DB15 T 4522-2026 马胚胎移植技术规程.pdf

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1、 ICS 65.020.30 CCS B 44 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 45222026 马胚胎移植技术规程 Code of practice for embryo transfer in equine 2026-09-10 发布2026-10-10 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 45222026 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（S

2、AM/TC 19）归口。本文件主要起草单位：沛升（北京）生物科技发展有限公司、沈阳农业大学、通辽市农牧业发展中心、科尔沁左翼中旗畜牧工作站、通辽市农牧局、巴林右旗农牧业综合行政执法大队、赤峰市红山产业园管理办公室、通辽京缘种牛繁育有限责任公司、赤峰市农牧技术推广中心。本文件主要起草人：张翔、李航、巢淑恩、王文蕊、邓亮、张淑珍、薛晓兰、史文秀、何曙光、石顺利、田耕辰、张秋生、屈阳阳、李晶、王志华、孙劼、王志慧、候景辉、王平、王时阳。DB15/T 45222026 1 马胚胎移植技术规程 1 范围 本文件规定了供体马的同期发情与处理、人工授精、胚胎采集及处理、受体母马的选择及胚胎移植等技术操作的基

3、本原则、要求和方法。本文件适用于马胚胎移植技术推广应用的规范化操作。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB15/T 3748 马人工授精技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 基本要求 实验室要求 4.1.1 胚胎实验室 实验室内应洁净，室内温度保持在20 25，避免阳光直射。4.1.2 采胚室 为胚胎采集专用，应保持清洁，地面要防滑，便于清洗、消毒，设有保定栏，与胚胎实验室之间安装传递窗，室内温度不低于

4、15。器械与耗材 所用的器材与耗材及要求按照附录A。试剂与药品 所用的试剂和药品及要求按照附录B。5 供体马的同期发情与处理 供体母马同期发情处理 DB15/T 45222026 2 母马在自然排卵后第 5 d 肌肉注射 PGF2或其类似物，注射后 3 d5 d 母马开始出现发情现象，卵泡直径35 mm 时，肌肉注射促性腺激素释放激素（GnRH）或人绒毛膜促性激素（hCG）促排。排卵时间未知的母马采用二次注射 PGF2或其类似物法，两次注射间隔 14 d18 d，母马发情后操作同上。人工授精 按照 DB15/T 3748 的规定执行。6 胚胎采集及处理 胚胎采集时间 排卵日记为第 0 d，在排

5、卵后第 7 d8 d 收集胚胎。供体母马准备 将供体母马保定后，清理直肠内的宿粪，清洗母马会阴部及肛门周围的粪便，使用清水冲洗，再用0.1%新洁尔灭冲洗消毒，用灭菌纸巾擦干。静脉注射 0.02 mg/kg0.04 mg/kg 盐酸地托咪啶，或者 0.5 mg/kg1 mg/kg 盐酸噻拉嗪。以母马镇静且后肢可平衡站立为宜。胚胎采集 6.3.1 三通管（Y 型）采胚法 操作人员手臂套上无菌直检手套，涂抹润滑剂后伸进母马阴道中，引导一根采胚管缓慢通过子宫颈，直至前端气囊进入子宫体为止。向采胚导管前端的气囊内充入 30 mL50 mL 气体。待采胚管固定好后，将手臂从阴道中抽出。采胚时，接通采胚管与

6、过滤杯，将冲洗液高举，当两侧子宫角都充满冲洗液后，通过 Y 连接使冲洗液直接通过过滤杯。重复上述操作 45 次。6.3.2 采胚后处理 供体母马肌肉注射 PGF2或其类似物。检胚 6.4.1 回收液处理 将过滤杯中留下的 20 mL30 mL 回收液倒入培养皿，再用少量冲洗液冲洗过滤杯 23 次，一并倒入培养皿镜检。6.4.2 镜检 在体视显微镜下按照从上到下、从左向右或从外到内“Z”字形移动，用吸胚管将胚胎移入 12 孔培养板中的保存液中，然后将同一供体母马的胚胎从液滴中全部吸出移到新液滴，并反复洗涤胚胎 810次。进行胚胎质量鉴定和分级。6.4.3 胚胎发育阶段分类 DB15/T 4522

7、2026 3 胚胎发育阶段分类按照附录 C 中表 C.1。6.4.4 胚胎质量鉴定及分级 胚胎质量鉴定及分级按照附录 C 中表 C.2。7 受体母马的选择及胚胎移植 受体母马的选择 健康、无繁殖疾病、年龄 312 岁的母马。受体母马同期发情处理 同 5.1。胚胎移植 7.3.1 受体母马的检查 与供体同期的受体母马做直肠 B 超检查，确定排卵侧有功能性黄体，子宫生殖机能正常。7.3.2 受体母马的准备 同 6.2。7.3.3 胚胎的准备 移植前，胚胎使用保存液冲洗两次，将胚胎装入细管，再装入移植枪备用。装管方式按照附录 D 执行。7.3.4 移植操作 操作人员套上无菌的长臂手套，手持装有胚胎的

8、移植枪。将移植枪通过子宫颈口导入子宫体内。待将胚胎推入后，缓缓将移植枪撤出。使用冲洗液冲洗移植枪头部至检胚盘内，在体视显微镜下检查以确保胚胎已移植入母马体内。8 记录 供、受体母马发情记录表参照附录 E 中表 E.1。受体马移植记录参照附录 E 中表 E.2。DB15/T 45222026 4 A A 附录A （规范性）器械与耗材 器械与耗材如表A.1所示。表A.1 器械与耗材 序号 名 称 A.1 人工授精器械与耗材 按照 DB15/T 3748 的规定执行 A.2 胚胎移植器械与耗材 A.2.1 超净工作台 A.2.2 体视显微镜 A.2.3 微量移胚器 A.2.4 电热恒温盘或恒温板 A

9、2.5 第 7d、8d 马用胚胎移植枪；移植枪塑料硬外套；移植枪塑料软外套膜。A.2.6 冲胚管（“Y”形管）A.2.7 过滤杯 A.2.8 直径 100 mm 的培养皿、12 孔板 A.2.9 2000 ml 量筒 A.2.10 2 mL、20 mL、50 mL 注射器 A.2.11 0.25 mL、0.5 mL 塑料细管 A.2.12 一次性灭菌长臂手套 A.2.13 一次性长臂手套 A.2.14 一次性乳胶手套（无菌）A.2.15 灭菌纸巾 DB15/T 45222026 5 B B 附录B （规范性）试剂与药品 试剂与药品如表B.1所示。表B.1 试剂与药品 序号 试剂及药品名称 B

10、1 0.1%新洁尔灭 B.2 前列腺素（PGF2）或其类似物 B.3 促性腺激素释放激素（GnRH）B.4 人绒毛膜促性腺激素（hCG）B.5 无菌润滑剂 B.6 冲洗液 B.7 胚胎保存液 B.8 盐酸地托咪啶 B.9 盐酸噻拉嗪 B.10 生理盐水 DB15/T 45222026 6 C C 附录C （规范性）胚胎发育阶段和形态特征 胚胎发育阶段和形态特征如表C.1所示。胚胎质量鉴定及分级如表C.2所示。表C.1 胚胎发育阶段和形态特征 胚胎发育阶段 大小 m 形态特征 桑葚胚（Morula）150200 卵裂球界限清晰，透明带较厚，未形成致密细胞团。在进行操作时，卵裂球细胞和透明带之间

11、可能会出现明显的卵周隙。早期囊胚（Early blastocyst,EB）150250 大小类似于桑椹胚，具有较厚的透明带，在细胞团中出现散在的囊腔，卵周隙最小，细胞团占据透明带内 70%80%的空间。囊胚（Blastocyst,BL）150300 此时的滋养层与内细胞团的形态比较容易区别。胚胎细胞充满整个透明带内。囊胚腔周围形成一层滋养层细胞，在滋养层细胞和透明带之间有明显的胶膜囊，透明带变薄。扩张囊胚（Expanded blastocyst,EXB）3002500 整个胚胎直径增大，囊胚腔充分扩张并被一层较薄的滋养层细胞包围着，与透明带之间无间隙，透明带变薄或已脱漏。滋养层细胞小而均匀，明

12、显的内细胞团突出于囊胚腔，胚胎直径取决于胚胎的日龄。未受精卵（Unfertilized oocyte,UFO）125150 较厚的透明带，椭圆形，平坦，细胞膜和细胞质可能已经退化或分散。表C.2 胚胎质量鉴定及分级 等级 特征 1 级 胚胎形态完整，轮廓清晰，呈球形，分裂球大小均匀，结构紧凑，色调和透明度适中，胚胎细胞团呈均匀对称的球形，透明带光滑完整，厚度适中，不规则的细胞相对较少，变性细胞不高于 15%。可用作胚胎移植。2 级 胚胎形态完整，轮廓清晰，色调和细胞密度良好，透明带光滑完整，厚度适中，存在一定数量大小和形状不规则或受挤压的细胞或细胞团，滋养层和透明带之间有部分分离。但变性细胞不

13、高于 50%。可用作胚胎移植。3 级 胚胎形态不完整，轮廓不清晰，色调发暗，有较多被挤压或退化的细胞，囊胚腔部分塌陷，或者透明带上滋养层细胞出现缓慢地收缩。变性细胞不高于 75%。可用作胚胎移植。4 级 未受精卵，或发育停滞、变性、卵裂球不规则、少而散。不可用作胚胎移植。DB15/T 45222026 7 D D 附录D （规范性）胚胎装管示意图 胚胎装管示意图如图D.1所示。图D.1 胚胎装管示意图 马胚胎 液体 空气 液体 DB15/T 45222026 8 E E 附录E （资料性）供、受体母马发情记录、受体马胚胎移植记录表 供、受体母马发情记录表如表E.1所示。受体马胚胎移植记录表如表E.2所示。表E.1 供、受体母马发情记录表 马名：品种：编号：年龄：毛色：繁殖情况：日期 时间 左卵巢 右卵巢 子 宫 输 精 药物处理 备注 水肿 空气 液体 公马 输精 时间 体积 促排(hCG)促发情(PG)表E.2 受体马胚胎移植记录表 受体 编号 排卵 日期 黄体 情况 胚胎移植情况 妊检情况 日期 胚胎编号 级别 术者 日期 结果 术者