GB T 17813-1999 复合预混料中烟酸、叶酸的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、GB/T 17813一1999前_._ t士复合预混料中烟酸、叶酸的测定目前尚无国家标准和国际标准，本标准是在查阅国外文献的基础上，经过试验比较选择了用高效液相包谱法测定复合预混料中烟酸、叶酸。该方法与美国公职分析化学家协会(AOAC)方法比较，简便、快速，准确度、精密度效果相当。本标准在技术内容上参照国外方法，确定了标准范围、试剂、测定条件，即反相离子包谱条件和反相缓冲液系统条件。在编写格式上依据GB/T1. 1-1993标准化工作导则第1单元z标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定和GB/T1. 4-1988(标准化工作导则化学分析方法标准编写规定。本标准由全国饲料工业标准化技术

2、委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京负责起草。本标准主要起草人.陈必芳、李兰、梁冬生。:!IS 1 范围中华人民共和国国家标准复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法Determination of nicotinir acid and folic acid in compound premix High-pressure Iiquid chromatography 本标准规定了复合预混料中烟酸、叶酸的测定一高效液相色谱法。GB/T 17813-1999 本标准适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。测量范围为每千克样品中含烟酸的撞在1000 mg以上，含叶酸的

3、撞在500mg以上。2 引用标准F列标准中所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 6682一1992分析实验室用水规格和试验方法3 方法原理试样中的烟酸、叶酸用水甲醇乙酸混合溶液提取，将滤液注入高效液相色谱反相柱上进行分离.用紫外检测器在280nm波长处定量测定。4 试剂和材料除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯.水为蒸馆水.色谱用水为去离子水，符合GB/T6682的规定。4. 1 甲醇:优级纯。4. 2 王乙股。4. 3 冰乙酸。4.4 己炕磺酸纳(PICB6)

4、, c C CH, (CH, ) ,S03Na) = O. 005 moI/L 或PCCH.3 (CH, )c.SO ,Na J =941 mg/Lo 4. 5 标准溶液配制4. 5. 1 烟酸标准贮备液:称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0m臣，宣于250时，棕色容量瓶巾，用移动相溶解.稀释至刻度.于冰箱保存，可放置一周。4. 5. 2 叶酸标准贮备液:称取经过干燥的叶酸标准纯品25.0mg，进于250mL容量瓶中，用碳峻纳溶液(4.8)溶解，j周至pH7.。定容至l度，于冰箱保存。4. 5. 3 烟酸、叶酸标准工作液:准确吸取4.5. 1和4.5. 2各10mL.用移动相稀释至50mL或10

5、0时_.该说fT标准溶液，ft子带盖小瓶贮存，供液相色谱仪分析用.当日使用。国家质量技术监督局1999-08-10批准m02 -01实施:19 G8/T 17813-1999 4. 6 提取液:取500mL去离子水，加10mL冰乙酸(4.3).1.3mL三乙胶(4.2) .用去离子水定容至1 L. Jl:时pH为3.2.过O.45m滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇(4.1)混合。4. 7 磷酸缓冲液s称取4.84g的磷酸氢二饵(K，HPO，).9.82 g磷酸二氢饵(KH，PO，).溶于去离子水中，加20mL乙脯，用去离子水定容至1L.l昆匀用20%氢氧化何调节pH至6.5, 4.8

6、 碳酸纳溶液，c(Na2CO，)0.1mol/L , 5 仪器、设备5. 1 实验室常用仪器设备。5.2 超声波水洛。5.3 超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸饱器)。5. 4 离心机，3000r/min , 5. 5 高效液相色谱仪.带自动迸样器、紫外可调波长检验器。6 试样桔IJ备选取有代表性的样品至少500g.四分法缩减至100g.磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。7 分析步骤7. 1 试验溶液的制备称取试样维生素预混料。.51 g或复合预混料15g.精确至O.OOOlg，置于100mL棕色容量瓶中，加10mL碳酸纳溶液(4.幻，浸湿试样加

7、70mL提取液(4.6)混匀，于越声波水浴上振荡提取 5 min，用提取液定容至刻度，混合均匀，过滤或离心。再经0.45m过滤膜过滤至带盖小瓶中，调整该试验溶液的浓度5g/mL.供高效液相色谱分析用。7.2 测定7.2.1 色i普条件7.2.1.1 反相离子对色i曹条件柱,25 cm、内径4.0mm不锈钢柱。固定相，ODS(C粒度5m。移动相:取500mL去离子水，加10mL冰乙酸.1.3 mL三乙胶，一小瓶20mL己烧磺酸纳(4.4) 用去离子水定容至1L.调节pH为3.2.过0.45m滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇混合，脱气。流速1.0 mL/min。温度，30C。进样量20L

8、o检测器:紫外检测器，使用波长275nm。7.2.1.2 反相色谱柱长:25 cm，内径4mm，不锈钢柱。固定相，LichrospherCH-8/11 .粒度5m。移动相，2%乙脯磷酸缓冲液(4.7) 流速，1.4 mL/min , 温度z室温。进样体积，20L。f1测器:紫外检测器，使用波长280nm。GB/T 17813-1999 7.2.2 定量测定拔高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数和灵敏度(UFS)，色谱峰分离度符合要求c用两次以k相应标准工作液对系统进行校正。向色谱柱注入相应的烟酸、叶酸标准工作液(4.5.3V叫)和试验溶液(7.1 V，)得到j色i普峰面积响应值(P川、P;)用外标法定量测定。8结果的计算与表述8. 1 计算公式结果按式(1)计算:pi X V X向XV - P X m X V , ) l ( 式中:凶-一每干克试样中含烟酸或叶酸的量，mg;m 试样质量，g;V 提取液的总体积，时，;p, 标准溶液中烟酸或叶酸浓度，用/mL，川烟酸或叶酸标准溶液进样体积，L，Vi 从试验溶液中分取的进样体积，L，P叫一一与标准溶液进样体积(V，)相应的峰面积响应值3P，-与从试验溶液中分取的进样体积(Vi)相应的峰面积响应值。8.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3位。9 允许羞同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对偏差土10%。