GA T 1615-2019 法庭科学 生物检材中氯氮平检验 气相色谱和气相色谱-质谱法.pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中氯氮平 检验 气相色谱 和 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for clozapine in biological samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本 标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技

2、术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、山西医科大学。 本标准起草人：张蕾萍、 王爱华 、 任昕昕 、 董林沛 、 宋歌 、 王芳琳、于忠山、何毅、贠克明、王玉 瑾 、栾玉静 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材 中氯氮平 检验 气 相色谱 和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物 检材 （血、尿、肝、肾 、 胃及胃内容 等） 中氯氮平的气相色谱（ GC） 定量 检验 方法 和 气相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物 检材 中 氯氮平 的定性 分析和 定量分析 。 其他可疑

3、 样品 中 氯氮平 的定性分 析和定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水 规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、净化及浓缩后， 采 用 气 相色谱 -质谱 法 定性 定量， 气相色谱 法定量 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和 相对 丰度

4、比 作为定性 判断依据； 以 峰面积 为 依据 ， 采 用外标法进行定量分析。 5 试剂及材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水 。 除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 乙醇 ； b) 甲醇 ； c) 二氯甲烷； d) 乙酸乙酯； e) 磷酸二氢钠； f) 磷酸氢二钠； g) 硼砂； h) 氢氧化钠； i) 1%氢氧化钠溶液：称取 1.0g 氢氧化钠用水溶解并 稀释 至 100mL； GA/T 2 j) 磷酸盐缓冲液 (pH 值 6)： 称 取磷酸氢二钠（ Na2HPO412H2O） 8.812g，磷酸二氢钠 （ NaH2PO42H2O

5、） 27.37g， 加 水 溶解 并 稀释 至 1000mL； k) 硼砂 -氢氧化钠缓冲液 （ pH 值 10） ： 称 取硼砂（ Na2B4O710H2O） 2.38g, 氢氧化钠 0.86g， 加 水溶解并 稀释 至 500mL； l) 标准 溶 液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ： 根据氯氮平标准物质的 纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 氯氮平标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液； 2) 0.1mg/mL 标准 工作 溶 液：移取 1.0mg/mL 的氯氮平标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱

6、中冷藏保存 。 有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的标准 工作 溶 液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) pH 试纸：范围 1 14； d) 固相萃 取柱： Oasis HLB 固相萃取 柱或 其他 等效固相萃取柱 ， 使用前依次用甲醇 、 水活化 。 注： Oasis HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器 和

7、 设备 仪 器 和 设备 包括 ： a) 气相色谱仪 ：配 有 氮磷检测器（ NPD） ； b) 气相色谱 -质谱仪： 配 有 电子轰击源 （ EI） ； c) 移液器； d) 电子天平； e) 超声 清洗 器 ； f) 振荡器； g) 离心机； h) 浓缩 器 。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 5.0g于具盖离心 管中， 加入一定量的硼砂 -氢氧化钠缓冲液或 1%氢氧化钠溶液调 pH值至 9 10，再加入二氯甲烷或乙酸 乙酯 5mL 10mL，振荡 10

8、min， 8000r/min离心 10min， 分离 有机相 ； 重复提取一次，合并两次提取的有 机相 ， 在浓缩器上 50浓缩至干 。 残留物用甲醇 100L溶解 ， 作为检材 样品提取液 供仪器分析。 GA/T 3 7.1.1.2 固相萃取 (适 用 于新鲜的 血液样品 ) 移取血液检材样品 1.0mL 5.0mL于具盖离心管中 ，加入磷酸缓冲液 （ pH值 6） 5mL 10mL， 混匀 ， 超声 15min， 8000r/min离心 20min， 取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中，控制流速为 0.5mL/min 1.0mL/min，依次用 3mL甲醇 /水 溶液（体积比 5:95）

9、 淋洗；用 4mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液 在浓缩器 上 50下浓缩至干 ， 残留物用甲醇 100L溶解， 作为检材样品提取液供仪器分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加氯氮平标 准物质， 作为添加样品（添加样品 的 浓度为 1.0g/mL(g)） ，与检材样 品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （气相色谱 -质谱） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS

10、毛细 色谱 柱 (30m0.25mm0.25m)或等效色谱柱 ； 注 ： DB-5MS 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准 的使用者，并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可 使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100 保持 2min，以 15 /min 速率升温至 280 ，保持 17min； c) 进样口温度： 280 ； d) 传输线温度： 230 ； e) 离子源温度： 200 ； f) 载气：高纯氦气； g) 柱流量： 1mL/min 2mL/min； h) 分流比： 5:1 50:1； i) 质量扫描范围： 40amu

11、450amu； j) 扫描方式：全扫描（ SCAN）。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 5.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份添加 氯氮平 标准物质作为添加样品（添加样品中目标 物含量应为检材样品中目标物含量的 (100 50)% ），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得 到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪

12、器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： GA/T 4 a) 色谱柱： DB-1 毛细色谱柱（ 30m0.32mm0.25m） 或等效色谱柱 ； 注 ： DB-1 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 200 保持 1min，以 10 /min 速率升温至 280 ，保持 10min； c) 进样口温度： 280 ； d) 检测器温度： 300 ； e) 载气：

13、氮气； f) 分流比： 5:1 50:1； g) 柱流量： 1.0mL/min 2.0mL/min。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 按 7.1.2.1规定的条件分析 。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.2.2.1 的分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 2 3 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量 ： 添样添 样添样 VMA VMAW = .（ 1） 式 中： W 检材样品 中目标物的含量，单

14、位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中标准物添加量，单位为微克 （ g） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（ 2）计算相 对相差 ： %10 0X XXRD 21 = .（ 2） 式中： RD 相对相差 ， 用百分比

15、（ %）表示 ； X1、 X2 两个检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两个检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 GA/T 5 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液 一致，特征离子 丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰， 则可判断检材样品中检出目标物。 GC-MS 分析 检出限参见 附录 A 中 A.1， 相关质谱图参见附录 A 中图 A

16、.1图 A.3。氯氮平中毒资料参见附录 B。 表 1 特征 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2 重新提取检验 。 GA/T 6 A A 附 录 A （资料性附

17、录） 氯氮平的相关谱图及数据 A.1 气相色谱图 氯氮平的气相色谱图 见图 A.1。 4 . 0 (x 1 0 , 0 0 0 ) 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 . 0 2 . 0 3 . 0 4 . 0 5 . 0 6 . 0 7 . 0 8 . 0 9 . 0 1 0 . 0 1 1 . 0 1 2 . 0 1 3 . 0 1 4 . 0 1 5 . 0 1 6 . 0 1 7 . 0 1 8 . 0 1 9 . 0 m i n - - 1 . 0 uV 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 - 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 . 0 - 0 . 5

18、 0 . 0 0 . 5 1 . 5 2 . 0 2 . 5 3 . 0 3 . 5 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 1 4 .5 7 1 /7 7 3 0 2 图 A.1 氯氮平的色谱图 （ tR=14.5） A.2 气相色谱 -质谱图 氯氮平的气相色谱 -质谱图 见图 A.2、 图 A.3。 5. 0 7. 5 10 . 0 12 . 5 15 . 0 17 . 5 20 . 0 22 . 5 25 . 0 0. 0 1. 0 2. 0 3. 0

19、4. 0 ( x1 , 00 0) /2 0 .3 9 8 /1 1 8 9 1 /2 0 .3 9 8 /1 1 8 9 1 图 A.2 氯氮平总离子流图 （ tR=20.3） GA/T 7 图 A.3 氯氮 平质谱图 （ m/z 70, 243, 42） A.3 检出限 生物 检材 中氯氮平检出限见表 A.1。 表 A.1 生物 检材 中氯氮平的检出限 样 品 检出限 气相色谱法 气相色谱 -质谱法 血 液 g /mL 0.02 0.05 组 织 g /g 0.1 0.1 GA/T 附 录 B （资料性附录） 氯氮平中毒资料 B.1 中毒症状 最常见的症状包括谵妄、昏迷、心动过速、低血压、

20、呼吸抑制或衰竭、唾液分泌过多等，过量服用 可 致 嗜睡、眩晕、运动失调，超大剂量后可至昏迷。氯氮平的过量中毒，临床主要表现为： a) 警觉 性下降，可致昏迷； b) 心动过速、心律失常、低血压； c) 中枢和周缘抗胆碱能症状，瞳孔缩小； d) 口服一次剂量超过 2g者，死亡率高达 12%，死亡原因为心肺衰竭。 B.2 氯氮平中毒及死亡机理 口服或注入过量的氯氮平可引起中毒或死亡，其毒性主要表现在对神经系统、造血系统、消化系统 和泌尿系统的控制，最后导致中毒者死亡。 B.3 氯氮平中毒死亡尸体解剖情况 氯氮平药物急性中毒死亡的尸体主要表现为全身 散在性紫瘢。尸体解剖所见，胃粘膜充血或出血。 B.4 氯氮平治疗及中毒致死量 药物治疗量：首剂 25mg，治疗剂量 （ 200 400） mg/日，最高达 600mg/日。氯氮平大剂量服用可致 人死亡，人血中治疗浓度为 160g/L 500g/L，血中毒浓度为 3200g/L 4500g/L。 B.5 氯氮平结构 氯氮平的化学名称为 8-氯 -11-(4-甲基 -1-哌嗪基 )-5H-二苯并二氮杂卓，分子量 326，分子式 C18H19ClN4，化学结构见图 B.1。 图 B.1 氯氮平结构 _