，并记录所用量。7.2 试样溶液的制备你取试样若干克(精确至O.000 1 g，含抗坏血酸约2.510 mg)于100mL容量瓶中，按7.1预检碱量，加偏磷酸乙酸硫酸溶液(4.3)调至pH为1.2，或者直接用偏磷酸乙酸溶液(4.1)定容，摇匀。如样品含大量悬浮物，贝需进行过滤，滤液为试样溶液。7.3 测定步骤7. 3. 1 氧化处理:分别取上述试样溶液(7.2)及标准工作溶液(4.8)100mL于200mL带盖三角瓶中，加2g活性炭(4.10)，用力振摇1mn，干法过滤，弃去最初数毫升，收集其余全部滤液，即为样品氧化液和标准氧化液。7.3.2

8、 各取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明标准及标准空白。7. 3. 3 各取10mL样品氧化液于两个100mL容量瓶中分别标明样品及样品空白。7. 3. 4 f标准空白及样品空臼溶液中各加5mL棚酸乙酸销溶液(4.5)，混合摇动15min.用水稀释至100mL 7.3.5 r标准及样品溶液中各加5mL乙酸销溶液(4.4) ，用水稀释至100mL。7.3.6 荧光反应:取7.3.4中标准空白气样品空白溶液及7.3.5中样品溶液2.0mL.分别置于10 mL带盖试管中。在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胶溶液(4.6) ，振摇混合，在室温下反应35 min，-f激发波长350nm，

9、发射波长430nm处测定荧光强度。7. 3. 7 标准曲线的绘制:取上述标准溶液(7.3.5)(抗坏血酸含量10问/mL)O.5，1.0，1.5和2.0mL 际准系列，各双份分别?辈子10mL带盖试管中，再用水补充至2.0mL，荧光反应按7.3. 6。以标准系列) -;t强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应抗坏血酸含量(flg)为横坐标，绘制标准曲线。21!l GB!T 17816-1999 8 分析结果的计算及表示分fli结果按式(1)计1x茧m ) I ( 式中X每手克试样中含抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总量，mg;C一一从标准曲线上查得的试样液中抗坏血酸的含量，g;m 试样质量.g;n一试祥溶液的稀释倍数。所得结果表示主1小数点后一位。9 允许差每个试样称取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。在每千克饲料中抗坏血酸的含量小于或等于1000 mg时，测定结果的相对偏差不大于10%。在每干克饲料中抗坏血酸的含量大于1000 mg 时，测定结果的相对偏差不大于5%。:! li二