GA T 1622-2019 法庭科学 生物检材中沙蚕毒素、杀虫双、杀虫环和杀螟丹检验 气相色谱、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法.pdf
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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中 沙蚕毒素、杀虫双、 杀虫环和杀螟丹 检验 气相色谱、 气相色谱 -质谱 和 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for nereistoxin, bisultap, thiocyclam and cartap in biological samples GC,GC-MS and LC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T1.1 2009给出的
2、规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会( SAC/TC 179/SC 1)提出并归口。 本标准起草单位:杭州市公安局刑事科学技术研究所、浙江省公安厅物证鉴定中心、湖州市公安局 刑事科学技术研究所。 本标准主要起草人:应剑波、唐磊、傅得锋、宣宇、崔艳华 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中 沙蚕毒素、杀虫双、杀虫环和杀螟丹 检验 气相色谱、气相色谱 -质 谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材 (血、尿、肝、肾、胃及胃内容等) 中沙蚕毒素的气相色谱( GC) 定
3、量检验方法和 气相色谱 -质谱 ( GC-MS) 、 气相色谱 -串联质谱 ( GC-MS/MS) 定性定量 检验方法, 以 及法庭科学生物检材 (血、尿、肝、肾、胃及胃内容等) 中 杀虫双、 杀虫环和杀螟丹的液相色谱 -串联 质谱 ( LC-MS/MS) 定性定量 检验方法。 本标准适用于法庭科学生物检材中沙蚕毒素、 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 的定性分析和定量分析。 其 他可疑样品中 沙蚕毒素、 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 的定性分析和定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件,其最新
4、版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照,按平行操作的要求,对生物检材进行 提取、净化及浓缩 。 对于沙蚕毒素检验, 采用气相色谱 -质谱 法 、气相色谱 -串联质谱 法进行定性定量,气相色谱法进行 定量, 以保 留时间、特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据;以峰面积为依据,采用外标法进 行定量分析。 对于 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 ,采用 液相色谱 -串联质谱 法进行定性定量, 以保留时间、 质谱 特征
5、 离子 和相对丰度 比 作为定性判断依据; 以峰面积为依据,采用外标法 进行定量分析 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 、气相色谱 -质谱和气相色谱 -串联 质谱实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水,液相 色谱 -串联 质谱实验用水应符合 GB/T 6682中规定 的一级水。除非另有说明,在分析中使用的试剂均为分 析纯,试剂包括 : a) 环己烷; b) 乙酸乙 酯; c) 甲醇(色谱纯); d) 丙酮; GA/T 2 e) 甲酸; f) 氨水; g) 醋酸钠 ; h) 1mol/L 醋酸溶液 ; i) 0.1mol/L 氢氧化钠溶液: 称取 氢氧化钠 0.4g,用水溶解
6、并定容至 100mL; j) 1.0mol/L 氢氧化钠溶液 : 称取 氢氧化钠 20.0g,用水溶解并定容至 500mL; k) pH 值 6.0 醋酸缓冲液: 称 取醋酸钠 54.6g,加 入 1mol/L 醋酸溶液 20mL 溶解 ,用水稀释并定 容 至 500mL; l) pH 值 10.0 缓冲液: 称取磷酸二氢钠 6.0g,用去离子水 450mL 溶解,混匀,用 1.0mol/L 氢氧 化钠溶液调 pH 值至 10.0,用水定容至 500mL; m) 标准溶液 : 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液:根据沙蚕毒素标准物质的纯度, 各称取适量,分别 用甲醇配制 1.0mg/mL 沙
7、蚕毒素 、 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 标准物质溶液,置于冰箱中冷冻保存。有 效期 12 个月。或采用市售标准溶液; 实验 中所用其它浓度的 单一 标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液 用甲醇稀释得到; 2) 0.1mg/mL 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 混合 标准 工作 溶液 :移取 1.0 mg/mL 的 杀虫双、杀虫 环和杀螟丹标准物质溶液 各 1.0 mL,用甲醇稀释并定容至 10mL,配制成浓度为 0.1mg/mL 的 杀虫双、杀虫环和杀螟 丹混合标准工作溶液 , 置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。实 验中所用其它浓度的混合标准工作溶液均由 0.1mg/mL 杀虫双、杀虫环和
8、杀螟丹 混合 标准 工作 溶液 用甲醇稀释得到。 注: 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括: a) 颗粒状硅藻土 ; b) 中性三氧化二铝 : ( 100 200 )目,使用前在 130下活化 3h,冷却后按 6%比例加水搅拌均匀 , 装入原瓶,平衡 24h后备用 ; c) 硅镁吸附剂 : ( 80 100) 目,使用前在 130下活化 20h,冷却后按 4%比例加水搅拌均匀,装 入原瓶,平衡 24h后备用 ; d) SLE 萃取 柱或其他等效萃取柱; e) 固相萃取柱: 1) C18固相萃取柱或 等效固相萃取柱 , 使用前依次用 3mL甲醇和 3mL去离子水活化
9、; 2) 混合型弱阴离子交换固相萃取柱 ,使用前依次用 3mL甲醇和 3mL去离子水活化 ; f) 有机系 微孔滤膜 : 0.22m。 6 设备和仪器 仪器和设备 包括: a) 气相色谱仪:配 FPD(硫滤光片)检测器; b) 气相色谱 -质谱仪:配有电子轰击源( EI); c) 气相色谱 -串联质谱仪:配有电子轰击源( EI)和三重四级杆质量分析器; d) 液相色谱 -串联质谱仪:配有电喷雾离子源( ESI)和三重四级杆质量分析器; e) 快速溶剂萃取仪; f) 离心机; GA/T 3 g) 移液器; h) 电子天平; i) 浓缩器 ; j) 匀浆仪 。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.
10、1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 (适用于生物检材中沙蚕毒素检验) 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL,或称取铰碎 (或匀浆) 的 肝脏等 固体检材样品 1.0g 2.0g 于 具盖离心管中 , 加入 pH值 10.0缓冲液 0.5mL,混匀后加入乙酸乙酯 3.0mL6.0mL, 振荡 提取 10min, 8000r/min离心 10min,分离有机相;重复提取一次,合并两次提取的有机相,置于浓缩器上 40条件下 浓缩至 干,残留物 用甲醇 200L溶 解,作为检材样品提取液, 供仪器分析。 7.1.1.2 固 相萃取法 1(适用于血液、尿液样品中沙蚕毒素检验) 移取血液
11、 或尿液 检材样品 1.0mL 2.0mL, 于 具盖离心管中 ,加入 pH值 10.0缓冲液 6mL, 8000r/min 离心 10min,取 上清液 转移至已活化好的 C18固相萃取柱中 ,控制上清液过柱流速为 0.5mL/min过柱, 用 去离子水 3mL淋洗, 抽干弃 去淋洗液,挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱 2min, 用氯仿 /异丙醇 (体 积比 9:1)混合溶剂 5mL洗脱,收集洗脱液 并置于浓缩器上 40浓缩 至 干,残留物 用甲醇 200L溶 解,作 为检材样品提取液, 供仪器分析。 7.1.1.3 固相支撑液液 萃 取法 ( 适用于血液、尿液样品中沙蚕毒素检验 ) 移
12、取血液 或尿液 检材样品 1.0mL 2.0mL, 于 具盖离心管中, 加入 pH值 10.0缓冲液 0.5mL,混匀后加 入到 SLE萃取柱中,适当施加正压使样品完全吸附到萃取柱填料中,静置 5min, 加入乙酸乙酯 3mL,在 自然重力作用下通过萃取柱, 收集流出液, 加入 3mL乙酸乙酯进行再次洗脱,合并 两 次 流出液并置于浓 缩器上 40浓缩至 干,残留物 用甲醇 200L溶 解,作为检材样品提取液, 供仪器分析。 7.1.1.4 快速溶剂萃取法 (适用于生物检材中沙蚕毒素检验) 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL,或称取铰碎 (或匀浆) 的 肝脏等 固体检材样品 1.0
13、g 2.0g 于 具盖离心管中, 加入 pH值 10.0缓冲液 0.5mL,然后与适量的硅藻土混匀 , 再倒入底部装有 5g三氧化二 铝或硅镁吸附剂的萃取池中,按照 7.1.2.1.1条件进行操作。萃取完毕后 , 将萃取液倒入试管中 , 8000r/min 离心 10min,取出有机相, 置于浓缩器上 40条件下浓缩至干,残留物用甲醇 200L溶解,作为检材样 品提取液,供仪器分析 。 7.1.1.5 固相萃取法 2(适用于生物检材中杀虫双、杀虫环和杀螟丹检验) 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL,或称 取铰碎 (或匀浆) 的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g 于具盖离心管中
14、,加 入 pH值 6.0缓冲液 1mL, 振荡提取 10min, 8000r/min离心 10min,取上清液经 有机系 微孔滤膜过滤 后 ,转移至活化后的固相萃取柱中(杀虫双使用混合型弱阴离子交换固相萃取柱,杀虫环 和杀螟丹使用 C18固相萃取柱),控制流速为 1.0mL/min, 用 2mL去离子水淋洗, 抽干弃去淋洗液,挤干 水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min,用 洗脱液 2mL进行洗脱(杀虫双 洗脱液为甲醇 /氨水 (体积比 95:5) ); 杀虫环和杀螟丹洗脱 剂 为甲醇 /10%甲酸水 溶液 (体积比 9:1) , 收集 洗脱液经 有机系 微孔滤膜 过滤后 ,作为检材样品提取液
15、, 供 LC/MS-MS分析。 GA/T 4 7.1.1.6 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品(若无 相似基质空白样品可用血液替代)两份于具盖离心管中 ,一份作 为空白样品,一份添加 标准物质作为添加样品 ( GC及 GC-MS添加样品浓度为 0.5g/mL(g), GC-MS/MS 添加样品浓度为 20ng/mL(g), LC-MS/MS添加样品浓度为 20ng/mL(g)) , 与检材样品平行操作,得到空 白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 快速溶剂萃取条件 以下为参考条件,可根据不同品牌仪器和不同样品等实
16、际情况进行调整: a) 载气:高纯氮气; b) 萃取池压力 : 1400psi; c) 加热炉温度: 110; d) 静态萃取时间: 6min; e) 静态萃取次数: 2 次; f) 溶剂冲洗体积: 60%; g) 吹扫时间: 100s; h) 萃取溶剂:乙酸乙酯 /环己烷 (体积比 1: 1) 混合溶剂 。 7.1.2.1.2 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件,可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整: a) 色谱柱: VF-5MS 弹性石英 毛细管柱 ( 30m0.25mm0.25m)或等效色谱柱; 注: VF-5MS 柱 是 Agilent 公司产品的商品名称,给出这一信息是为
17、了方便本标准的使用者,并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。 b) 柱温: 80保持 1min,以 10/min 速率升至 180,再以 40/min 速率升至 280保持 12min; c) 进样口温度: 260; d) 载气:高纯氦气; e) 四极杆温度: 150; f) 传输线温度: 260; g) 流量: 1.0mL/min; h) 进样方式:分流进样,分流比 10:1; i) 进样体积: 1L; j) 质谱扫描范围: 50amu 450amu; k) 特征碎片离子: m/z70, m/z 71, m/z 103, m/z 149(定量离子)
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