SN T 5176-2021 国境口岸传染病快速检测技术规范.pdf

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1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5176 2021 代替 SN/T 11622002 国境口岸传染病快速检测技术规范 Rapid test codes for infectious disease at frontier port 中华人民共和国海关总署发 布 ICS 11.020 CCS C 62 2021-06-18 发布 2022-01-01 实施 以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 0.75 字数 22 千字 2021 年 7 月第一版 2021 年 7 月第一次印刷 印数 1500 书号：1551

2、75106 定价： 14.00 元 国境口岸传染病快速检测技术规范 行 业 标 准 SN/T 51762021 * * * 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7531 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址 以正式出版文本为准 I SN/T 5176 2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规 定起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国福建国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国四川国际旅行 卫生保健中心、

3、中华人民共和国上海国际旅行卫生保健中心、中华人民共和国北京国际旅行卫生保健 中心。 本文件主要起草人：王宇平、郑晖、郑爱萍、石莹、陆晔、杨美琼、刘翌、高博。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 5176 2021 国境口岸传染病快速检测技术规范 1范围 本文件规定了国境口岸病原生物实验室进行传染病快速检测的技术方法和要求。 本文件适用于国境口岸病原生物实验室对入出境人员进行传染病快速检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单

4、）适 用于本文件。 GB 19489实验室生物安全通用要求 SN/T 1239国境口岸霍乱检验规程 SN/T 2752卫生检疫人员的自我防护规范 WS 233病原微生物实验室生物安全通用准则 WS 259疟疾的诊断 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 国境口岸病原生物实验室pathogen testing laboratory at forntier port 国境口岸设立从事病原生物检测的专设场所，主要开展入出境人员传染病现场快速检验，是卫 生检疫的基层实验室。 3.2 快速检测rapid test 相对于传统方法而言，能缩短检测时间，以及在样品制备、实验准备、操作过程简化和

5、自动化 上简化的方法。 3.3 流感样症状flu -like symptoms 与流行性感冒相类似的临床症状，表现为：发热，体温 37.5 以上，伴畏寒、乏力、头痛、头 晕、全身酸痛等；呼吸道有卡他症状，常有咽痛，少数有鼻塞、流涕等；少数有恶心、呕吐、食欲不 振、腹泻、腹痛等症状。 3.4 免疫层析试验immunochromatographic test 利用微孔膜的毛细管作用，通过液体样品在层析介质中的移动，以免疫胶体金或免疫酶染色， 检测特异性抗原或抗体的免疫学方法。 3.5 实时荧光 PCRreal -time PCR 在 PCR 反应体系中加入荧光基团，基于荧光共振能量转移原理，选择合

6、适的荧光基因和淬灭基 以正式出版文本为准 2 SN/T 5176 2021 团对核酸探针进行标记，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个 PCR 进程，通过扩增曲线对样 品中特定的核酸进行定量或定性分析。 3.6 制动试验immobilization test 取采集的水样便或呕吐物，制成悬滴样本或压滴样本，直接在显微镜下观察，霍乱弧菌常表现 为穿梭状或流星状运动，在悬滴样本中加入 O1 群或 O139 群霍乱弧菌特异性诊断血清后，若原活泼 运动现象停止，细菌凝集成块，为制动试验阳性，可初步推断为疑似 O1 群或 O139 群霍乱弧菌。 4实验室设备 4.1二级生物安全柜。 4.2高速冷冻离心

7、机。 4.3全自动核酸提取仪。 4.4荧光定量 PCR 仪 / 便携式荧光定量 PCR 仪。 4.5生物显微镜 / 倒置生物显微镜。 4.6高压灭菌器。 4.7冰箱。 4.8-80 超低温冰箱。 5试剂 5.1免疫层析试剂。 5.2手工 / 仪器核酸提取试剂。 5.3荧光 PCR 检测试剂： 商品化病原体核酸检测试剂盒； 免核酸提取病原体核酸检测试剂盒； 荧光 PCR 试剂盒，病原体核酸检测引物、探针。 5.4霍乱弧菌诊断血清：O1 群霍乱弧菌多价诊断血清、O139 群霍乱弧菌诊断血清。 5.5瑞氏染色液。 6检测范围 国境口岸病原生物实验室对入出境人员开展传染病快速检测项目应根据疫情通报、航

8、运部门关 于入出境人员传染病报告、现场流行病学调查等进行选择，或参见附录 A 确定。 7生物安全 7.1个人防护 国境口岸现场采样人员、实验室检验人员应根据传染病风险等级评估选择个人防护装备。防护方 法和装备见 SN/T 2752。 7.2实验室生物安全 实验室生物安全应符合 GB 19489 和 WS 233 中的规定。 以正式出版文本为准 3 SN/T 5176 2021 7.3实验室废弃物 实验室废弃物按照 GB 19489 确定的要求进行无害化处理。 8检测对象 8.1国境口岸入出境人员中疑似传染病患者 下列情况可判定为疑似传染病患者： 体温（腋温） 37.5 或有流感样症状者； 有呕

9、吐、腹泻或腹泻症状者； 医学巡查中发现的其他疑似传染病症状者； 主动申报疑似传染病人员。 8.2其他人员 自愿在国境口岸现场进行传染病快速检测的入出境人员。 9样品采集 9.1确定采集样品种类 按照国境口岸卫生检疫要求，对检测对象进行流行病学调查，确定需要进行现场快速检测的传 染病种类及采集样品种类。 9.2样品采集 9.2.1鼻咽拭子、唾液：采集后立即置于 3 mL5 mL 样品保存液。 9.2.2 全血：采集静脉血 1 mL3 mL，颠倒试管，使其与抗凝剂混匀（需进行核酸检测的全血应使用 非肝素抗凝剂）。 9.2.3 血清：采集静脉血 3 mL5 mL，室温静置 30 min 使其凝固，然

10、后 1 500 r/min2 000 r/min 离心 10 min，收集血清于 2 mL 无菌冻存管。 9.2.4 粪便、肛拭子：选取有脓血、粘液部分的成形便 3 g5 g 或水样便 1 mL3 mL 置于无菌容器； 无法获得粪便时，可用湿润的棉拭插入肛门 3 cm5 cm（小儿 2 cm3 cm）处轻轻旋转，确保退出棉 拭上有可见粪便，将棉拭放入无菌容器或插入 Cary -Blair 运送培养基底部。 9.2.5 呕吐物：采集自然呕吐的呕吐物于无菌容器中，水样呕吐物采集 1 mL3 mL，非水样呕吐物采 集 3 g5 g。 9.2.6尿液：采集尿液标本 10 mL，置于无菌 50 mL 塑

11、料尖底离心管中，2 000 r/min 离心 5 min 去沉淀， 将上清分装入 15 mL 无菌离心管中，每份 5 mL。 9.3采样知情同意 有创性采样前需告知被采样人员填写采样知情同意书（见附录 B）。 10实验室检验 10.1免疫层析检验 10.1.1检验方法 10.1.1.1从冰箱中取出免疫层析检测卡，平衡至室温。 以正式出版文本为准 4 SN/T 5176 2021 10.1.1.2样品处理、检测步骤按产品说明书进行操作。 10.1.2结果判断与质量控制 10.1.2.1 在有效的实验条件下，质控区应出现明显沉淀线，否则表示检测卡失效或实验失败，应再取 一个检测卡重新实验。 10.

12、1.2.2检测区出现明显沉淀线，表明所测抗原 / 抗体阳性，结果报告按产品说明书要求进行。 10.1.2.3免疫层析检测试剂应尽量选择在国家食品药品监督管理局通过注册审批的产品。 10.2实时荧光 PCR 检验 10.2.1核酸提取 采用商品化手工核酸提取试剂盒或全自动核酸提取仪提取样品核酸（DNA/RNA）。 注： 采用核酸提取和荧光检测一体化的全自动检测工作站或者使用免提核酸荧光 PCR 检测试剂，可不需要提取 核酸直接加样。 10.2.2检验方法 10.2.2.1 按商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准规定进行荧光 PCR 反应试剂配制和加样，试 剂配制和加样应在冰上进行。使用依

13、据相关检测标准自行合成引物、探针进行荧光 PCR 检测时，应注 意严格按照标准要求设置阴性对照和阳性对照。 10.2.2.2 按照商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准进行荧光定量 PCR 仪扩增循环参数、反应 体积的设置和荧光通道、荧光检测点的选择。 10.2.3结果判断与质量控制 10.2.3.1 基线和阈值的设定：基线调整选择 6 个15 个循环的荧光信号，阈值设定的原则以阈值线刚 好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点。 10.2.3.2 在有效的实验条件下，阳性对照应有明显的“S”形扩增曲线，Ct 值符合商品化核酸检测试 剂盒说明书 / 相关检测标准限定范围；阴性对照无明显扩增曲线

14、。 10.2.3.3 结果判断按照商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准要求，阳性结果表明所测病原体 核酸阳性（荧光 PCR 法）。 10.2.3.4 按照商品化核酸检测试剂盒说明书 / 相关检测标准规定，Ct 值较高需重复检测的样品，应重 复检测后再进行判断。 10.2.3.5商品化核酸检测试剂盒应尽量选择在国家食品药品监督管理局通过注册审批的产品。 10.3制动试验 10.3.1检验方法 10.3.1.1取粪便标本悬滴法制片，在高倍镜下观察细菌动力。 10.3.1.2 动力试验阳性者，分别加入 O1 群霍乱弧菌多价诊断血清、O139 群霍乱弧菌诊断血清，高倍 镜下观察。 10.3.2

15、结果判断 10.3.2.1悬滴法观察，有穿梭状或流星状运动的短小弧形杆菌，为动力试验阳性。 10.3.2.2 动力试验阳性者加入 O1 群霍乱弧菌多价诊断血清，若运动停止，或凝集成块，为制动试验 阳性，表示标本中含有 O1 群霍乱弧菌；如细菌仍活动，则加 O139 群霍乱弧菌诊断血清做制动试验， 运动停止，或凝集成块，为制动试验阳性，表示标本中含有 O139 群霍乱弧菌。 以正式出版文本为准 5 SN/T 5176 2021 10.3.2.3制动试验阳性为疑似霍乱弧菌感染，应按照 SN/T 1239 确定的要求进行处置。 10.4血涂片疟原虫镜检 10.4.1检验方法 10.4.1.1 厚血膜

16、制作：取4 L5 L血液滴于载玻片中央偏左，用推片由里向外划圈涂成0.8 cm1 cm 的圆形厚血膜。 10.4.1.2 薄血膜制作：取 1 L1.5 L 血液于同一载玻片中央，用推片下缘平抵载玻片接触血液，待 血液在载玻片与推片间向两侧扩展至约 2 cm 宽时，使两张玻片保持 2535角，从右向左迅速向前推 成舌状薄血膜。 10.4.1.3 溶血：用蜡笔在厚、薄血膜之间划一界线，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。待溶血后倾去 水滴。 10.4.1.4染色：在薄血膜上滴加瑞氏染色液 5 滴8 滴，染色 1 min2 min，再滴加 5 滴8 滴蒸馏水 在薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水充分混匀后，引到

17、厚血膜上，使厚血膜再染色 10 min，用清水轻轻 冲去染液，晾干。 10.4.1.5 镜检：在染色后的血膜上滴加香柏油，油镜镜检，以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种 鉴别。 10.4.2结果判断 10.4.2.1 厚血膜在油镜下，最少检查 100 个视野或整个厚血膜未见疟原虫方可判为阴性，报告“未检 出疟原虫”。 10.4.2.2 血膜中查到疟原虫判断为阳性，报告“检出疟原虫”，并根据疟原虫的形态确定恶性疟、间 日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。疟原虫的形态鉴定按照 WS 259 执行。 11结果报告 11.1按口岸卫生检疫工作要求上报快速检测试验结果，并注意法定传染病报告时限。 11.2快

18、速检测试验结果为阳性，应注意后续确证实验结果跟踪。 12样品后处理 12.1快速检测实验结果为阳性，应及时将样品转运至上级实验室进行确证实验。 12.2快速检测实验结果为阴性，应保存好样品备查；对结果存疑者应联系上级实验室进行复检。 12.3 对口岸现场发现疑似病例无能力进行传染病快速检测项目的，应尽快将采集的样品转运至上级 实验室进行检测。 12.4样品转运时的包装和运输应符合国家相关规定。 12.5 检验时样品应留下至少足够一次检测的量作为复样，未送至上级实验室的样品在口岸病原生物 实验室中应 -80 冷冻保存至少 3 个月。 12.6保存的样品应做好标记，具有完整的可追溯信息。 以正式出

19、版文本为准 6 SN/T 5176 2021 附录A （资料性） 口岸重点关注传染病 根据原国家质量监督检验检疫总局发布的国境口岸传染病疫情信息报告及发布管理规定（国 质检卫2013531 号），结合人间传染的病原微生物名录国际卫生条例（2005）口岸核心能 力动态监督管理规定进行风险评估，确定口岸病原生物实验室重点关注传染病，见表 A.1。 表 A.1口岸重点关注传染病 序号 传染病 病原体 1 鼠疫 鼠疫耶尔森菌 2 霍乱 霍乱弧菌 3 黄热病 黄热病病毒 4 天花 天花病毒 5 野毒株引起的脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒 6 流感新亚型病毒引起的人流感 流感病毒 7 传染性非典型肺炎 SAR

20、S 病毒 8 肺炭疽 炭疽杆菌 9 人感染高致病性禽流感 禽流感病毒 H5N1、H7N9 10 中东呼吸综合征 中东呼吸综合征冠状病毒 11 埃博拉出血热 埃博拉病毒 12 拉沙热 拉沙热病毒 13 马尔堡热 马尔堡热病毒 14 西尼罗热 西尼罗病毒 15 登革热 登革病毒 16 裂谷热 裂谷热病毒 17 流行性脑脊髓膜炎 脑膜炎球菌 18 艾滋病 人类免疫缺陷病毒 19 麻风病 麻风杆菌 20 传染性肺结核 结核杆菌 21 疟疾 疟原虫 22 O157 大肠出血性杆菌病 肠出血性大肠杆菌 O157:H7 23 回归热 回归热螺旋体 24 流行性斑疹伤寒 普氏立克次体 以正式出版文本为准 SN

21、/T 5176 2021 序号 传染病 病原体 25 基孔肯雅热 基孔肯雅病毒 26 克里米亚 -刚果出血热 克里米亚 -刚果出血热病毒 27 尼帕病毒病 尼帕病毒 28 寨卡病毒病 寨卡病毒 29 麻疹 麻疹病毒 30 风疹 风疹病毒 31 水痘 水痘 -带状疱疹病毒 32 手足口病 柯萨奇病毒 A16 型、肠道病毒 71 型 33 白喉 白喉棒状杆菌 34 诺如病毒感染性腹泻 诺如病毒 35 副溶血性弧菌感染性腹泻 副溶血性弧菌 36 轮状病毒感染性腹泻 轮状病毒 37 细菌性痢疾 志贺菌 38 伤寒、副伤寒 伤寒沙门菌、甲 / 乙 / 丙型副伤寒沙门菌 39 甲型肝炎 甲型肝炎病毒 40

22、 戊型肝炎 戊型肝炎病毒 41 新发传染病 表 A.1 （续） 以正式出版文本为准 SN/T 5176 2021 附录B （资料性） 采样知情同意书 旅客您好： 由于您 / 您的被监护人 / 您的同伴出现了以下一种或多种症状：发热、咳嗽、呕吐、腹泻、肌肉 痛等，检疫人员怀疑您 / 您的被监护人可能感染了传染病。为了保护您 / 您的被监护人及他人的身体 健康，检疫人员需要从您 / 您的被监护人身上采集血液等样本进行实验室检测，以排查传染病。 如果您阅读、理解了以上内容，并愿意配合采样工作，请在下方签名以表示同意。 谢谢您的合作！ 姓名： 日期： Informed consent for samp

23、ling Dear passenger: Because you/ your ward/ your accompanier have one or more symptoms as follows: fever, cough, vomit, diarrhea, myalgia and so on, quarantine officials doubt that you/ your ward may be infected with some kind of infectious disease. In order to protect your/ your wardnulls and othe

24、r personnulls health, quarantine officials need to take blood or other samples for the related lab tests. If you understand the above contents and would like to cooperate with quarantine officials in sampling, please sign below. Thank you for your cooperation! Name: Date: 书号：155175106 定价： 14.00 元 SN/T 5176 2021