GB T 20743-2006 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色 谱-串联质谱法.pdf

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1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20743-2006 猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肤残留液相色谱阳串联质谱法Method for the determination of bacitracin residues in porcine liver, kidney and muscle tissues一LC-MS-MS method 的测定2006圄12回31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检菠总局也舍中国国家标准化管理委员会战叩GB/T 20743-2006 -脑._剧目本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验

2、检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。本标准主要起草人:庞国芳、范春林、连玉晶、李岩、郑军红、曹彦忠、张进杰、李学民、刘永明。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肤残留量的测定液相色谱串联质谱法G/T 20743-2006 本标准规定了猪肉、猪肝和猪肾中杆菌战就血晶跑跑相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肉、猪肝和猪肾启样窗肤残留量的测定:如现法测定杆商肤中主要成分忏菌肤A)。本标准的方法检出限:50.02 规范性引用文件下列文件中的条苦的修改单(不包括勘、GB/T 63

3、79. 性与再现性的基酣萨(GB/T6 3 原理试样中杆相萃取柱净化，也4 试剂和材料除另有说明外，4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 三氯甲烧z色i普k4.3 甲酸。4.4 双硫惊:优级纯。实验室用4.5 杆菌肤标准物质:纯度二三4.6 甲醇+水(1十1):量取250m静地醇(4.1)与250mL水1定在F准测量方法重复净化后，再经圄4.7 0.3%甲酸榕掖z移取3mL甲酸(4.3fT赞精哟哺纱伊髓仨水的1L容量瓶中，用水定容至刻度并海匀。4.8 0.1%甲酸甲醇梅液:移取1mL甲酸于装有约800mL甲醇的1L容量瓶中，用甲醇定容至刻度并由匀。4.9 0.002 5%双硫腺三氯甲皖榕破:称取0.

4、025g双硫晾(4.4)于装有约800mL三氯甲烧(4.2)的1 L容量瓶中，用三氯甲:境定容至刻度并棍匀。4. 10 饱和双硫腺三氯甲烧榕液:移取适量的0.0025%双硫腺三氯甲:民梅破于盛有约100mL甲醇+水0+1)的250mL分液漏斗中，振摇1min，静置分层，取下层悔液备用。4. 11 杆菌肤标准储备溶液:准确称取适量的杆菌肤于50mL容量瓶中，用0.1%甲酸甲醇榕蔽配制成被度为0.1mg/mL的标准储备榕液。储备液在20C40C保存，可用3个月。1 GB/T 20743-2006 4. 12 忏菌肤标准工作陪液:移取杆菌肤标准储备榕液1.0 mL于10mL容量瓶中，用0.1%甲酸甲

5、醇溶攘定容，配制成故度为10.0mg/L的标准工作溶液，在2C4C保存，可用l周。4. 13 忏菌肤基质标准工作溶液:根据需要吸取适量的杆菌肤标准工作溶液，用空白样品提取液稀释成适当放度的基质标准工作梅夜，当天配制。4. 14 Oasis HLB固相萃取柱或相当者:60mg , 3 mL。使用前分别用3mL甲醇和3mL水预处理，并保恃柱体温润。5 仪器5. 1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子掘。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g, 5.3 高速组织捣碎机:转速不低于10000 r/min。5.4 振荡器。5.5 离心机:转速不低于4000 r/mino 5.6 离心管:1

6、0mL和60mL，具塞。5. 7 贮被器:50mL。5.8 固相革取真空装置。5.9 氯气吹干仪。5. 10 微量注射器:25L，100Lo6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备猪肝脏、肾脏要去除脂肪和其他的非肝脏、肾脏组织，猪肉要去皮和骨头，将其搅碎拌匀，分出0.5 kg作为试样，将制备好的试样密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样置于-18C条件下保存。7 测定步黯7. 1 提取称取10g试样(精确到O.01 g)置于60mL离心管中，加入0.1mL甲酸和20mL甲醇+水(1十1)，于高速组织捣碎机上匀浆提取1min，然后加入20mL经甲醇十水(1十1)饱和的0.0025%双硫踪三氯甲

7、烧榕液，于振荡器上剧烈振荡10min，以4000 r/min离心10min，取上清液10mL于50 mL试管中，弃去其余上清液。往上述双硫踪三氯甲烧榕液中加入30mL水，捣碎残渣，置于振荡器上剧烈振荡10min，移取全部上清被于另一60mL离心管中。重复提取一次，合并上清液，混匀，以4000r/min离心10min，取上清液30mL与50mL试管中的提取被合井，棍句。7.2 净化在预处理过的固相萃取柱顶部连接贮液器，移人上述试管中样液，待样液全部通过萃取柱后，加入2 mL水，弃去全部流出液。然后，将固相萃取柱在50kPa55 kPa的负压下抽干1h，最后用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL试

8、管中，洗脱拖在35C水活中用氯气吹干，用0.5mL甲醇重新榕解残攘，再加入0.5mL 0.3%甲酸梅液，摇匀后，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3 测定7. 3. 1 液相色谱条件的色谱柱:Inertsil ODS-3 , 5. 0m，150 mmX2.1 mm(p;径)或相当者;2 GB/T 20743-2006 b) 被相色i普梯度洗脱条件见表1; c) 柱瘟:40;d) 进样量:20L。表1液相色i曹梯度洗脱条件时间/min流速/(L/min)水(含0.3%甲酸)/(%) 甲酶/(%)0.00 400 95.0 5.0 5.00 400 50.0 50.0 20.00 400 50.0

9、50.0 20. 10 400 95.0 5.0 25.00 400 95.0 5.0 7.3.2 质谱条件a) 离子掘:电喷雾离子拥;b) 扫描方式:正离子扫描;c) 检测方式:多反应监测;d) 电喷雾电压:5500V; e) 碰撞气压力:410kPa; f) 雾化气压力:690kPa; g) 气帘气压力:410kPa; 的辅助加热气压力.690凹的i) 离子掘温度:700.C;j) 定性离子对、定量离子对和去簇电压CDP)、聚焦电压CFP)、碰撞气能量CCE)及碰撞室出口电压CCXP)见表2.表2杆菌肤的定性离子对、定矗寓子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞气能噩和碰撞室出口电压定性定量去簇聚焦

10、碰撞气碰撞室名称离子对离子对电压CDP)/电压(FP)/能量(CE)/出口电压(CXP)/(m/z) (m/z) V V V V 73 3 杆菌肤712.3/227.2 712.3/199.2 52 90 48 7 712.3/356.2 43 3 7.3.3 液相色i曾国串联质i普测定用5个不同被度的杆菌肤基质标准工作溶液分别进样，以标准工作榕破撒度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品陪液中杆菌肤的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，杆菌肤的总离子流图参见图A.1。杆菌肤的保留时间为8.49 min 本方法的添加回收率数据参见表B.

11、l.7.4 平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验。7.5 空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。3 GBjT 20743-2006 结果计算8 .( 1 ) nu-nu nu-nU AU-nu 1土41 v-m 户w一X 抨菌肤残留量按式(1)计算:式中:X一一试样中杆菌肤残留量，单位为做克每千克(g/kg); c一一一从标准工作曲线得到的试样静被中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V一一试样溶液定容体积，单位为毫升(m一最终试样溶液所代表的啡趟，单位朋(g)o注:计算结果宿将空白值扣除。! 配来密耀定iAE-M川刑主时黯准的相复及标涡盟章围本引童在范以1量值9.

12、含，其重复性和再现性的精密度9 r。样品中杆菌肤的测定。中杆菌肤含量范得表获qh即含量范围/C注，m为两如果两次测E9.2 再现性在再现性条号围及重复性方程4 名称忏商肤GB/T 20743-2006 附录A(资料性附录)杆菌肤标准物质的总离子流图杆菌肤标准物质的总离子流图，见图A.L8.49 1160 1140 1120 1100 1080 1060 1040 1020 1000 980 960 940 920 900 880 860 840 820 800 780 760 740 720 700 500 480 460 440 420 400 380 360 340 320 300 280

13、 260 240 220 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 在pb百aga-1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 t/min 图A.1 杆菌肤标准物质的总商子流图5 GB/T 20743-2006 附录B(资料性附录)回收率本标准中杆菌肤器加陆度及平均回收率的试验数据见表B.lo表B.l杆菌肤添加琅度及其平均回收率的试验教据梓品名称添加浓度/(mg/kg)0.05 猪肉0.20 0.50 1. 00 。.050.20 猪肝0.50 1. 00 0.05 猪肾0

14、.20 0.50 1. 00 6 回收率/(%)83.3 92.8 86. 7 98. 9 86. 9 85. 3 84. 2 82. 2 84. 2 82.0 83.8 83. 1 CON-的叮hONH阁。华人民共和国家标准猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肤残留置的测定液相色i蕾串联质谱法GB/T 20743-2006 国出铃中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销奇峰印张O.75 字数12千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价10.00元争昏书号，155066 1-28926 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)6853353320743-2006