DB63 T 730-2008 无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作技术规程.pdf

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1、ICS备 案号 ： 23197-208青 海 省 地 方 标 准 DB63 DB63/T730208无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作 技术规程 208-07-8发布 208-0-8实施青 海 省 质 量 技 术 监 督 局发布发布发布发布 DB63/T730208 I 前 言细 管 冻 精 冷 配 技 术 是 解 决 养 羊 业 中 因 购 买 和 饲 养 种 公 羊 费 用 高 、 优 良 公 羊 利 用 率 低 的 有 效 措 施 之一 ， 可 减少 疾病 传播 和公 羊选 择率 低造 成的 品种 退化 。 高 品质 细管 冻精 的制 作是 推广 细管 冷配 这一 先进 繁 殖技 术 、 更

2、 好的 使用 优良 种公 羊 、 保 证种 公羊 的质 量 ， 最 大限 度地 发挥 种公 羊优 良性 状 ， 全 面快 速提高 养羊 生产 水平 和经 济效 益的 前提 保证 。制 定该 技术 规程 ，使 无角 陶赛 特肉 羊细 管冻 精制 作标 准化 、 规范 化， 可有 效保 证无 角陶 赛特 肉羊 细管 冻精 的精 液品 质， 提高 冷配 受胎 率。 特制 定本 规程 。 本 规程 的附 录 A、 附录 B均 为规 范性 附录 。本 规程 由青 海省 农牧 厅提 出并 归口 。 本 规程 由青 海省 质量 技术 监督 局批 准。 本 规程 起草 单位 ：青 海省 家畜 改良 中心 。

3、本 规程 主要 起草 人 ： 吴 祥 、 胡 宁玺 、 马 元梅 、 赵 小娟 、 常 永梅 、 许 山得 、 赵 莉渲 、 谭 建宁 、 薛 晓蓉 、莫 延新 、刘 宁、 潘顺 利、 董香 菊。 DB63/T730208 1 无角陶赛特肉羊细管冷冻精液制作技术规程1范 围 本 规 程 规 定了 无 角 陶 赛特 肉 羊 细 管 冻 精 制 作 过 程中 冷冻 精液 （以 下简 称 “冻 精 ”） 的规 格与 质量 、 制 作 程序 、 冻 精 质 量 检 查方 法、 冻精 的包 装、 标记 、贮 存 、 运输 。本 规 程 适 用于 无 角 陶 赛特 肉 羊 的冻 精 制 作 和 贮存 。2

4、术 语与 定义 下 列术 语和 定义 适用 于本 规 程。2.1 采 精 用 人工 模拟 且有 自然 交配 感的 工具 ，以 获得 公羊 精液 的方 法。2.射 精 公 羊经 性反 射最 终从 阴茎 射出 混合 液的 过程 。2.3 射 精量 公 羊一 次采 精时 排出 的精 液量 。2.4精 液 由 精子 和精 清两 部分 组成 的雄 性生 殖器 外分 泌物 。精 子悬 浮在 液状 的精 清中 。2.5 精 液品 质检 查 检 查精 液量 、色 、气 味、 密度 、活 力、 存活 时间 ，畸 形率 等。2.6精 子密 度 每 毫升 精液 中的 精子 数。2.7 精 子活 力 37 环 境下

5、直线 前进 运动 精子 占精 子总 数的 百分 比。2.8精 液稀 释液 保 护精 子延 长其 存活 时间 及增 加精 液容 量的 液体 。2.9 细 管精 液 将 精液 用稀 释液 等温 稀释 、平 衡后 ，分 装入 细管 并封 口， 然后 在液 氮中 快速 冷冻 。2.10精 液贮 存 精 液处 理后 至用 于配 种前 需要 保存 的方 法。2.1 DB63/T730208 2 精 液解 冻 冷 冻精 液使 用（ 输精 ）前 的处 理方 法。3规 格与 质量3.1型式式式式剂 量为 0.25毫 升 细 管剂 型。 3.2质 量指 标3.21解 冻后 精子 活力 不低 于 0.35。3.2每

6、 剂量 解冻 后呈 直线 前进 运动 的精 子数 不低 于 30万 个。3.23解 冻后 的精 子畸 形率 不超 过 20%。3.24解 冻后 的精 液无 病原 性微 生物 ，每 剂量 中细 菌落 数不 超过 80个 。 4制 作程 序4.1冻 精制 作室 的要 求室 内清 洁卫 生， 做到 无菌 操作 。不 准存 放损 害精 液的 物品 。器 械的 清洗 和消 毒按 附录 A进 行操 作。4.2采 精4.21无 角陶 赛特 种公 羊 用 于生 产冻 精的 种公 羊 应 体质 健壮 ， 无 农业 部规 定的 动物 疫病 。4.2采 精月 龄和 采精 次数初 次采 精月 龄为 12月 龄。 成年

7、 陶赛 特种 公羊 每周 可采 精 4天 5天 ； 日 采 精 两 次 (2次 间隔 30分 钟 )。4.23采 精过 程按 附录 B的 方法 进行 。4.24合 格新 鲜精 液质 量 精 液呈 乳白 色稍 带黄 色 、 精 子活 力不 低于 0.6、 每 毫升 精子 密度 不低 于 6亿 、 精 子畸 形率 不高 于 15%。4.3稀 释液 的配 制4.31药 品试 剂的 标准配 制冻 精用 的稀 释保 护剂 ，必 须用 经玻 璃蒸 馏器 烧制 的新 鲜的 双 蒸馏 水 ， 卵 黄 应 取自 于无 疫病 鸡场 的新 鲜完 整的 鸡蛋 （洗 净蛋 壳表 面， 用 75%酒 精棉 球对 蛋壳 表

8、面 进行 消毒 ，待 酒精 挥发 后用 蛋清 分离器 取出 完整 卵黄 ）。 4.32推 荐下 列配 方， 作为 细管 冻精 用稀 释保 护剂配 方 1： 双 蒸馏 水 10毫 升， 柠 檬酸 钠 3克 ， 果 糖 3克 ，甘 油 12毫 升， 卵黄 25毫 升。配 方 2： 双 蒸馏 水 10毫 升， 柠 檬酸 钠 3克 ， 葡 萄糖 3克 ，甘 油 12毫 升， 卵黄 25毫 升。4.3稀 释液 配制 方法基 础液 的配 制 ： 先 准确 称取 柠 檬酸 钠 3克 ， 果 糖 3克 ， 放 入容 器为 10毫 升的 量筒 内 ， 加 双蒸 馏水 50毫 升， 用消 毒过 的玻 璃棒 搅拌

9、，待 溶解 后再 加双 蒸馏 水定 容至 10毫 升， 混匀 后用 滤纸 过滤 于三 角烧 杯 中 ，扎 好瓶 口， 置水 浴锅 中隔 水煮 沸消 毒 30分 钟。第 一液 的配 制： 取冷 却后 （室 温） 基础 液的 75毫 升于 三角 烧瓶 中， 加入 卵黄 25毫 升， 用磁 力搅 拌器 充分 搅拌 均匀 。 第 二液 的配 制： 取第 一液 8毫 升， 加入 隔水 煮沸 消毒 好的 甘油 12毫 升充 分搅 拌均 匀。以 上各 稀 释保 护剂 要现 配现 用 ， 每 10毫 升加 青、 链霉 素各 10万 单位 。4.精 液处 理 4.1准 备 DB63/T730208 3 凡 接触

10、 精液 的器 皿均 应放 置于 34 恒 温箱 中 ， 稀 释液 置 34 恒 温水 浴箱 中备 用 。 对 盛装 稀释 精液 的稀 释管 做明 显标 记。 4.2镜 检与 密度 测定采 集的 精液 通过 专用 窗口 传递 入精 液处 理室 后 ， 取 精液 一小 滴于 载玻 片上 ， 加 盖盖 玻片 后在 38 恒温 装置 的显 微镜 上评 定活 力。 显微 镜放 大倍 数为 40倍 。按 精液 密度 测定 仪测 定的 操作 规程 准确 进行 精液 的密 度测 定。 4.5精 液的 稀释 、降 温与 平衡4.51稀 释比 例与 稀释 方法根 据鲜 精液 的密 度和 活 力 确定 相应 的稀

11、释比 例。 采 用 二 次稀 释法 。 将 所加 稀释 液分 为两 次添 加 。 首先 加入 不含 甘油 的第 一液 ， 加 至稀 释总 量的 一半 ， 降 温 、 平 很衡 后再 加足 含甘 油的 第二 液 。 添 加与 精液等 温的 稀释 液时 应缓 缓加 入。 4.52降 温和 平衡 稀 释后 的精 液， 采用 逐渐 降温 法。 在 1小 时 1.5小 时 内 ，使 稀释 精液 的温 度降 到 4 5 后 ，在 同 温的 恒温 容器 内 平衡 2小 时 3小 时 。4.53细 管精 液的 分装 与冷 冻4.53.1细 管为 无毒 、耐 低温 的专 用塑 料管 。分 装时 应采 用与 细管

12、 配套 的器 具。 并按 冷冻 精液 人工 授技 术操 作规 程的 要求 进行 ，保 证清 洁、 无菌 。 4.53.2在 低温 柜中 进行 分装 ，细 管分 装后 ，须 将口 封严 。分 装后 的细 管即 可冷 冻。 冻精 的初 冻温 度 为 -10 -130 。 冷冻 时间 为 5分 钟。精 液分 装前 ，应 充分 混匀 ，并 检查 精子 活力 。 细 管上 所印 字迹 应清 晰， 信息 （冻 精生 产单 位、 品种 及羊 号、 冻精 生产 日期 ）齐 全。5冻 精 质 量检 查方 法5.1冻 精解 冻方 式： 40 水 浴 8秒 解冻 。5.2冻 精质 量检 查方 法按 GB/T2057

13、-206中 附录 A部 分 进 行。6包 装、 标记 、贮 存和 运输6.1包 装 用 无菌 纱布 袋包 装， 每袋 包装 量不 超过 50支 。6.2标 记包 装袋 外面 ，均 应有 明显 的标 记。 注明 无 角 陶 赛特 公羊 号、 生产 日期 或批 号、 数量 、精 子活 力。盛 装细 管冻 精的 容器 外面 ， 均 应有 明显 的标 记 。 注 明生 产单 位 、 无 角 陶 赛特 公羊 号 、 精 液制 冻日 期以 及该 批 冻 精的 精 子活 力 和 份数 。6.3贮 存 6.31用 液氮 生物 容器 贮存 ，容 器内 液氮 必须 浸没 冻精 。6.32应 经常 检查 液氮 生物

14、 容器 的状 况， 如发 现容 器异 常， 立即 将冻 精转 移到 其他 完好 的容 器内 。6.3取 放冻 精之 后， 应及 时盖 好容 器塞 ，防 止液 氮蒸 发或 异物 浸入 。6.34大 型液 氮生 物容 器 ， 应 有冻 精分 类存 放位 置的 详细 图表 ， 分 别注 册 ， 登 记清 楚 ， 并 应备 有足 够的液 氮生 物容 器， 严防 不同 品种 和不 同个 体的 冻精 混淆 。无 继续 贮存 价值 的冻 精， 妥善 销毁 。6.4运 输 冻 精运 输过 程中 要有 专人 负责 ，贮 存器 不得 横倒 、碰 撞和 强烈 振动 ，保 证冻 精始 终浸 在液 氮中 。 DB63/

15、T730208 4 附 录 A（ 规范 性附 录）器 械的 清洗 和消 毒A.1玻 璃器 皿使 用后 或新 购置 的， 用自 来水 浸泡 。洗 涤时 ，先 在加 有洗 涤剂 的温 热溶 液中 刷拭 干净 ，再 用水 冲洗 干净 ， 最 后用 蒸馏 水冲 洗 ， 直 至器 皿光 亮 、 无 水滴 附着 为止 。 将 洗净 的玻 璃器 皿放 入电 热干 燥 箱， 加热 至 160 后 再衡 温 60分 钟， 自然 冷却 后待 用。A.2假 阴道 使用 后 ， 用 水冲 洗去 表面 污物 ， 在 加有 洗涤 剂的 温热 溶液 中用 毛刷 刷洗 ， 并 用水 冲洗 干净 ，再 用蒸 馏水 逐个 冲洗

16、。将 洗净 的假 阴道 放在 架子 上， 其上 覆盖 两层 清洁 纱布 ，凉 干备 用。A.3竹 夹 、 瓷 漏 斗 、 金 属 镊 子 、 止 血 钳 、 胶 塞 和 吸 管 滴 头 等 用 75%酒 精 棉 球 擦 拭 消 毒 ， 待 酒 精 挥 发 后方 能使 用， 冷冻 架使 用前 用紫 外线 消毒 30分 钟。 A.4盖 玻片 、载 玻片 ，用 后立 即浸 泡于 水中 ，洗 净后 用柔 软的 布擦 拭干 净备 用。A.5纱 布应 定期 清洗 、消 毒。 包装 用的 塑料 细管 、塑 料管 及纱 布袋 用紫 外线 消毒 30分 钟后 方可 使用 。 DB63/T730208 5 附 录

17、 B（ 规范 性附 录）无 角陶 赛特 种公 羊采 精过 程B.1台 羊 选择 选 择发 情好 的健 康母 羊作 台羊 ， 后 躯应 擦干 净 ， 头 部固 定在 采精 架上 。 训 练好 的公 羊还 可用 作台 羊 、假 台羊 等都 能采 出精 液来 。 B.2假 阴道 的准 备将 消 毒 过 的 内 胎 ， 用 生 理 盐 水 棉 球 或 稀 释 液 棉 球 从 里 到 外 的 擦 拭 ， 在 假 阴 道 一 端 扣 上 集 精 瓶 （ 当室 温低 于 25 时 ， 集 精瓶 夹层 内要 注入 30 35 的 温水 ） 。 在 外壳 中部 生水 孔注 入假 阴道 容 积约 2/3 的 50

18、 5 温 水 ， 拧 上 气 卡 塞 ， 套 上 双 联 打 气 球 打 气 ， 使 假 阴 道 的 采 精 口 形 成 三 角 形 。 最 后 把 温 度计 插入 假阴 道内 测温 ， 温 度在 38 40 为 宜 。 在 假阴 道内 胎的 前 1/3处 ， 涂 抹 适 量凡 士林 作 润滑 剂 。B.3采 精操 作 采 精前 ， 将 包皮 周围 擦干 净 。 采 精员 蹲在 台羊 右侧 后方 ， 右 手握 假阴 道 ， 气 卡塞 向下 ， 靠 在台 羊臀 部， 假阴 道和 地面 呈 35度 角 。当 陶赛 特公 羊爬 跨伸 出阴 茎时 ，左 手轻 托阴 茎包 皮， 迅速 地将 阴茎 导 入 假阴 道内 ， 当 陶赛 特公 羊完 成抬 头 、 挺 腰 、 前 冲动 作时 ， 表 示射 精完 毕 。 随 着陶 赛特 公羊 从台 羊身 上滑 下时 ， 将 假阴 道取 下 ， 立 即使 集精 瓶的 一端 向下 坚立 ， 打 开气 卡塞 放气 ， 取 下集 精瓶 ， 送 操作 室检 查 。 DB63/T730208 6 DB63/T730208 7 DB63/T730208 8