GB T 2930.6-2001 牧草种子检验规程 健康测定.pdf

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1、ICS 65.020. 20 B 21 GB 中华人民共和国国家标准G/ T 2930. 1 - 2930. 11- 2001 牧草种子检验规程Rules for forage seed testing 2001- 03 -14发布2001 - 06-01实施国家质量技术监督局发布GB/ T 2930. 6- 2001 前本标准是根据国际种子检验协会(lSTA)(国际种子检验规程)(1999年版对GB2930-1982(牧草种子检验规程进行修订。本标准在植物种及其检验方法等主要技术内容上，等效果用了国际规程(lSTA.1999)的第七部分:种子健康测定。另外，又纳入了国际规程来列入、但在我国具

2、有重要经济价值且有造宜检验方法的29个植物种，旨在使标准既具有国际标准的先进性和科学性，又可满足我国种子检验工作的实际需要。本标准对GB2930-1982第9章的主要改变包括:调整了抨样的植物种;增补了剖粒检验、染色检验、比重检验和软X射线检验等四种检验方法。本标准是GB/T2930. 1 2930. 11-2001(牧草种子检验规程系列标准之一。该系列标准由以下部分组成:GB/ T 2930. 1- 2001 牧草种子检验规程杆样GB/ T 2930. 2- 2001 牧草种子检验规程净度分析GB/T 2930. 3- 2001 牧草种子检验规程其他植物种子数测定GB/T 2930. 4-

3、2001 牧草种子检验规程发芽试验GB/ T 2930. 5- 2001 牧草种子检验规程生活力的生物化学(四瞠)测定GB/ T 2930. 6-2001 牧草种子检验规程健康测定GB/ T 2930. 7- 2001 牧草种子检验规程种及品种鉴定GB/T 2930. 8- 2001 牧草种子检验规程水分测定GB/T 2930. 9- 2001 牧草种子检验规程重量测定GB/ T 2930. 10- 2001 牧草种子检验规程包衣种子测定GB/ T 2930. 11-2001 牧草种子检验规程检验报告修订后的标准在编写格式上，与国际规程有一定区别。国际规程将所有附件均置于全部检验项目的正文之后

4、，而且规程的大部分内容在附件之中，使用时需前后相互参照，颇为不便。而本标准在编排上，将各项目均作为独立的标准编写，将主要内容编在正文之中，并将相关的附录紧继各标准的正文之后。62 本标准自实施之日起，代替GB2930-1982第9章。本标准由中华人民共和国农业部提出井归口。本标准起草单位:农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)。本标准主要起草人:王彦荣;参加起草人员:南志标、李春杰、朱廷恒、孙建华、余玲。GB/ T 2930.6-2001 ISTA前言农业上最大的风险之一是所播品种的种子不能表现其生产能力。种子检验便是为了在播种前评定种子的质量，使这种风险降到最低程度。种子质量是由

5、不同特性综合而成的概念。这些特性对种子产业的不同部门一一生产者、加工者、储藏者、经营者、农民、认证机构以及负责种子管理的政府机构或部门等极为重要。在所有情况下，检验的最终目的是测定种子的种用价值。种子是有生命的产品，其状况不像检验无生命或非生物产品那样能准确地予以预测。所采用的方法必须基于种子科学知识和种子检验工作者经验积累，所要求的准确性和重演性则因检验的目的而定。本规程规定的标准定义和方法可用于国际贸易间的种子质量评定，为此目的，检验方法的高度准确性和重演性是必须的。当种子交易超越国界时，有可能在不同国家的检验室检验。因此，所有检验室采用一致的标准方法非常重要，这样可在允许范围内获得一致的

6、检验结果。本规程分为两部分一一规程正文和附件。规程正文部分阐述了各项目测定的目的和原则、采用的定义、以及概述了所用的方法和程序。附件部分对定义加以引申，并详述了规程中所规定的程序和方法。如按照本规程检验的结果，需填报协会的国际种子检验证书，那就必须严格地遵守规程，对规程每项条文的解释应与该章附件中的有关细节相符。建议一个国家在管理国内种子贸易和实施国家种子质量管理法规时，应尽可能采用本规程及其附件。虽然此种情况并不必采用国际种子检验证书，但应认识到，如果与这个为国际范围所接受的规程和附件条文不符，将会阻碍各国间的种子自由流通。咨询检验(advisorytests)是一种根据送验者要求、为特殊目

7、的而进行种.子批评价的检验。这种检验需考虑诸如播种的季节、土壤类型和海拔高度等因素。对于这种检验，本规程和附件仅提供一个基本的指导，有关文献的其他技术可作为补充方法。本规程和附件是为世界主要作物制定的。尽管不是每个细节，但是原则上也适用于本规程未提及的其他作物种类。另外，为提供足够的指导，有必要提到专门制造商的仪器设备，但这并不意味着ISTA认为此类仪器设备最好，而排除其他制造商的同类产品。63 中华人民共和国国家标准牧草种子检验规程健康测定GB /T 2930.6-2001 Rules for forage seed testing一Seed health testing 代替GB2930-

8、1982第9章1 范围本标准规定了种子健康状况的测定方法。本标准适用于牧草种子、草坪草种子和饲料作物种子质量检验的健康测定。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 2930. 1- 2001 牧草种子检验规程抨样3 检验目的健康测定的目的是测定供验样品的健康状况，据此推测种子批的健康状况。种子健康测定的重要性主要体现在以下三个方面:a)种子长途调运或进出口，可将病害带入新区，影响草地畜牧业及农业生产。b)种子携带病原体可引起田间病害，逐步蔓延，降低

9、牧草的商品价值。c)种子携带病原体，可降低其发芽率或田间出苗率，影响种子价值及草地建植。4 定义本标准采用下列定义。4.1 种子健康状况seed health 种子是否携带病原体(如真菌、细菌及病毒等)和有害动物(如线虫和昆虫等)，也包括微量元素缺乏症等生理状况。4.2 培养incubation 将种子保持在有利于病原体发育或病症发展的环境条件下。4.3 预处理pretrea tmen t 为便于检测，培养前在实验室内用某种物理或化学方法处理种子。4.4 处理treatment 应用某种物理或化学的方法对送验的种子样品进行处理。5 器具与试剂5. 1 器具国家质量技术监督局2001-03-14

10、批准64 2001 - 06 -01实施a)体视显微镜(40倍hb)显微镜(400倍); c)培养箱(光、温控制hd)冰箱(5.C20.C); e)高压消毒锅;f)超净工作台;g)离心机;h)振荡器;i)近紫外灯;GB/ T 2930. 6-2001 j)培养皿、酒精灯、载玻片、血球计数板等。5. 2 试剂a)苯胶蓝;b)乳盼油;c)次氯酸铀;d)酒精;e)无菌水;f)蒸馆水。6 检测程序6. 1 试验样品根据测定方法，可把整个送验样品或其中的一部分作为试验样品。当将送验样品的一部分作为试验样品时，按GB/T2930. 1-2001中7.2的规定进行分取。试验样品一般不得少于400位或是相当重

11、量的净种子，必要时，可设重复。特殊情况下，要求送验样品大于GB/T2930. 1-2001中6.4.4所规定的数量时，须预先通知抨样员。6.2 方法根据所检测的病原体、种子种类及测定目的，可采用下述不同的测定方法进行检验。6.2. 1 未经培养的检验此类检验不能表明病原菌的生活力。6. 2.1.1 直接检验:适用于检测混杂于种子间的病菌子实体、杂质或外表有明显症状的种子。包括麦角、菌核、线虫瘦、虫瘦、黑穗病、抱子团、蜻类及种子病株残体或其他杂质上的病虫害症状，如变色或损伤等。必要时，可用体视显微镜镜检确认，取出病原体或病粒，称重或数取粒数，计算百分率。蔚股颖粒线虫CAnguinaagrosti

12、s CSteinbuch) Filipjev J 取400粒种子，用肉眼直接观察，带虫瘦的小花暗紫褐色，雪茄形，长45mm，其颖片长度是正常种子的23倍，而外秤和内秤则分别是正常种子的58倍和4倍左右，与正常种子明显不同。为进一步确认，可将虫瘦置于湿滤纸上112h，与正常种子相比，浸润后的虫瘦为褐色，松软，用解剖针挑开颖片，可见大量粒线虫的幼虫，在解剖镜下虫体清晰可见，体长O.750. 80 mm，体宽0.017mm，计算虫瘦种子数量百分率。6. 2. 1. 2 吸胀种子检验:适用于检测经水、乳酣油或其他液体浸泡后，大量释放抱子或子实体、害虫、病原体更容易观测或症状更为明显的病害。浸泡吸胀后的

13、种子用体视显微镜检查其表面或内部，计算带病或虫害种子数量百分率。黑麦草盲种病CGloeotiniatemulenta (Prill. & Delacr. ) Wilson , Noble & Gray J 取400粒种子，在温水中浸软(一般需2h)，体视显微镜(40倍)下挑去颖片，观察水中的胚和颖果。65 GB/T 2930. 6- 2001 病种表现为胚干税，颖果具锈红色斑点，病部释放出海浊的抱子流。为进一步确定病原菌，可将种子单独漫泡，置于载玻片上，加数滴蒸锢水，而后将此载玻片置于湿滤纸上，加罩保湿。浸泡4h后，将种子转至另一载玻片上，挑去颖片，于显微镜下(400倍)观察。抱子元色，圆柱形

14、或腊肠形，两端钝圆，12m14mX3m3.5m，抱子两端各有一个油、滴。统计释放抱子的带菌种子，计算带菌种子百分率。6.2.1 . 3 洗涤物检验:适用于检查粘附在种子表面的各种病菌抱子或病原线虫，如禾谷类作物的黑粉菌CTilletiacries (DC. ) Tul , T . controversa Khn和T.foetida (Wallr. ) Liro等和盲宿、三叶草的茎线虫CDictylechusdipsaci (Khn) FilipjevJ等。检验样品浸在加过湿润剂的水或酒精中，用力振荡，将粘附在种子表面的真菌抱子、菌丝、线虫等冲洗下来。然后把洗涤液进行过滤、离心、浓缩或蒸发，除去

15、过剩的液体，并用显微镜检查提取物。计算每克种子所帖附抱子数。沙打旺匍柄霉叶斑病(Stemphyliumbotryosum Wallr. ) 称取种子40g，置于500mL三角瓶内，注入含有0.1%洗衣粉的无菌水60mL，加塞剧烈振荡10 min，将洗涤液倾入离心管内，以10002 400 r/min的转速离心10min，用吸管移去上清液，保留沉淀液0.3mL，加入4%的明胶溶液，使离心管内沉淀物总量为0.5mL，稍加振荡，使之混合成为试样。采用血球计数板观测统计于包子数量，至少5次重复。分生于包子深褐色，球形，椭圆形，26个横隔膜，13个纵或斜隔膜，分隔处缝缩，表面有小刺或小瘤，1264mX8

16、30m，统计每大格内的抱子数量，用式(1)计算每克种子粘附于包子数:每大格的平均抱子数X250 000 -;- O. 5 抱子数(个/g)= .( 1 ) 5/ 40 g(种子样品重)6.2. 1. 4 剖粒检验:适用于检验饲料作物种子内寄生的害虫。取400粒种子，用刀剖开或切开种子的受害或可疑部分检查，确定虫害种子数，计算百分率。6.2.1.5 染色检验:适用于检验牧草和饲料作物种子内部的病原体或害虫。禾草内生真菌(Neoty户hodiumspp. ) 数取400粒种子，室温下在的5%氢氧化饷(NaOH)溶液中浸泡过夜(约14h)，而后将种子倾于铺有纱布的漏斗内，自来水冲洗35min;冲洗过

17、的种子移人烧杯内，加人苯胶蓝溶液(水溶性苯胶蓝0.325 g，水100mL ,85 %的乳酸50mL)，以淹没种子为宜，在电热板上加热煮沸35min，冷却后，每次取一粒种子，置于载玻片上;解剖镜下，用解剖针移去颖片，加1滴苯胶蓝溶液，盖玻片下轻轻按压种子，使种子组织均匀地散布于盖玻片下:显微镜(400倍)下观察糊粉层内深蓝色的有隔菌丝体，即为内生真菌菌丝体，逐一镜检每粒种子，统计种子带菌数，计算百分率。豌豆集(Bruchuspisorum L. ) 取400粒种子，放入铜丝网中或用纱布包好，漫入1%腆化饵或2%腆酒溶液中11.5 min。而后移入0.5%的氢氧化饷溶液中，浸30s，取出用清水洗

18、涤1520s，立即逐一检验。凡豆粒表面有12mm直径的圆斑点者，即为豆象感染。统计虫害种子数，计算百分率。6.2.1.6 比重检验:取400种子，除去杂质，倒入食盐饱和溶被中(食盐35.9g溶于1000 mL 水中), 搅拌1015min，静置12min，将悬浮在上层的种子取出，按6.2.1. 4进行剖粒检验，计算虫害种子百分率。6. 2. 1. 7 软X射线检验:用于检查种子内隐匿的害虫，如豌豆象(Bruchuspisorum L. )、谷象(Sitohylus granarius L. ) ，通过照片或直接从荧光屏上观察，统计虫害种子数，计算百分率。6.2.2 培养后检验试验样品经过一定时

19、间培养后，检查种子内、外部和幼苗上是否存在病原菌、害虫或生理障碍等症状。通常应用的方法有三类。阪水纸法:适用于多种类型种子的种传真菌检验，尤其适于检测半知菌。此法有利于于包子形成和致病菌在幼苗上症状的发展。种子不论是否经过预处理，在培养期间的排列要适当隔开，以免病原体再次传染。光照可促进某些真菌抱子的形成，有时需用冷冻或其他方法抑制发芽。鉴别抱子时，需用双目解66 GB/ T 2930. 6-2001 剖镜或复式显微镜。黑麦草叶斑病(Drechslerasiccans (Drechs. ) Shoem, D. dictyoides f. sp. perennis Shoem , D. te t

20、ramera (Mck. ) Sub &. lain, D. sorokiniana (Sacc. ) Sub. &. Jain) 取三层吸水纸(粗滤纸)，于水中浸透，甩掉表面明水，铺于直径9cm的培养皿底部，作为培养床。种子不经表面消毒，直接置于吸水纸上，每血25粒种子，共取400粒，20.C、12h光照(近紫外灯或日光灯条件下培养7d。在体视显微镜下逐粒检查种子，根据种子表面真菌菌落生长习性、菌丝体特征、子实体形态和着生状态等，确定病原真菌种类，统计带菌种子数，计算带菌种子百分率。燕麦斑枯病(Pyrenophoraavenae Ito &. Kuribay，无性阶段;Drechsleraa

21、venae (Eidam) SchariO 未经表面消毒的种子置于玻璃培养皿内，烘箱内100.C下处理1h，而后移出，降至室温。每皿25粒种子，共取400粒，均匀置于吸水纸培养床上，20.C黑暗条件下培养1d，移入-20.C冰箱内冷冻1d，而后在20.C、12h光照(近紫外灯)条件下培养5d。体视显微镜(40倍下，检查病菌，深褐色的分生抱子梗单生或2-3根束生。分生抱子浅褐色或榄褐色，圆柱形，两端钝圆，多单生。显微镜(400倍)下，分生抱子30-70mXll-22m，1-9个分隔。统计带菌种子数，计算百分率。6. 2. 2.2 琼脂皿法:主要用于鉴定萌发较慢的潜伏在种子内部的病原菌。种子通常经

22、过预处理，间隔排列在经过灭菌的琼脂表面上进行培养。有经验的检验员，仅用肉眼便可根据菌落形态鉴别菌的种类。柱花草炭瘟病(Colletot对chumgloeospsrioldes (Penz. ) Penz. , C. truncatum (Schwei) Andrus &. 肌1oore)数取400粒种子，用1%次氯酸铀溶液中消毒10min，无菌蒸锢水冲洗5次，无菌滤纸上干燥，每皿10粒种子，置于玉米粉琼脂培养基上，25.C、12h光照条件下培养。自培养第二天起逐日用肉眼检查每粒种子上菌落生长，直至第14天。该菌生长较慢，14d菌落直径为2-3cm，菌丝体稀疏，自至浅灰色，分生抱子盘单生或聚生，

23、上茹黑色或褐色刚毛，奶油色(c.truncatum)或桔黄色(C.gloeos户orioides)的强子群体覆盖整个菌落，成菌服状。菌落的背面为浅灰色至褐色，并随培养时间而加深。初次鉴定时应在体视显微镜下观察菌落形态，并制片在显微镜下确认，待熟悉时，根据菌落形态，肉眼便可鉴别。6. 2. 2. 3 砂床、人工堆肥及类似的培养基法:适合于某些病原体鉴定。将除去杂质并通过1mm筛子的细粒砂子清洗，高温烘干消毒后，放人培养皿内加水湿润。以适当距离播种，培养条件与纸床相同，待幼苗顶到培养皿时镜检。6.2.3 生长植株的检查有时将种子培育成植株，然后检查其病症，这是测定样品中是否存在细菌、真菌或病毒等最

24、切实可行的方法。可从供检的样品中取出种子进行播种，或从样品中取得接种体，对健康幼苗或植株的一部分进行感染试验。植株应防止意外感染，并需严格控制接种条件。7 结果计算和表示以试验样品中感染种子数目(重量的百分率或病原体数目(重量)的百分率表示。填写结果应同时说明所用的测定方法，包括所用的预处理方法和用于检查样品的数量，并写明病原菌或昆虫的学名。67 FCON-F.ogNIF-omN 同阁。中华人民共和国国家标准牧草种子检验规程GB/T 2930. 12930. 11- 2001 9峰中国标准出版社出版北京复兴门外三里洞北街16号邮政编码:100045电话:68523946685 17548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售峰开本880X12301/16 印张6%字数210千字2001年8月第一版2001年8月第一次印刷印数1-1500 9峰定价50.00 网址JIj 书号:155066.1-17711 576-543 版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533祷科目GB/T 2930.1-2001 H