GB T 18932.3-2002 蜂蜜中链霉素残留量的测定方法 液相色谱法.pdf

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1、ICS 67. 180. 10 X 31 f占2非A./、-EZ刀国G/T 18932.3一2002Method for the determination of streptomycin residues in honey一Liquid chromatography method 2002-12-30发布JEL 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2003-06-01实施发布GB/T 18932.3-2002 古同GB/T 18932-2002分为12个部分，本部分为第3部分。GB/T 18932的本部分等同采用德国DlN0010761(柱后衍生高效液相色谱法测定蜂蜜中链霉素含量。本部分在

2、技术内容上与该方法一致，但是考虑到我国国家标准自身的特点及汉语表达习惯，对柱后衍生高效液相色谱法测定蜂蜜中链霉素含量的个别内容作了编辑性修改.本部分遵循GB/T1. 1-2000 (标准化工作导则第1部分z标准的结构和编写规则和GB/T 2000 1. 4-2001(标准编写规则第4部分z化学分析方法的编写规则。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单iL:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人:庞国芳、张进杰、曹彦忠、范春林、李学民、林忠。本部分系首次发布的国家标准。目U一一)GB!

3、T 18932.3-2002 蜜中链霉素残留量的测定方法液相色谱法范围GB!T 18932的本部分规定了蜂蜜中链霉素残留量的高效液相色谱测定方法.本部分适用于蜂蜜中链霉素残留量的测定。本部分链霉素的方法检出限为0.010mg!险。规范性引用文件2 下列文件中的条款通过GB!T18932的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.GB!T 6379-1986 (neq ISO 5725: 198 1) GB!

4、T 6682-1992 通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性分析实验室用水规格和试验方法(neqISO 3696: 1987) 测试方法的精密度原理3 试样中链霉素残留用磷酸溶液提取.提取液过滤后，用阳离子交换柱和C18回相萃取柱净化.用甲醉洗脱吸附在萃取柱上的链霉素残留.用旋转蒸发器减压蒸干洗脱液.用0.01mol!L庚饺磺酸纳溶液溶解残涯。费5液供带柱后衍生装置的高效液相色谱荧光检测器测定.试剂和材料4 甲醉2色谱纯.乙脐g色谱纯.正己统2分析纯。乙酸z分析纯.磷酸z优级纯.磷酸氢二何g优级纯.磷股二氧梆g优级纯。氢氧化纳2优级纯.4.9 庚饺磺酸纳:C，HNaO，S.H，O.

5、色谱纯.4.10 1.2茶酿-4-磺酸纳2分析纯.4. 11 叔丁基甲隧z分析纯。4. 12 阳离子交换住:苯磺酸型团相萃取柱.500mg.3 mL。使用前用5mL甲醇(4.1)和10mL水预洗并保持柱体湿润。4. 13 Cl8固相萃取柱:500mg.3 mLo使用前用5mL甲醇和10mL水预洗并保持柱体湿润.4. 14 玻瑞棉z磷酸浸泡。4. 1 4.2 民民wJaATaa吁a句4日4. 3 4.4 l G/T 1日932.3-20024. 15 i白主活i血，p H 2. 1 000 mL水中加入1mL磷酸(4.5) ，在pH测试仪上i向加腾酸饲节溶液pH2.4. 16 阶段盐fZ冲溶液，

6、0.2moI/L.pll8。称取33.46gi耳目主氢二怦(4.6)和.05日磷酸二氢怦( 4. 7)于2000 rnL烧杯中，加入900mL水井置于磁力搅拌器上搅拌，待其完全溶解后，用水定容至1000 mL在pH测试仪上滴加数滴践自空调节1妇在pH8.4. 17 氢氧化纳溶液0.2mol/L。称取8g氢氧化的(4.8)黯于1000 mL水中.4. 18 日1烧硕放的溶液，0.5 mol/L。称取11日庚j;资股制(4.9)溶于100mL 7:中。4. 19日5院lJIi酸的溶液，0.01mol/L, pH 3.3.称取2.2g m烧磺胶制于2000 mL烧杯中，加人900 mL7:使其完全溶

7、解，再转人1000 mL容E瓶中，用水定容至刻度。在pH测试仪上滴加乙酸(4. 4)诩节溶液pH3.3. 4.20 叔丁基fJ1M-正己烧混合F盯在，4+ 1.分别是取80mL叔丁基甲M(4.11)和20mL正己统(4.3)于100mL容E瓶中.混匀。4.21 链霉素标准物质含量大于95%.4.22 链霉素标准储备部液准确称取远是链霉素标准物质(4.2.1)，用水配成0.10mg/mL的标准储备活液，贮存于4C冰箱中。4. 23 饪霉素标准工作溶液s根据试验需要，用庆统碳股纳溶液(4.19)稀释标准储备液(4.22)配成适当浓度的标准工作浴液。4.24 试验用水为符合GB/T6682一1992

8、规定的一级水.5 仪器5. 1 高效液相色谱仪配有柱后衍生装置和荧光检测gL5. 2 旋转蒸发器。5.3 :空泵:真空度应达到80kPa. 5.4 pH计:目H1:精度+0.02.5. 5 液体混匀恕。5. 6 真空团相萃取装置.5. 7 仍液g，50 mL. 58，电心瓶，150mL. 5 9 平底烧瓶，200mL。5. 10 微量进样g，100L。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结品的实验室样品.将其搅拌均匀。对有结品的样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热.振荡，衍样品全部融化后搅匀.迅速冷却至室温.分出0.5kg作为试样.制备好的试样置于样品瓶中.密封.并标明标记

9、。6 2 试样的保存将试样于常温下f?clf . 7 分析步骤7. 1 提取称取10日试样.精确到0.01g.于150mL三角瓶中。加入25mL磷酸溶液(4.15)，在液体混匀23上问速混合5mIh佼试样完全溶解。f GB/T 18932.3-2002 7.2 净化7. 2. 1 阳南子交换柱净化在储液23底部塞入少许玻稿棉(4.14)并用适量水冲洗后，装在预洗好的苯磺酸固相萃取柱(4.12) 上.把样液(7.1)移入储液器。在真空萃取装置上，使样液以1.5 mL/min的流速通过苯磺酸固相萃取柱。分别用5mL磷酸溶液和10mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液.用30mL磷酸盐缓冲溶液(4.

10、16).以1.5 mL/min的流速洗脱链霉素于200mL平底烧瓶中.在洗脱液中加入3mL庚烧磺酸纳溶液(4.18)，摇匀.再用磷酸词节洗脱液pH=207.2.2 C18国相萃取柱净化将储液器装在预洗好的C18固相萃取柱(4.13)上.将上述洗脱液(7.2.1)移人储液器中.在其空萃取装置上，使洗脱液以1.5 mL/min的流速通过C18固相萃取柱.用5mL磷酸溶液淋洗C18固相萃1&柱，在真空泵65kPa负压下，减压拍干5min.再用4mL叔丁基甲隧-正己1;i1.混合榕液(4.20)淋洗C18回相萃取柱，同样减压抽干5min，弃去全部淋出液。用10mL甲醇以1.5 mL/min的流速洗脱链

11、霉素jJJ 150 mL鸡心瓶中，用旋转蒸发器于45C7c浴上将其跋压蒸发至干.加人1.0 mL庚烧磺酸纳m液(4. 19)溶解残渣，溶液供液相色谱测定.7.3 测定7. 3. 1 波相色谱条件a) 色谱柱:Hypersil 5m，C18柱，150mmX4. 6 mm(内径)或相当者sb) 流动相:称取1.10 g庚统磺酸纳和0.052gl.2-茶院-4政股纳(4.10)溶于500mL乙肪十水混合液(27+73)中，摇匀.用乙股(4.4)调节溶液pH=3.30通过调整乙脐比例，使链霉素出峰时间在9min左右。当天配制gc) d) e) f) 流动相流速:1. 0 mL/min; 检测器波长s激

12、发波长263nm.发射波长435nm; 色谱柱温度:50C , 衍生管10mXO.25 mm(内径).不锈钢管gg) 衍生剂.氢氧化纳溶液(4.17);h) 衍生管沮度:50C ; i) 衍生)11J流速:0.4mL/min; j) 进样fi!: 80Lo 7.3.2 色谱测定根据样品溶液中链霉素残留量，选择峰高相近的标准工作溶液.标准工作溶液和样品溶液中链霉素响应值均应在仪器检测线性范围内.对标准工作溶液和样品溶液等体积参插进样进行测定.在上述色谱条件下，链霉素保留时间约为9mino 链霉素标准物质的色谱图见附录A中的图A.10 本方法的添加回收率数据参见附录Bo7.4 平行试验按上述步骤，

13、对同一试样进行平行试验测定.7. 5 空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。B 结果计算结果按式(!)计算g一十一一一一一. . . ( 1 ) 3 Gll月18932.3-20029 式中gx一一试丰了中链霉素的残留含:fil:.单位为毫克每千克(mg/kg); h 样AJI溶液中链r.;lK的峰高.单位为毫米(mm); 人-一-标准工作溶液中饪霉素的岭南，单位为毫米(mm); C一一标准工作溶液中链霉素的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一一样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一最终样品溶液所代表的试样量，单位为克(g).注g计算结果需将空白值扣除.精密度GI:l/T

14、 18932的本部分精密度数据是按照GB/T63791986的规定，通过15个实验室对囚个添加水平的试样所做的试验中确定的。获得重复性和再现性的但是以95%的可信度来计算.9. 1 室复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(吵，本部分的重复性限按方程式(2)计算s蜂蜜中链霉素的含量在O.010 mg/kgO. 10 mg/kg范围gIgr = O. 850 4 Igm - O. 973 5 式中zm一一两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mg/kg) 如果差值超过重复性限，应含弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定-9.2 再现性. . . ( 2 ) 在再现性条

15、件下，获得的两次独立测试结果的绝对差但不超过再现性限(R)本部分再现性限按方和式(3)计算z衍蜜中链霉素的含量在O.010 mg/kgO. 10 mg/kg范围gIgR = O. 841 6 Igm - O. 879 5 . .( 3 ) 式中2川一一两次测定值的平均缸，单位为毫克每千克(mg/kg) j G/T 18932.3-2002 附录(资料性附录)标准物质色谱图A 同-egE 伺N目ZREN M ,唱，5 链霉素标准物质液相色谱图图A.1 ) G!T 18932.3-2002 飞3附录B(资料性附录)回收率本方法中链霉素添加浓度和回收率的试验数括:在添加量为0.010mg!kg时，平

16、均回收率为86.5 %; 在添加量为0.020mg!kg时，平均回收率为82.4 % ; 在添加量为0.050mg!kg时，平均回收率为82.7 % ; 在添加量为O.10 mg!kg时，平均回收率为82.1%。NOON-m.N的白F筐。国和共人华中 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045电话，68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售68517548 印张3/4字数14千字2003年3月第一次印刷 1/16 开本880X 1230 2003年3月第一版印数1-400 书号，155066.1-19295 网址版权专有侵权必究举报电话:(010 )68533533 民国家标准蜂宫中链霉素残留量的测定方法液相色谱法Gll/T 18932.3-2口02