DB51 T 1302-2011 《绵羊肺炎支原体PCR检测技术规程》.pdf
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1、ICS 11.220 B 41 DB51 备案号:30905-2011 四川省地方标准 DB51/T 13022011 绵羊肺炎支原体 PCR 检测技术规范 Technical Specification for PCR Detection Method of Mycoplasma ovipneumoniae 2011 - 06 - 27 发布 2011 - 07 - 01 实施四川省质量技术监督局 发布DB51/T 13022011 I 目 次 前 言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语与定义 1 4 设备和试剂 1 5 DNA提取 . 2 6 PCR扩增 . 3 7
2、PCR产物的电泳检测 . 3 8 结果判定 3 附录A(资料性附录) 试剂配制 5 DB51/T 13022011 II 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位:西南民族大学 四川省畜禽繁殖改良总站。 本标准主要起草人:杨发龙 岳华 王永 汤承 傅昌秀。 DB51/T 13022011 1 绵羊肺炎支原体 PCR 检测技术规范 1 范围 本标准规定了绵羊肺炎支原体的PCR(聚合酶链式反应)检测方法。 本标准适用于绵羊肺炎支原体的检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是
3、注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction (PCR) 是一种 分子生物学 技术,用于体外大量扩增特定的DNA片段。 3.2 引物 primer 是人工合成的两段寡核苷酸序列,用于聚合酶链式反应,其中一条引物与目标片段一端的一条DNA模板链互补,另一条引物与目标片段另一端的另一条DNA模板链互补。 4 设备和试剂 4.1 主要仪器和设备 4.1.1 P
4、CR 扩增仪 4.1.2 电泳仪、水平电泳槽 4.1.3 凝胶成像系统 4.1.4 冷冻高速离心机 4.1.5 微量高速离心机(适合于对 PCR 反应管进行离心操作) 4.1.6 高压灭菌锅 DB51/T 13022011 2 4.1.7 恒温水浴锅 4.1.8 移液器(0.1 L-10L、2 L-20L、20 L-200L、200 L-1000L) 4.2 主要试剂 4.2.1 引物(10 mol/L) P1:5-TGAACGGAATATGTTAGCTT-3 P2:5-GACTTCATCCTGCACTCTGT-3 4.2.2 DNA 提取试剂 蛋白酶K、十二烷基硫酸钠(SDS)、酚、氯仿、异
5、戊醇、无水乙醇。 4.2.3 PCR 反应试剂 Taq DNA聚合酶(5U/L) 、MgCl 2(25mmol/L) 、dNTP(每种浓度为 2.5mmol/L) 、10PCR Buffer(无Mg2+)。 4.2.4 STE 缓冲液(见附录 A) 4.2.5 TAE 电泳缓冲液(见附录 A) 4.2.6 6上样缓冲液(6 Loading Buffer) 4.2.7 琼脂糖(电泳级) 4.2.8 溴化乙锭溶液(1mg/mL) 4.2.9 DNA 分子量标准(100bp,200bp ,300bp,400bp,500bp,600bp) 4.2.10 水 所用水应符合GB/T 6682中三级水(三蒸
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