DB42 T 1412-2018 医疗机构物体表面清洗效果现场快速检测-ATP生物荧光法.pdf

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1、ICS 11.080.99 C 47 备案号 DB42 湖北省 地 方 标 准 DB 42/T 1412 2018 医疗机构物体表面清洗效果现场快速检测 -ATP 生物荧光法 Rapid detection of surface washing effect in medical institution - ATP bioluminescence method (报批稿 ) 2018 - 09 - 04 发布 2018 - 11 - 24 实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 1412 2018 I 目 次 前言 . III 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定

2、义 . 1 4 方法原理 . 2 5 设备与试剂 . 2 6 工作环境 . 2 7 校准曲线绘制 . 2 8 操作步骤 . 3 9 样品 ATP 含量和洗手后 RLU 值下降率的计算 . 3 10 清洗效果预警值 . 4 附录 A（资料性附录） ATP 生物荧光法参数 . 5 附录 B（规范性附录） ATP 生物荧光法物体表面采样检测方法 . 8 DB42/T 1412 2018 II DB42/T 1412 2018 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和 编 写 给出的规则起草。 本标准由 湖北省 卫生计生委提出并归口 管理 。 本标

3、准主要起草单位：武汉市疾病预防控制中心、湖北省疾病预防控制中心。 本标准参与起草单位： 武汉市医院感染管理质量控制中心、 武汉市中西医结合医院、武汉市第三医 院、武汉市中心医院、湖北省妇幼保健院、武汉市第八医院。 本标准主要起草人：许慧琼、张天宝、 梁建生、刘志钢、陈晓婷、何小满、雷新云、汤建荣、王一 梅、 王斌 、 黄晓波 、彭燕琼、唐朴勤、邱菊红、高峡、朱明秋、王志、 张继锋。 DB42/T 1412 2018 1 医疗机构物体表面清洗效果现场快速检测 -ATP 生物荧光法 1 范围 本标准规定 了医疗机构物体表 面清洗效果现场快速检测 ATP生物荧光法 的 方法原理、设备与试 剂、 工作

4、环境 、校准曲线绘制、操作步骤、样品 ATP含量和洗手后 RLU值下降率的计算及清洗效果预警 值。 本标准适用于使用一体式 ATP物体表面测试管进行的医疗机构医疗器械机械清洗消毒（湿热）及医 务人员洗手效果现场快速检测及其结果预警判断。 注 1： 环 境物体表面清洗效果现场快速检测及其结果预警判断不适用于本标准。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5750.3-2006 生活饮用水标准检验方法 水质分析质量控制 GB/T 6682 分析实

5、验室用水规格和试验方法 GB 15982 医院消毒卫生标准 GB/T 36004 食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法 WS 310.2 医院消 毒供应中心第 2部分：清洗消毒及灭菌技术操作规范 WS/T 313 医务人员手卫生规范 TB/T 3121-2005 铁路食（饮）具洁净度 ATP生物发光检测法和分级判定 3 术语和定义 TB/T 3121-2005和 GB/T 5750.3-2006界定的以及下列术语和定义 适用于本标准。为了便于使用以下 重复列出了 TB/T 3121-2005和 GB/T 5750.3-2006中的某些术语和定义。 3.1 ATP adenos

6、ine triphosphate 腺嘌呤核苷三磷酸（简称 三磷酸腺苷 ）是一种不稳定的高能化合物 ， 由腺嘌呤、核糖和 3个磷酸基 团连接而成，水解时释放出能量较多， 为 生物体内最直接的能量来源。 3.2 相对光单位（ RLU） relative light unit 样品经 ATP生物荧光检测仪检测后，所显示在仪器上的读数。 注 2： 本标准中，在 RLU 检测模式下的读数，即为相对光单位， ATP 含量越高， RLU 值越高。不同的 ATP 生物荧光 检测仪 对同一样品进行检测时所得的 RLU 值可能各不相同。 TB/T 3121-2005，定义 2.2 3.3 ATP 含量 ATP c

7、ontent DB42/T 1412 2018 2 样品中所包含的微生物细胞内 ATP、体细胞内 ATP及细胞外 ATP经裂解剂等试剂处理后释放出来能 与荧光素发生生物化学反应的 ATP总量，单位为 mol。 3.4 ATP 标准溶 液 ATP standard solution 具有足够均匀和稳定的特定特性，并附有由权威机构发布文件，且有溯源性的含有 ATP的溶液。 3.5 校准曲线 calibration curve 描述待测物质浓度或量与检测仪器响应值或指示量之间的定量关系曲线，分为“工作曲线”（标准 溶液处理程序及 分析步骤与样品完全相同）和“标准曲线”（标准溶液处理程序较样品有所省略

8、，如样 品预处理）。本标准中使用“标准曲线”作为校准曲线。 GB/T 5750.3-2006， 定义 5.1 3.6 预警值 early warning value 用于早期发现风险的判断值，当评价指标大于或小于该值时，存在有医疗器械机械清洗 消毒（热力） 不合格或医务人员卫生手洗手不合格的风险，提示应查找原因并采取相应措施（如重新清洗等），以达 到早期预防感染的目的。 4 方法原理 ATP存在于所有动植物、微生物细胞内， ATP生物荧光法是利用一种生物 化学反应，即荧光素和 O2 在 Mg2+和荧光素酶的催化下与 ATP进行反应，将化学能转化为光能，产生 560nm的荧光，而在其他反应 物过

9、量的情况下，发光强度与 ATP含量成正比关系 。因此，使用 ATP生物荧检测仪对发光强度进行测量， 即可测定出 ATP的含量。 5 设备与 试剂 5.1 ATP 生物 荧光 检测仪 应选用 灵敏度 不 低 于 1.010-15 mol的仪器，每年对仪器进行检定，检定指标可参照附录 A选择。 5.2 ATP 标准溶液 ATP含量不低于 1.010-12mol，在 2 8 环境下冷藏 ， 并在有效期内使用 。 5.3 一体式 ATP 物体表面 测试管 包 括采样拭子和荧光素酶等反应液；同一产品拭子的大小一致，保持一定湿润度，浸有符合厂家要 求的采样液；测试管内含荧光素酶等反应液的质量应符合厂家要求

10、。 应置于铝膜袋中避光密封保存，在 2 8 环境下冷藏 ， 并在有效期内使用。 6 工作环境 检测工作应在 室温 （ 20 25 ） 下进行 。 7 校准曲线绘制 DB42/T 1412 2018 3 新检测仪器投入使 用前、试剂更换批号后及修理、检定后应进 行校准曲线绘制，参照 GB/T 5750.3 绘制校准曲线，用至少 符合 GB/T 6682中三级水标准的 纯 水 将 ATP标准 溶液作 系列梯度稀释， ATP含量 包括 1.010-12 mol 1.010-15 mol，最低含量应为仪器最低限出检值，每次取各稀释溶液 10 l滴在采样拭 子上，检测方法按附录 A执行，读取 RLU值，

11、各 稀释度溶液重复测定 3次，取平均值， 分别以 ATP含量对 数值和 RLU值对数值为 x、 y轴 拟合 校 准曲线 y a bx 。 8 操作步骤 8.1 样品准备 样品符合附录 B要求。 8.2 试剂准备 检测前将 一体式 ATP物体表面测试管 从冷藏环境中取出， 待恢复至室温后使用 。 8.3 仪器准备 开机预热 ，关闭检测仓，仪器完成自检程序后，正常进入工作状态。 8.4 采样方法 参照 GB 15982进行采样，具体方法 按附录 B执行。 8.5 检测方法 参照 GB/T 36004进行检测，具体方法 按附录 B执行。 9 样品 ATP 含量和洗手后 RLU 值下降率的计算 9.1

12、 样品 ATP 含量 依据 7中拟合的校准曲线 y a bx ，按式 （ 1）和（ 2） 换算样品的 ATP含量： yax b （ 1） ATP含量（ mol） 10 x （ 2） 式中： y 检测的 RLU值对数值 ； a 校准曲线的常数项 ； b 校准曲线的斜率 ； x ATP含量对数值 。 9.2 洗手后 RLU 值下降率 医务人员洗手后 RLU值下降率 =（洗 手前 RLU值 -洗手后 RLU值） /洗手前 RLU值 100% （ 3） DB42/T 1412 2018 4 10 清洗效果 预警值 10.1 按照式 （ 1）和（ 2）换算样品的 ATP 含量，医疗机构医疗器械当采用机械

13、清洗消毒（热力）时， ATP 含量预警值为 210-15 mol。 10.2 医务人员洗手后，按照式 （ 3）计算 RLU 值下降率（ %），预警值为 90%。 DB42/T 1412 2018 5 A A 附 录 A （资料性附录） ATP 生物荧光法参数 A.1 稳定性 在 检测 仪器良好工作情况下，在 5h内，每隔 20min取 1.010-15 mol的 ATP标准溶液对仪器进行 10次测 量，按式（ 4）计算稳定性 R ， 10%R 。 12 100%RRR x （ 4） 式中： R 稳 定性， %； R1 10次测量的极大值， RLU； R2 10次测量的极小值， RLU； x 1

14、0次测量的平均值， RLU。 A.2 线性相关系数 在 检测 仪器良好工作情况下， 按 7拟合 校准曲线 ： y a bx ，其中 x为 RLU值 的对数值 ， y为 ATP 含量 的对数值 （ mol），按式（ 5）计算线性相关系数 r。 1 22 11 ( ) ( ) ( ) ( ) n ii i nn ii ii x x y y r x x y y （ 5） 式中： r 线性相关系数 ； ix 第 i个浓度 测量值 的平均值对数值 ， RLU； x n个浓度 测量 平均值 的平均值 对数值 ， RLU； iy 第 i个浓度的 ATP含量对数值 ， mol； y n个 ATP含量的 平均值

15、 对数值 ， mol； N 浓度数量 。 A.3 最低 检出限 DB42/T 1412 2018 6 在 检测 仪器良好工作情况下，不对 一体式 ATP物体表面测试管 内拭子做任何处理，直接与管内 反应 液 混匀后进行 20次空白测量， 并按 7拟合的校准曲线进行 ATP含量换算，再 按式（ 6）计算得标准偏差 S， 按式（ 7）计算检出限 LC （ mol）。 2() 1ixxS n （ 6） 3LCS （ 7） 式中： S 标准偏差 ， mol； LC 检出限， mol； ix 第 i次测量值， mol； x 20次测量的平均值， mol n 测量次数 。 A.4 零点漂移 在 检测 仪器

16、良好工作情况下，使用 ATP阴性标准管进行零点校准，读取初值，等待 30min后继续读 数为变化值，变化值和初值之差即为仪器零点漂移 ， 30min内的零点漂移 10RLU。 A.5 重复性 在 检测 仪器良好工作情况下， 使用移液器取含量 为 1.010-15 mol的 ATP标准溶液 ，检测 20次，依据 贝塞尔公式计算仪器重复性， RSD 8%。 1 100%1 n ii xxR S D x n （ 8） 式中： RSD 相对标准 偏差， %； ix 第 i次测量值， RLU； x 20次测量的平均 值， RLU； n 测量次数 。 A.6 校准曲线的不确定度 分析方法或仪器通常是通过观

17、察被分析物 x的不同浓度的响应值 y来校准的。在大多数情况下，这种 关系被认为是线性的，通常通过最小二乘法回归来确定 7中校准曲线的 a和 b，在做阳性对照时，选取 ATP 含量 2.010-15 mol为 x，仪器检测 RLU显示值为 y1，按式（ 1）和（ 2）换算 ATP含量为 x1，按式（ 9）计算 该点（ x1,y1）的线性最小二乘法校准的不确定度。大多数情况下，扩展不确定度为 2U，因此以（ x2U） 作为评价阳性对照 x1是否合格的标准。 DB42/T 1412 2018 7 2 1 2 1 ()11 ()n i i xxSU b p n xx （ 9） 2 1 ( ) 2 n

18、iii y a b xS n （ 10） 式中： U 不确 定度 ， mol； b 斜率 ； p 测试 jx 的次数 ； ix 第 i次测量值 对数值 ， RLU； x 不同校准标准溶液 的平均值 对数值（ n次） ， RLU； n 测量次数 。 DB42/T 1412 2018 8 B B 附 录 B （规范性附录） ATP 生物荧光法物体表面采样检测方法 B.1 采样原则 B.1.1 送检时间 采样后 进行现场检测 。 B.1.2 采样对象 分别对医疗器械 机械 清洗 消毒（湿热 ） 后和医务人员洗手 前 后 按下列要求 进行采样。 a) 医疗器械 按 WS 310.2完成 机械 清洗 消

19、毒（热力） 程序后干燥 恢复到室温，在检查打包之前进行 采样 。 b) 医务人员手 在手卫生指征前保持手干燥进行采样； 按 WS/T 313 附录 A要求 使用流动水 进行洗 手，不使用手 消毒剂， 干燥后再次进行采样 。 B.2 采样方法 B.2.1 医疗器械 B.2.1.1 被采医疗器械表面 100 cm2，取全部表面；被采医疗器械表面 100 cm2，取 100 cm2。 B.2.1.2 非管腔类医疗器械采手持部位以下的内、外侧表面 ，重点涂擦咬合处 ；管腔类医疗器械采器 械内、外侧前端 5 cm。 B.2.1.3 取出 一体式 ATP物体表面测试管 内的 采样 拭子，在 采样部位 从上

20、至下分别往返涂擦各 2次，在 涂擦过程中注意 拭子与医疗器械紧贴，并 随之转动拭子 ，用力均匀 。 B.2.2 医务人员手 取出 一体式 ATP物体表面测试管 内的 采样 拭子， 在双手手指曲面从指跟到指端来回涂擦各 2次 （一 只手涂擦面积约 30 cm2） ， 拭子紧贴 手指，并随之转动拭子 ，用力均匀 。 B.2.3 个人防护用品 采样时佩戴无粉、无菌手套及一次性口罩、帽子。 B.3 检测方法 采样后将拭子与 测试管 中的 反应液 充分混合， 中等力度均匀敲打 80次，避免产生过多泡沫， 20s内 放入检测仓内进行检测 ，待显示屏数据稳定后，读取数值，单位为 RLU。 每批次的一体式 A

21、TP物体表面测试管应设一个空白对照。空白对照 对 采样 拭子不做任何处理，直接 与 测试 管内 反应液充分 混 合，中等力度均匀敲打 80次，避免产生过多泡沫， 20s内 放入检测仓内进行检 测 ，待显示屏数据稳定后，读取数值，单位为 RLU。 DB42/T 1412 2018 9 每批次的一体式 ATP物体表面测试管应同时设一个阳性对照。阳 性对照用 2.010-15 mol的 ATP标准 溶液进行检测，取 ATP标准溶液 10 l滴在采样拭子上， 与 测试 管内 反应液充分 混 合，中等力度均匀敲打 80次，避免产生过多泡沫， 20s内放入检测仓内进行检测 ，待显示屏数据稳定后，读取数值，单位为 RLU。 B.4 结果换算 根据 7绘制 的校准曲线 ，按式（ 1）和（ 2）将检测所得的 RLU值 换算 为 样品的 ATP含量 ，单位为 mol。 空白对照结果高于检出限时应更换 不同批次一体式 ATP物体表面测试管重新做空白对照；如仍不合 格则需对仪器 设备进行重新校准。 阳性对照结果偏离标准曲线（ x1超出 A.6标准）时应更 换不同批次一体式 ATP物体表面测试管重新 做阳性对照；如仍不合格则需对仪器设备进行重新校准或重新绘制标准曲线。 _