DB6103 T 33-2022 奶山羊精液品质鉴定技术规范.pdf

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1、 ICS 65.020.30 CCS B43 6103 宝鸡市地方标准 DB 6103/T 332022 奶山羊精 液品质鉴 定技术规 范 Technical specification for semen quality identification of dairy goat 2022-07-30 发布 2022-08-30 实施 宝鸡市市 场监督 管 理局 发 布 DB 6103/T 33 2022 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 采精.2 5 检测.3 6 结 果判 定.3 7 鉴 定记 录.4 附录A（规 范性）奶山 羊

2、精液 品质 显微 镜检 测方 法.5 附录B（规 范性）奶山 羊精液 分析 仪检 测方 法.8 附录C（规 范性）奶山 羊精液 品质 鉴定 登记 表.9 DB 6103/T 33 2022 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 由陇 县畜 产局 提出。本文件 由宝 鸡市 农业 农村 局归口。本文件 起草 单位：西 北农 林科技 大学、陇 县畜 牧工 作站、泾阳 县动 物卫 生监 督所、陕西 省畜 牧 技 术推广总 站、陕西 省畜 牧产 业试验 示范 中心、陕 西和 氏高寒 川牧 业有 限公

3、 司。本文件 主要 起草 人：边 会 龙、郑惠 玲、朱梦 笛、史怀 平、王鹏 飞、侯鸽 利、王芳、黄 桂姣、何 晓学、李文亮、赵 少斌、王 缠石、王 森、张敏 飞、代军 刚、张永 刚。本文件 由陇 县畜 牧工 作站 负责解 释。本文件 首次 发布。联系信 息：单位：陇县 畜牧 工作 站 电话：0917-4601435 地址：陇县 东大 街126 号 邮编：721200 DB 6103/T 33 2022 1 奶 山羊精 液品质鉴 定技术 规范 1 范围 本文件 规定 了奶 山羊 精液 品质鉴 定的 术语 和定 义、采精、检测、结 果判 定和 鉴定记 录的 要求。本文件 适用 于奶 山羊 种公

4、羊原精 液品 质鉴 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 20557-2006 山 羊冷 冻精液 NY/T 1234-2018 牛 冷冻 精液生 产技 术规 程 NY/T 3186-2018 羊 冷冻 精液生 产技 术规 程 3 术语和 定义 NY/T 1234、NY/T 3186 界 定的以 及下 列术 语和 定义 适用于 本文 件。种公羊 stu

5、d buck 3.1 符合奶 山羊 品种 标准、具 有种用 价值 并参 与正 常配 种的公 羊。采精 semen collection 3.2 使用采 精器 以获 得公 羊精 液的操 作方 法。来源：NY/T 3186-2018，定义3.2 精液 semen 3.3 由精子 和精 清两 部分 组成 的混合 液体。精 子悬 浮在 液状的 精清 中。原精液 original semen 3.4 采集后 未经 稀释 处理 的精 液。来源：NY/T 3186-2018，定义3.1 采精量 volume per ejaculate 3.5 种公羊 一次 采精 时排 出的 精液量。来源：NY/T 1234

6、-2018，定义3.6，有修 改 精子密 度 sperm density 3.6 单位体 积精 液中 的精 子数。单位 为108个/mL。DB 6103/T 33 2022 2 来源：NY/T 3186-2018，定义3.3 前进运 动精 子数 progressive motility 3.7 每毫升 精液 中呈 前进 运动 的精子 数。来源：GB 20557，定义3.1 精子活 力 sperm motility 3.8 在37 环境 下，精液 中直 线前进 运动 的精 子数 占总 精子数 的百 分率。来源：GB 20557，定义3.2，有 修改 精子活 率 sperm motility pe

7、rcentage 3.9 在37 环境 下，精液 中活 精子数 占总 精子 数的 百分 率。精子畸 形率 abnormal sperm percentage 3.10 精液中 畸形 精子 占总 精子 数的百 分率。来源：GB 20557，定义3.3 4 采精 基本要 求 4.1 4.1.1 种公羊 应符合GB 20557-2006 中4.1 的要 求。4.1.2 采精员 经专业 培训，取 得相 关资 质。4.1.3 采精室 地面清 洁防 滑，温度 舒适，避免 太阳 光直 射，环境 安静。4.1.4 精液处 理室 应符合NY/T 3186-2018 中4.1 的规 定，地面 清洁，室 温控制 在

8、18 25。4.1.5 稀释液 商品稀 释液 按产 品说 明书 使用。自制 稀释 液应 按附 录A.2.2.1 精液 的 稀 释方 法 配置。4.1.6 器械清 洗消 毒 应按NY/T 3186-2018 中附 录A的 要求 执行。精液采 集 4.2 4.2.1 采精 应按NY/T 3186-2018 中第5 章的要 求执 行。用电 子采 精器时，按 产品 说明 书操 作。DB 6103/T 33 2022 3 4.2.2 采精频 次 配种季 节，1.5 岁左 右的 青年种 公羊 采精 2 次/d，2.5 岁 以上 成年 种公 羊采 精3次 4 次/d。每 天连续采 精2 次以 上时，中 间

9、间隔30 min 60 min。5 检测 精液处 理 5.1 精液采 集后，做好 标记，30 min 内 常温 避光 保存，立即 处理 并 检测。精液 处理 时 放置在32 34恒温水 浴锅 中，完成 检测。检测项 目 5.2 5.2.1 感官检 测 5.2.1.1 射精量 用2mL 吸管 将集 精杯 的原 精 液吸入 有刻 度的 集精 管中，通过刻 度管 上的 刻度 值测 量精液 的量 值（mL）。5.2.1.2 颜色 目测 集 精杯 或集 精管 中原 精液的 颜色。5.2.1.3 云雾状 目测 集 精杯 或 集 精管 中的 精液，精液 呈翻 腾滚 动的 云雾状 态。5.2.1.4 气味 一

10、只 手 将装有 原精 液的集 精杯或 集精管 放在 距鼻子10 cm 20 cm 处，另一 只 手在瓶 口轻微 扇动，嗅闻精 液气 味。5.2.1.5 pH 用玻璃 棒蘸 取1 滴精 液于 精 密pH试 纸上，对 照比 色。或用酸 度计 测定。5.2.1.6 杂质 将装有 原精 液的 集精 杯或 集精管 放在 光线 充足 处观 察。5.2.2 实验室 检测 5.2.2.1 显微镜 检测 应按附 录A 规定 的方 法测 定。5.2.2.2 精液分 析仪 检测 应按附 录B 规定 的方 法测 定。6 结果判 定 判定要 求 6.1 DB 6103/T 33 2022 4 评价种 公羊 时，每采 精

11、1 次 检测1 次，取3次 检测 结果 平均值，进 行判 定。感官检 测判 定 6.2 6.2.1 原精液，乳 白色 或乳 黄色、有云雾 状、无味 或略 腥、pH6.4 7.1、无 杂质，判 定 为合格 精液。6.2.2 感官检 测判 定为 不合 格的 精液，均不 做实 验室 检测。实验室 检测 判定 6.3 6.3.1 原精液，精 子密 度 20 108/mL，精 子活 力70%，精子畸 形率 14，判定 为合格 精液。6.3.2 6.3.1 中任 何一 项不 达标，均判 定为 不合 格精 液。7 鉴定记 录 鉴定记 录应 符合 附 录 C 的 规定。7.1 鉴定记 录保 存2 年以 上。7

12、.2 DB 6103/T 33 2022 5 A A 附录A（规范 性）奶山羊 精液 品质 显微 镜检 测方法 A.1 精子密 度测 定 A.1.1 仪器、试剂 血球计 数器、红 细胞 吸管 或移液 器、2mL 吸管、显 微 镜或显 微电 视装 置、显微 镜保温 箱或 恒温 装置、药棉、小试 管、试管 架、水浴锅、白 绸布；3.0%氯 化钠溶 液、蒸馏 水、95%酒 精、乙 醚。A.1.2 方法 A.1.2.1 精液稀释 A.1.2.1.1 红细胞 吸管 稀释：用 红细 胞吸管 吸取 原 精 液，吸至“0.5”刻 度处，用 药棉 擦 去吸管 尖端 外围附着 的精 液，再 吸 3.0%氯化钠 至

13、“100”刻 度，用 拇指和 食指 堵住 吸管 两头 来回摇 动混 匀，成 为 200倍稀释 精液。A.1.2.1.2 移液器 稀释：用 移液 器吸 取 10 L 原精液，再 加入1990 L（在 小试 管内 先配 制 2 mL，再吸出10 L 弃 去）3.0%氯 化钠，混匀，成 为 200 倍 稀释精 液。A.1.2.2 精液计数 A.1.2.2.1 将盖好 盖玻片 的血 球计数 板置于 显微镜 下低 倍观察（显微 镜恒温 台温 度 37），找到 清晰的计数 室。弃 去吸 管或 移 液器中 的 前2 滴，再将 尖 端置于 血球 计数 室和 盖玻 片交界 处的 边缘 上，精 液 自动渗入 计数

14、 室内。要求 精 液均匀 充满 计数 室，无气 泡、不 溢出。静 置 2 min，开始 计数。A.1.2.2.2 将充满 精液 的 血 球计 数板 置于显 微镜 下放 大 250 倍400 倍 或电 子荧 光屏 上 观察计 数，数出四角 和正 中间 5 个 中方 格（80 个小 方格）中 的精 子数和 直线 前进 运动 的精 子 数。精子 压住 血球 计 数室的线，以 精子 头为 准，按照“数上 不数 下，数 左 不数右”的 原则 计数。每 个样品 重复 测 定 3 次，取 平均值。A.1.3 计算 A.1.3.1 精子密 度 精子密 度按 公式（A.1）计 算：1mL 原 精液 内的 精子

15、数=5 个 中方格 的精 子数 5 10 1000 精液 稀释 倍数.(A.1)A.1.3.2 前进运 动精 子数 按GB 20557-2006附录A.4 的方法 测定。A.1.3.3 精子活 力 精子活 力按 式（A.2）计 算：100 scM(A.2)式中:M 精子 活力;C 直线 前进 运动 精子 数，单位 为个;DB 6103/T 33 2022 6 S 精子 总数，单 位为 个。A.2 精子活 率测 定 A.2.1 仪器、试剂 2mL 吸管、试 管、试 管架、水浴锅、滴管、载 玻片、盖玻片、显微 镜或 显微电 视装置；5%伊 红、1%苯胺黑。A.2.2 方法 A.2.2.1 染色 将

16、5%的 伊红 和1%苯胺 黑按1:1 混匀，分 装于1 mL 2 mL 容量的 试管 中，并在37 水浴锅 中加 温，随后加入 原精 液1 滴3 滴，混匀后 再放 回水 浴锅 中，3 min 后 立即 取出 待用。A.2.2.2 抹片 按GB 20557-2006附录A.5.2.2.1 的规 定执 行。A.2.2.3 计数 将制备 好的 抹片 置于 显微 镜下放 大500倍600 倍检 查，数200 个或500 个 精子，分别数 出死 精子 数 和活精子 数。活精 子头 部透 明、无 色，死精 子头 部呈 红色。A.2.3 计算 精子活 率按 公式（A.3）计 算：1001 sHH(A.3)式

17、中：H 精子 活率,%；H1 活精 子数，单 位为 个；s 精子 总数，单 位为 个。A.3 精子畸 形率 测定 A.3.1 仪器、试剂 显微镜 或显 微电 视装 置、血球计 数器、小 吸管 或移 液器、容量 瓶、锥形 瓶、天平、量杯、试 管、试管架、过滤纸、漏 斗架、漏斗、载玻片、盖 玻片、1 ml 玻璃 管、恒温箱；复 红 原液、95%的 酒精、5%石炭酸、饱 和伊 红酒 精、美 蓝、0.01%KOH、蒸馏 水、无水酒 精、0.5%氯胺T、二 水磷酸 氢二 钠、磷 酸二 氢钾、40%（V/V）福尔 马林 溶液。A.3.2 方法 A.3.2.1 试剂配 制 A.3.2.1.1 复红染 色液

18、制作。复 红原 液（10 g 复红溶 于 100 mL95%的酒 精）10 mL 加5%石炭酸 100 mL。取上述 混合 液50 mL 加饱 和伊红 酒 精 25 mL，放置 两周后 即可 使用。A.3.2.1.2 美蓝染 色液 制作。美 蓝溶 液（10 g 美 蓝溶 于 1000 mL95%的 酒精）30 mL 加0.01%KOH100 ml，过滤后 再加 入3 倍量 的蒸 馏水，混合 后即 可使 用。DB 6103/T 33 2022 7 A.3.2.1.3 福尔马 林-缓冲 液制 作。二 水磷酸 氢二 钠溶 液（21.82 g 二水 磷酸 氢二 钠溶于 500 mL 蒸馏水）200 m

19、L 加 磷酸 二氢 钾 溶液（22.25 g 磷酸 二氢 钾 溶于 500 mL 蒸 馏水）80 mL，配 制成 缓冲 液。取上述缓冲 液100 mL 加40%（V/V）福尔 马林 溶液62.5 mL 再 加蒸 馏水 至500 mL。A.3.2.2 头部畸 形精 子数 A.3.2.2.1 抹片 按照GB 20557-2006 附录A.5.2.2.1 的 规定 制作 精液 抹 片，风干 后浸 入无 水酒 精 中固定1 min 2 min，取出再 风干。A.3.2.2.2 固定 浸入0.5%氯胺T 中1 min 2 min，用清 水 冲 洗1 min 2 min，再 迅速 通过95%的 酒精，风干

20、。A.3.2.2.3 染色 放入复 红染 色液 中10 min 15 min。清水 中蘸2次。再迅速 通过 美蓝 染色 液，清水冲 洗 后 风干。A.3.2.2.4 计数 将制备 好的抹 片在 显微镜 油镜下 随机观 察200 个以 上 的精子（分左、右 两个区），计 数头部 畸形 精子数取两 个 片区 的平 均值。两 个 片区 变异 系数 20%，若20%重新 制片。A.3.2.3 尾部畸 形精 子数 A.3.2.3.1 将福尔 马林-缓 冲液 注入1 mL 玻 璃管，置37 恒温 箱中备 用。A.3.2.3.2 向装有 福尔 马林-缓 冲液 的 玻璃管 中注 入 2 滴3 滴 原精液 充分

21、 混 匀。A.3.2.3.3 取一滴 混 匀 后的 精液 置于 载玻片 上，加上 盖玻 片静 置3 min 5 min。A.3.2.3.4 将制备 好的 抹片 在显 微镜 油镜下 随机 观 察 200 个以 上的精 子（分 左、右 两个 区），计数 尾部畸形精 子数 取两 个片 区的 平均值。两 个片 区变 异系 数20%，若20%重 新制 片。A.3.3 计算 精子畸 形率 按公 式（A.4）计算：1001 sAA(A.4)式中：A 精子 畸形 率,%；A1 畸形 精子 数，单位 为个；s 精子 总数，单 位为 个。DB 6103/T 33 2022 8 B B 附录B（规范 性）奶山羊 精

22、液 分析 仪检 测方 法 B.1 仪器、试剂 电脑、显 微镜、电 子摄 像头、精 子分 析软 件、移液 器、载玻片、盖玻 片或 标准 精 子计数 板、稀 释液。B.2 方法 B.2.1 送检 原 精液 送入 精液 处理 室后，15 min 内 完成 检测。B.2.2 设置参 数 打开电 脑，启动 精子 分析 软件，在显 示屏 中选 择测 试参数，并 进行 设置。B.2.3 精液稀 释 吸取一 定量 原精 液和 稀释 液，按 精子 分析 软件 说明 书的比 例在 试管 中混 匀，记录稀 释比 例。B.2.4 注入精 液 将 载玻片、盖玻 片或精 子计 数板，放在37 恒温 台上 预热。用移液 器

23、吸取3 L 5 L 稀释后 的精液，放 在标 准精 子计 数板 凹槽边 缘上，稀 释后 的精 液自动 渗入 计数 室；或将 稀释后 的精 液吸 取3 L 5 L放在37 载 玻片 上，盖 上37 的盖 玻片。稀 释后 的精液 刚加 入，精液 或玻 片会有 移动，待 其静 止 后，放在恒 温台 上保 温。B.2.5 微调显 微镜 调整显 微镜 焦距，避 开玻 片划痕，直 到视 野中 精液 样品清 晰。B.2.6 调节光 亮度 电脑显 示屏 上精 子头 部出 现蓝色、尾 部出 现红 色即 可。B.2.7 精液分 析 按照电 脑操 作步 骤提 示，分析精 子活 力和 密度。B.2.8 输出结 果 分析检 测结 束，按电 脑提 示打印 检测 报告。DB 6103/T 33 2022 9 C C 附录C（规范 性）奶山羊 精液 品质 鉴定 登记 表 基本信息 感官检测 实验室检测 结果判定 检测员 场户名称 采精时间 送检时间 品种 羊只耳号 采精员 采精量(mL)颜色 云雾状 气味 pH 杂质 稀释液名称 稀释倍数 精子密度 前进运动精子数 精子活力 精子活率 精子畸形率 合格 不合格 DB 6103/T 33 2022 10