GB T 14927.1-1994 实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法.pdf

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1、GBT14927.194 1 主题内容与适用范围 本标准规定了对近交系小鼠、大鼠生化标记进行检测的醋酸纤维膜（板）的电泳方法及判断标准。 本标准适用于经同系异体皮肤移植术证实为近交系的大鼠和小鼠任何品系。 2 术语 2.1 生化标记 biochemical marker 表明遗传特征并采用生化方法识别的记号。在大小鼠中多为一些同工酶和异构蛋白。 2.2 生化遗传概貌 biochemical genetic profile 各种近交系品系多个生化遗传标记表型资料的汇总，从一定程度上反应了各种品系的遗传特征。 2.3 纯合性 homozygosity 指同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态。近

2、交系动物通过连续的近亲交配所有的位点都具有纯合性。一个品系内任何个体间进行交配产生的后代也具有纯合性。 2.4 同基因性 isogenicity 一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的。因此在同一品系内任何个体间进行皮肤和肿瘤移植不被当作异己被排斥。如对近交系动物的基因进行检测，一个品系内不同的基因表型完全一致。 2.5 个体型 individuality 就整个近交系动物而言，每个品系在遗传上都是独特的，表现在相当广泛的特性上，如生化遗传概貌等。大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别。 3 方法原理 在大鼠和小鼠体内存在着一些同工酶和同种异构蛋白。可依据它们在特定电场内携带的电荷不同

3、采用电泳的方法将它们区分，并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基因型，建立各种近交品系的遗传概貌，定期对它们进行质量监测。 4 设备和材料 4.1 常压电泳仪； 4.2 醋酸纤维素膜电泳槽； 4.3 电泳点样装置； 4.4 醋酸纤维素膜； 页码，1/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm4.5 醋酸纤维素板； 4.6 4冰箱； 4.7 20冰箱； 4.8 低温高速离心机； 4.9 振荡仪； 4.10 组织匀浆器（2mL或5mL）； 4.11 抗凝毛细管； 4.12 抗凝毛细管塞子； 4.13 抗

4、凝毛细管离心机； 4.14 吸耳球； 4.15 小砂轮； 4.16 解剖板； 4.17 手术剪，手术镊； 4.18 竹镊子； 4.19 水浴锅； 4.20 37温箱； 4.21 玻璃器皿； 4.22 68cm玻璃板； 4.23 普通滤纸； 4.24 分析天平； 4.25 pH计； 4.26 紫外灯； 4.27 实验室常规用品； 4.28 化学试剂。 英文简写 中文名称 规格Tris 三羟甲基氨基甲烷 A.R.orEDTA 乙二胺四乙酸 A.R.or页码，2/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm

5、Boric Acid 硼酸 A.R.orGlycine 甘氨酸 A.R.orHCl 盐酸 A.R.orH2O双氧水 A.R.orCitrate acid 柠檬酸 A.R.orNa2HPO4磷酸氢二钠 A.R.orKH2PO4磷酸二氢钾 A.R.orNaOH 氢氧化钠 A.R.orNaC2H3O2醋酸钠 A.R.orAgar 琼脂粉 A.R.orFast blue R salt 坚固蓝R盐 A.R.Mg（C2H3O2）2醋酸镁 A.R.orMnCl2氯化锰 A.R.Ponceau S 丽春红-S A.R.CCL3COOH三氯乙酸 A.R.or（HO）C5H5（COOH）SO3H2H2O磺基水杨酸

6、 A.R.orBarbitone 巴比妥 A.R.orSodium barbital 巴比妥钠 A.R.orMgCl2氯化镁 A.R.orNa2EDTA乙二胺四乙酸二钠 A.R.orFeCl3三氯化铁 A.R.orK3Fe（CN）6铁氰化钾 A.R.orNH4OH氢氧化铵 A.R.orCH3COOH醋酸 A.R.orAcetone 丙酮 A.R.orGlucose-1-phosphate 葡萄糖-1-磷酸Cystamine 胱胺DTT 二硫代苏-Naphthyl acetate -醋酸萘酚4-Methyl-Umbellifery Acetate 4-甲基散形乙酸盐-Naphthyl Acid

7、Phosphate -磷酸萘酚D-Fructose-6-Phosphate D-果糖-6-磷酸MTT 溴化甲噻唑基四唑TPN 辅酶PMS 吩嗪甲硫酸酯Isocitric Acid 异柠檬酸Glucose-1，6-diphosphate 葡萄糖-1，6-二磷酸D-Glucose-6-phosphate 葡萄糖-6-磷酸Glucose-6-phosphate dehydrogenase 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶Malic acid 苹果酸页码，3/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm5 生化标记检测

8、方法总则 5.1 电泳样品的制备 5.1.1 血浆 以抗凝毛细管行眼眶采血术，500g，离心5 min，分离血浆和血球，吸出血浆备用。 5.1.2 溶血素 在去除血浆的红血球内加入蒸馏水（14 V V），振荡1 min，成为红色透明液体，即为溶血素。 5.1.3 组织匀浆上清液 颈椎脱臼法处死动物，剖腹，小鼠取肾脏1只，肝脏1叶；大鼠取肾脏1只，小肠3cm，睾丸1只，并开胸取肺脏1叶。分别加入适量预冷蒸馏水，蒸馏水与组织的比例一般为41（ VW）。分别用组织匀浆器匀浆。匀浆液置低温高速离心机中，2000g，40min。以吸管吸取上清液存入小试管中备用。 5.1.4 尿液 左手抓取小鼠，右手为毛

9、细管吸取尿液备用，如排尿过多也可以小试管直接收集备用。 上述电泳样品均宜新鲜制备使用，可置4冰箱内保存一天。超过一天者需放入20以下的冰箱内保存，时间不宜超过1个月。 5.2 电泳步骤 5.2.1 浸膜 将醋酸纤维膜（板）轻轻浸入相应的电泳缓冲液中，浸入时应避免膜（板）上出现气泡。 5.2.2 点样 将浸透的膜（板），取出以滤纸吸干，纤维膜面朝上，平置在点样板上，以点样器取预置在样品槽内的编号样品，在模（板）上点样。一次点样量为0.3 L，为增加膜（板）上的样品量，可重复点样，最适点样量不宜超过0.9 L（三次）。 5.2.3 电泳 以铅笔在膜（板）上标明原点，泳动方向，迅速将膜（板）搭在事先

10、放入缓冲液的电泳槽纸桥上，盖上电泳槽，接通电源，电泳条件见第6、7二节。 5.3 染色 5.3.1 蛋白染色法 电泳结束后取出膜（板）置入0.2丽春红染液中，1015min后以竹镊子取出换以7醋酸脱色直至电泳区带清晰可见。 页码，4/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm5.3.2 酶显色板法 适用于醋酸纤维素膜 5.3.2.1 将酶显色液（见附录B）新鲜混和。加入2热琼脂34mL，迅速混匀，均匀倒置在68cm的玻璃板上，制成酶显色板。 5.3.2.2 电泳结束后取出膜将点样面贴在酶显色板上。注

11、意将膜与酶显色板间的气泡排尽，但不可移动膜的位置。 5.3.2.3 将带膜显色板移至37温箱保温，直至酶区带清晰显现。 5.3.2.4 取下已显色的膜浸入7醋酸中终止反应。 5.3.3 琼脂覆盖法 适用于醋酸纤维素板 5.3.3.1 电泳结束后取出醋酸纤维素板。 5.3.3.2 新鲜混和酶显色液（见附录B），迅速与23mL 2热琼脂混匀，均匀倒放在水平放置的醋酸纤维素板上。 5.3.3.3 待琼脂冷却固定后，将醋酸纤维素板移入37温箱，直至酶区带清晰显现。 5.3.3.4 将醋酸纤维素板放入7醋酸中终止反应。 6 小鼠生化标记检测细则 6.1 Car-2-Chr.3（Carbonic anhy

12、drase-2）碳酸酐酶-2检测方法： 6.1.1 样品：溶血素，0.3 L。 6.1.2 缓冲液：NaC2H3O2-EDTA，pH5.4 见附录A1。6.1.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.1.4 电泳条件： V200V， T40移动方向由正极至负极。 6.1.5 染色方法：蛋白染色法。 6.1.6 染色液：见附录B6。 6.1.7 带型：Car-2 a C57BL6 慢带； Car-2 b DBA2 快带。 6.1.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.1.9 Car-2电泳结果模式图，见图1。 页码，5/28C:Huaguang110883c2006-3-30

13、file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 1 Car-2电泳结果模式图 6.2 Gpd-1 Chr.4（Glucose-6-phosphate dehydrogenase-1） 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶-1检测方法： 6.2.1 样品：新鲜肝或肾匀浆，0.9 L。 6.2.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.9 见附录A7。 6.2.3 电泳支持物：醋纤板（膜） 6.2.4 电泳条件： V200V， T60移动方向由负极至正极。 6.2.5 染色方法：琼脂覆盖法。 6.2.6 染色液：见附录B7。 6.2.7 带型：Gpd-1 a C57B

14、L6N 慢带； Gpd-1 b BALBcN 快带。 6.2.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.2.9 Gpd-1电泳结果模式图，见图2。 页码，6/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 2 Gpd-1电泳结果模式图 6.3 Gpi-1 Chr.7（Glucosephosphate isomerase-1）葡萄糖磷酸异构酶-1检测方法： 6.3.1 样品：溶血素，0.3 L。 6.3.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.5 见附录A6。 6.3.3 电

15、泳支持物：醋纤膜（板）。 6.3.4 电泳条件： V200V， T30，移动方向由正极至负极。 6.3.5 染色方法：酶显色板法。 6.3.6 染色液：见附录B3。 6.3.7 带型：Gpi-1 a BALBcN 慢带； Gpi-1 b C57BL6N 快带。 6.3.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.3.9 Gpi-1电泳结果模式图，见图3。 页码，7/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 3 Gpi-1电泳结果模式图 6.4 Ce-2 Chr.7（Kidne

16、y catelase）肾过氧化氢酶-2检测方法： 6.4.1 样品：肾匀浆0.3 L。 6.4.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.5 见附录A6。 6.4.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.4.4 电泳条件： V200V， T25，移动方向由负极至正极。 6.4.5 染色方法：酶显色板法。 6.4.6 染色液：见附录B8。 6.4.7 带型：Ce-2 a BALBc 窄带； Ce-2 b CBAN 多余带。 6.4.8 判断方法：上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.4.9 Ce-2电泳结果模式图，见图4。 页码，8/28C:Huaguang110883c2006-3-30

17、file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 4 Ce-2 电泳结果模式图 6.5 Es-1 Chr.8（Esterase-1）酯酶-1检测方法： 6.5.1 样品：血清0.3 L。 6.5.2 缓冲液：Phosphate Buffer pH7.0。见附录A2。 6.5.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.5.4 电泳条件： V140V， T30，移动方向由负极至正极。 6.5.5 染色方法：酶显色板法。 6.5.6 染色液：见附录B1。 6.5.7 带型：Es-1 a C57BL6N 快带； Es-1 b CBAN 慢带。 6.5.8 判断方法：参照

18、上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.5.9 Es-1电泳结果模式图，见图5。 页码，9/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 5 Es-1电泳结果模式图 6.6 Es-3 Chr.11和Es-10 Chr.14（Esterase-3 Esterase-10） 酯酶-3和酯酶-10检测方法： 6.6.1 样品：肾、肝匀浆。 6.6.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.9 见附录A7。 6.6.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.6.4 电泳条件： V280V， T28，移动

19、方向由负极至正极。 6.6.5 染色方法：酶显色板法。 6.6.6 染色液：见附录B2。 6.6.7 带型：Es-3 a BALBcN 浅带； Es-3 c DBA2N 慢带； Es-3 b RFJ 快带； Es-10 b DBA2N 快带； Es-10 a BALBcN 慢带； Es-10 c BUBBuJ 最慢带。 6.6.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 页码，10/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm6.6.9 Es-3和Es-10电泳结果模式图，见图6。 图

20、6 Es-3 和Es-10电泳结果模式图 6.7 Mod-1 Chr.9和Idh-1 Chr.1（Malic enzyme-1，Isocitrale dehydorge nase-1） 苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测方法： 6.7.1 样品：肝、肾匀浆以蒸馏水14稀释，0.3 L。 6.7.2 缓冲液：Tris-Glycine pH7.6 见附录A3。 6.7.3 电泳条件： V200V， T35，移动方向由负极至正极。 6.7.4 染色方法：酶显色板法。 6.7.5 染色液：见附录B4。 6.7.6 带型：Mod-1 a DBA2N 快带； Mod-1 b C57BL6N 慢带； Id

21、h-1 a C57BL6N 慢带； Idh-1 b DBA2N 快带。 6.7.7 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.7.8 Mod-1和Idh-1电泳结果模式图，见图7。 页码，11/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 7 Mod-1和Iph-1电泳结果模式图 6.8 Pgm-1 Chr.5（Phosphoglucomulase-1）磷酸葡萄糖转位酶-1检测方法： 6.8.1 样品：肝或肾匀浆0.6 L。 6.8.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.5

22、 见附录A6。 6.8.3 电泳支持物：醋纤膜。 6.8.4 电泳条件： V200V， T45，移动方向由负极至正极。 6.8.5 染色方法：酶显色板法。 6.8.6 染色液：见附录B5。 6.8.7 带型：Pgm-1 a C57BL6N 快带； Pgm-1 b DBA2N 慢带。 6.8.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.8.9 Pgm-1电泳结果模式图，见图8。 页码，12/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 8 Pgm-1电泳结果模式图 6.9 Hbb

23、Chr.7（Hemoglobin -chain）血红蛋白 链检测方法： 6.9.1 样品：溶血液内加入14体积的烷化剂见附录B9，0.3 L。 6.9.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.5 见附录A6。 6.9.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.9.4 电泳条件： V200V， T30，移动方向由负极至正极。 6.9.5 染色方法：蛋白染色法。 6.9.6 染色液：见附录B6。 6.9.7 带型：Hbb d BALBcN 慢带； Hbb s C57BL6N 快带。 6.9.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.9.9 Hbb电泳结果模式图，见图9。 页码，

24、13/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 9 Hbb 电泳结果模式图 6.10 Trf Chr.9（Transferrin）运铁蛋白检测方法： 6.10.1 样品：血清0.3 L。 6.10.2 缓冲液：Tris-Glycine pH8.5 见附录A6。 6.10.3 电泳支持物：醋纤膜。 6.10.4 电泳条件： V200V， T25，移动方向由负极至正极。 6.10.5 染色方法：蛋白染色法。 6.10.6 染色液：见附录B6。 6.10.7 带型：Trf a CBAJ 快带； Tr

25、f b BALBCJ 慢带。 6.10.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.10.9 Trf电泳结果模式图，见图10。 页码，14/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 10 Trf 电泳结果模式图 6.11 Mup-1 Chr.4（Major urinary protein）主要尿蛋白-1： 6.11.1 样品：尿液，0.6 L。 6.11.2 缓冲液：Tris-巴比妥缓冲液pH8.8 见附录A8。 6.11.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 6.11.4 电泳条

26、件： V160V， T30，移动方向由负极至正极。 6.11.5 染色方法：蛋白染色法。 6.11.6 染色液：见附录B6。 6.11.7 带型：Mup-1 a DBA2； Mup-1 b C57BL6N。 6.11.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较。 6.11.9 Mup-1电泳结果模式图，见图书11。 页码，15/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 11 Mup-1电泳结果模式图 7 大鼠生化标记检测细则 7.1 Es-3（Esterase-3）酯酶-3检测方法

27、： 7.1.1 样品：小肠组织匀浆0.3 L。 7.1.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4 见附录A5。 7.1.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 7.1.4 电泳条件： V200V， T35，移动方向由负极至正极。 7.1.5 染色方法：酶显色板法。 7.1.6 染色液：见附录B1。 7.1.7 带型：Es-3 a F344N 快带； Es-3 b SHROLa 最慢带； Es-3 d WKYOLa 慢带。 7.1.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.1.9 Es-3电泳结果模式图，见图12。 页码，16/28C:Huaguang110883c2

28、006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 12 Es-3电泳结果模式图 7.2 Es-4（Esterase-4）酯酶-4检测方法： 7.2.1 样品：肾匀浆0.3 L。 7.2.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4 见附录A5。 7.2.3 电泳支持物：醋纤板。 7.2.4 电泳条件： V400V， T35，移动方向由负极至正极。 7.2.5 染色方法：琼脂覆盖法。 7.2.6 染色液：见附录B1。 7.2.7 带型：Es-4 a SHROLa 三条快带； Es-4 b WKYOLa 三条慢带。 7.2.8 判断

29、方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.2.9 Es-4电泳结果模式图，见图13。 页码，17/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 13 Es-4电泳结果模式图 7.3 Es-6（Esterase-6）酯酶-6检测方法： 7.3.1 样品：睾丸匀浆0.6 L。 7.3.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4，见附录A5。 7.3.3 电泳支持物：醋纤板。 7.3.4 电泳条件： V400V， T35，移动方向由负极至正极。 7.3.5 染色方法：酶显色板法

30、。 7.3.6 染色液：见附录B1。 7.3.7 带型：Es-6 a F344N 快带； Es-6 b LOUCN 慢带。 7.3.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.3.9 Es-6电泳结果模式图，见图14。 页码，18/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 14 Es-6电泳结果模式图 7.4 Es-8（Esterase-8）酯酶-8检测方法： 7.4.1 样品：睾丸匀浆0.6 L。 7.4.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4 见附录A5

31、。 7.4.3 电泳支持物：醋纤板。 7.4.4 电泳条件： V400V， T35，移动方向由负极至正极。 7.4.5 染色方法：琼脂覆盖法。 7.4.6 染色液：见附录B1。 7.4.7 带型：Es-8 a WKYOLa 快带； Es-8 b F344N 慢带。 7.4.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.4.9 Es-8电泳结果模式图，见图15。 页码，19/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 15 Es-8电泳结果模式图 7.5 Es-9（Esterase

32、-9）酯酶-9检测方法： 7.5.1 样品：睾丸匀浆0.6 L。 7.5.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4 见附录A5。 7.5.3 电泳支持物：醋纤板。 7.5.4 电泳条件： V400V， T35，移动方向由负极至正极。 7.5.5 染色方法：琼脂覆盖法。 7.5.6 染色液：见附录B1。 7.5.7 带型：Es-9 a F344N 慢带； Es-9 c WKYOLa 快带。 7.5.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.5.9 Es-9电泳结果模式图，见图16。 页码，20/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:

33、/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 16 Es-9电泳结果模式图 7.6 Es-10（Esterase-10）酯酶-10检测方法： 7.6.1 样品：肺匀浆0.6 L。 7.6.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH8.4 见附录A5。 7.6.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 7.6.4 电泳条件： V200V， T35，移动方向由负极至正极。 7.6.5 染色方法：酶显色板法。 7.6.6 染色液：见附录B1。 7.6.7 带型：Es-10 a F344N 三条慢带； Es-10 b WKYOLa 三条快带。 7.6.8 判断方法：参照上

34、述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.6.9 Es-10电泳结果模式图，见图17。 页码，21/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 17 Es-10电泳结果模式图 7.7 Akp-1（Alkaline Phosphatase-1）碱性磷酸酶-1检测方法： 7.7.1 样品：肾匀浆0.3 L。 7.7.2 缓冲液：Tris-EDTA-Borate-MgCl2pH7.6 见附录A9。7.7.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 7.7.4 电泳条件： V200V， T60，移动方向由负极至正极

35、。 7.7.5 染色方法：酶显色板法。 7.7.6 染色液：见附录B10。 7.7.7 带型：AKP-1 a F344N 两条带； AKP-1 b ACI 缺失一条带。 7.7.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.7.9 Akp-1电泳结果模式图，见图18。 页码，22/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 18 Akp-1电泳结果模式图 7.8 Cat（Catalase）过氧化氢酶检测方法： 7.8.1 样品：溶血素0.6 L。 7.8.2 缓冲液：Tris-E

36、DTA-Borate pH8.4 见附录A5。 7.8.3 电泳支持物：醋纤膜（板）。 7.8.4 电泳条件： V250V， T40，移动方向由负极至正极。 7.8.5 染色方法：酶显色板法。 7.8.6 染色液：见附录B8。 7.8.7 带型：Cat a F344N 快带； Cat b WKYOLa 慢带。 7.8.8 判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。 7.8.9 Cat电泳结果模式图，见图19。 页码，23/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm 图 19 Cat 电泳结

37、果模式图 8 近交系小鼠大鼠常规遗传监测判断标准 近交系动物具有纯合性，同基因性和个体性，因此送检动物每个生化标记的表型都应为纯合型；每个品系内个体间生化标记表型都应一致；经检测获得的生化遗传概貌应与原品系的生化遗传概貌相符。 依据近交系小鼠大鼠生化检测标记细则完成检测并符合上述标准的近交系可视为经常规遗传监测未发现遗传变异的合格品系。 如果某些品系检测结果与上述标准不相符应依据以下原则作出分析和处理。 不相符的类型 可能发生变异的原因 处理意见 再次送检时，动物应根据监测机构的要求选送。再次检测时如未发现带杂合型位点的动物，该品系可被视为合格的近交系品系，但应注明突变基因的名称，必要时参照实

38、验动物遗传标准对品系的名称加以修定。如再次检测时仍发现带有杂合型位点动物，该品系应予以淘汰，重新引种。 附 录 A 页码，24/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm缓冲液配方 （补充件） A1 NaC2H3O2-EDTApH5.4（用时14稀释）NaC2H3O217.01gEDTA 2.48g蒸馏水 加至1000mLA2 phosphate Buffer pH7.00.5M Na2HPO461mL0.5M KH2PO439mL蒸馏水 加至1000mLA3 TrisGitrate pH7.6（用

39、时15稀释）Tris 12.10g10 Gitrate Acid 适量 调至pH7.6蒸馏水 加至1000mLA4 TrisHCl pH8.0Tris 24.20g10 Gitrate Acid 适量 调至pH8.0蒸馏水 加至1000mLA5 TrisEDTABorate pH8.4Tris 10.90gEDTA 0.60gBoric Acid 3.10g蒸馏水 加至1000mLA6 TrisGlycine pH8.5Tris 3.00gGlycine 14.40g蒸馏水 加至1000mLA7 TrisGlycine pH8.9Tris 5.16gGlycine 3.84g蒸馏水 加至100

40、0mLA8 Tris巴比妥缓冲液 pH8.8Tris 5.75g巴比妥 2.45g巴比妥钠 9.81g蒸馏水 加至1000mLA9 TEBMgCl2pH7.6Tris 1.81gNa2EDTA1.86gBoric Acid 0.33g页码，25/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm附 录 B 显色液配方 （补充件） MgCl22.03g蒸馏水 加至1000mL B1 2 -醋酸萘酚0.6 Fast blue R Salt过滤2%琼脂（热）B2 0.05M磷酸缓冲液（pH7.0）Umbellif

41、eryl Acetate 丙酮溶液（饱和）适量（2滴）至出现白色沉淀2琼脂（热）紫外灯下观察B3 0.2M TrisHCl（pH8.0）0.25M Mg（C2H3O2）210果糖-6-磷酸1 MTT1 TPN葡萄糖-6-磷酸脱氢酶0.25PMS2琼脂（热）B4 0.2M TrisHCl（pH8.0）1 MTT1 TPN0.1M MnCl20.5M苹果酸（pH8.0）10异柠檬酸0.25PMS2琼脂（热）B5 0.2M TrisHCl（pH8.0）0.25M Mg（C2H3O2）21葡萄糖-1，6-二磷酸1葡萄糖-1-磷酸1 MTT1 TPN葡萄糖-6-磷酸脱氢酶0.25PMS2琼脂（热）页码，

42、26/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm附 录 C 小鼠常用品系生化遗传概貌 （补充件） B6 丽春红-S三氯乙酸磺基水杨酸蒸馏水B7 0.2M Tris-HCl pH8.00.25M Mg（C2H3O2）20.5M 葡萄糖-6-磷酸1 MTT0.25 PMS1 TPN2琼脂（热）B8 1三氯化铁1铁氰化钾2琼脂（热）电泳后将膜浸入3的双氧水中30 s，再用蒸馏水漂洗2遍后贴在B.6酶显色板上。B9 烷化剂光胺二硫苏糖醇氢氧化铵蒸馏水B10 0.2M Tris-HCl（pH8.0）-Naph

43、thgl Acid phosphate坚固蓝R盐0.2M MnCl22琼脂（热）Loci Strain Car-2Es-1 Es-3 Gpd-1 Gpi-1 Hbb Idh-1 Trf Ce-2 Es-10 Mod-1 Mup-1 Pgm-1A AKR/J C3H/He C57BL/6 CBA/J CBA/OLa b a b a b a b b b a b b c c c a c c b b b a b b a a b b b b d d d s d d a b a a b b b b b b a a a b b a b b a b b a b b a b a b b b a a a b a

44、a a a b a a b 页码，27/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm附 录 D 大鼠常用品系生化遗传概貌 （补充件） BALB/c DBA/1 DBA/2 615 TA1 TA2 b a b a b a b b b b a b a c c c a c b a b b b b a a a a a b d d d s s d a b b a a a b b b b b b a b a b b b a b b a b a a a a b b b a a a b b b a b b b a b Loci Strain Akp-1 Cat Es-3 Es-4 Es-6 Es-8 Es-9 Es-10F344/N a a a b a b a aLOU/c a a a b b b a aSHR a b b a a b a aWKY b b d b a a c bLEW/M a a d b a b c aACI b a a b b b a a页码，28/28C:Huaguang110883c2006-3-30file:/C:InetpubwwwrootdatagbbB14927a0.htm