DB21 T 3561-2021 小叶白蜡组织培养技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.01 CCS B 60 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3561 2021 小叶白蜡 组织培养 技术规程 Technical regulation for tissue culture of Fraxinus bungeana 2021 - 12 - 30 发布 2022 - 01 - 30 实施 辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB21/T 3561 2021 I 目 次 1 范围 . 1 2 规范 性引 用文 件 . 1 3 术语 和定 义 . 1 4 培养 基制 备 . 1 5 无菌 体系 建立 . 1 6 培养 条件 . 2 7 继代

2、 培养 . 2 8 增殖 培养 . 2 9 生根 培养 . 2 10 炼苗 . 3 11 驯 化移 栽 . 3 12 苗 期管 理 . 3 13 定植 . 3 14 技 术档 案管 理 . 3 附录A （资 料性 ） 小 叶白 蜡生物 学特 性、 生态 学特 性及用 途 . 4 DB21/T 3561 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1-2020 标准 化工作 导则 第1部 分：标 准化文 件的 结构和 起草规 则给 出的 规 则编写 。 本文件 由辽 宁省 林业 和草 原局提 出并 归口 管理 。 本文件 起草 单位 ： 辽 宁生 态工程 职业 学院 。 本文件 主要 起草

3、 人 ： 沙 学 平、 陈清 霖 、 李 国侠 、 张 凌梅 、 沙 学仁 、 岳彦 桥 、 张录华 、 张可 教 、 穆 怡 陶、 金 星、 朱瑞 、 胡 振全 、 冯颖、 吴欣 然、 孙德 新、 杨晓铭 、 杨 丹、 高明 娟、 傅海英 、 刘 姗姗 、 陈 丽媛 、 宋丹 、 徐 绍海 、 赵晓 敏、 荆吉国 、 汤铭 阳 、 谭 洋、 杨艳凤 、 刘长 霞 、 张 薇、 赵霜 、 程 彦博 、 李 智 尧 、 薛 丹、张 姣美 、单 兴宇 、陈 青云。 本文件 发布 实施 后， 任何 单 位和个 人如 有问 题和 意见 建议， 均可 以通 过来 电和 来 函等方 式进 行反 馈， 我们

4、将 及时 答复 并认 真处 理，根 据实 际情 况依 法进 行评估 及复 审。 归 口 管 理 部 门 通 讯 地 址 ： 辽 宁 省 林 业 和 草 原 局 （ 沈 阳 市 和 平 区 太 原 北 街2 号 ） ， 联 系 电 话 ： 024-23448927 。 文 件 起 草 单 位 通 讯 地 址 ： 辽 宁 生 态 工 程 职 业 学 院 （ 沈 阳 市 苏 家 屯 区 枫 杨 路186 号 ） ， 联 系 电 话 ： 024-89814005 。DB21/T 3561 2021 1 小 叶白蜡 组织培养 技术规 程 1 范围 本文件 规定 了 小 叶白 蜡（Fraxinus bun

5、geana DC. ） 组 织培养 技术 的 培 养基 制备 、 无菌 体系 建立 、培 养条件 、 初代 培养 、 继代 培养 、 增 殖培 养 、 生 根培 养 、 炼苗 、 驯化 移栽 、 苗 期管理 、 定植 、 技术 档 案 管 理等技 术内 容。 本文件 适用 于辽 宁省 范围 内小叶 白蜡 的 组 织培 养 育 苗。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （ 包 括所有

6、的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6001 育 苗技 术规 程 LY/T 1882 林 木组 织培 养 技术规 程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 3.1 小叶白 蜡 fraxinus bungeana DC. 又名小 叶花 曲柳 、 小 叶梣 ， 属木 犀科 （Oleaceae ） 白 蜡树属 （Fraxinus ） 落叶 小 乔木或 灌木 。 其 生 物 学特性 、生 态学 特性 及用 途参见 附 录 A 。 4 培养基 制备 4.1 培 养基 配制 、灭 菌及 保存 按照LY/T 1882 的 规定 执 行。 4.2 培 养基 选择 诱导培 养基

7、 ：WPM+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂 ； 继 代增 殖培养 基：WPM+0.5 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂 ； 生根 培养基 ： WPM+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/LNAA+20 g/L 蔗糖+6 g/L 琼脂 。 pH5.65.8 。 5 无菌体 系建 立 DB21/T 3561 2021 2 将 种子 灭菌 后接 种在 诱 导培养 基上 启动 培养 ，待 种子萌 发真 叶长 出后 ，再 继续进 行继 代增 殖培 养。 5.1 种 子选 取与 采集 于秋季 种子 成熟 后， 选 择 连续 3 d 以 上的

8、晴天， 从 生长健 康、 无 病虫 害、 已 结实的 小叶 白蜡 母株 上 选取成 熟饱 满的 种子 ，置 于自封 袋内 带回。 5.2 种 子预 处理 首先将 种子 进行 4 冷藏 处理 24 h72 h 。 取出 后 置于流 水下 冲洗 20 min ， 去除表 面脏 物。 再放 于洗衣 粉水中 浸泡 30 min ，期间 不断刷 洗种 子 ，进 行深层 清理， 并去 掉种翅 。然后 种子置 于流 水下 冲 洗1 h2 h ，用 干净 滤纸 吸干水 分， 移至 超净 工作 台备用 。 5.3 种 子灭 菌处 理 将种子 倒于 无菌 烧杯 中， 用 70 酒 精浸 泡 30 s， 期间 不断

9、 摇晃 烧杯 以保 证每 粒种子 都能 充分 接 触 到酒精 ，之后 用 无菌 水反 复冲 洗 4 次5 次， 再 用 0.1 升 汞分 别灭 菌 8 min12 min ，立 即用 无菌 蒸 馏 水反复 仔细 冲洗 5 次7 次 ， 每次 停 留 1 min2 min ，之后 取出 种子 放在 盛有 无菌滤 纸的 接种 盘上 ，吸 干水分 备用 。 5.4 初 代培 养 将 无菌 接种 盘中 已吸 干水 分的种 子 用 无菌 手术 刀和 镊子去 掉外 种皮 ，接 种于 诱导培 养基 上， 5 d 后外植 体开 始萌 动， 表现 为在种 子的 下胚 轴露 出白 色胚根 ， 叶 片颜 色健 康，

10、 大小正 常， 种子 萌 发 率 高 达 91%， 可以 快速 获得 无菌 苗 。 6 培养条 件 培养室 内温 度 2 52 ， 湿度 40%50% ，光 照强 度2000 Lx3000 Lx ， 光周 期12 h16 h ，培 养周 期6 周8 周 。 7 继代培 养 将已萌 发的 无菌 苗培养2 周3周 后， 转接 种到 继代 培 养基上 进行 继代 培养 ，每 个培养 瓶内 接种2 株 3株 ，并 分布 均匀 。 8 增殖培 养 当无 菌苗 长到 苗高 为3 cm5 cm时 ，将 无菌 苗剪接 成2 个3 个带 芽茎 段 转 接到 新 鲜的 培养 基上 继续 培养， 增殖 培养 周期

11、为20 d30 d。 9 生根培 养 DB21/T 3561 2021 3 当 增 殖培 养获 得一 定数 量无 菌 苗后 ，选 取生 长健 壮的 无 菌苗 转接 入生 根培 养基 上 进行 生根 培养， 培养2 周后 可见 有根 长出 ，4周后 平均 生根 条数 5条 。 10 炼苗 生 根后2周3 周 ，选 取 根长1.5 cm2.5 cm 、须 根 不少于3条 的试 管苗 ，将 其 放置温 室自 然散 射光 下， 打开培 养瓶 盖炼苗2 d3 d ，控制 温度 在18 28 。 11 驯化移 栽 炼 苗 后， 从培 养瓶 中取 出试 管 苗， 用流 水冲 洗掉 粘附 于 根部 的培 养基

12、 ，放 入准 备 好的 托盘 中，用 纱布盖 好，待 用。 以草炭 土、蛭 石配比 为1：1混合 作为移 栽基质 ，并 加入0.5 g/L的 多菌灵 搅拌 均匀 ， 然后装 入穴 盘中 ， 移入 试 管苗 ， 扶正， 使根 系尽 量舒 展， 用 基质 将根 埋好 并压 紧。 每 天用 细雾 喷壶 喷水 ， 使环境 湿度保 持在90%左右，安装 遮阴网 进行 遮阴处 理 。经 过30多 天的 驯化， 当苗木 表现为 叶色 深绿 ， 叶片增 大， 有新 叶长 出， 根毛增 多， 可移 栽 至 营养 钵。 12 苗期管 理 12.1 水肥 管理 移栽 后， 在遮 荫且 通风 条 件下培 养4 d5

13、d， 每天 向 叶面喷 水 1 次，1 周 后， 撤掉遮 荫， 并注 意通 风。夏 季施 氮 肥2-3 次。 12.2 病虫 害防 治 移栽后 经常 检查 新叶 生长 情况。 若发 生叶 部病 害， 可用 80% 代 森锰 锌可 湿性 粉剂500 倍800 倍液 喷施苗 木1 次2 次。 13 定植 当 年秋 季或 翌年 春季 移栽至 圃地 。 14 技术档 案管 理 每批驯 化移 栽的 苗木 都要 配有标 签， 建立 相应 育苗 技术管 理档 案， 具 体 按照GB/T 6001执行 。 DB21/T 3561 2021 4 附 录 A （资料 性） 小叶白 蜡生 物学 特性 、生 态学特

14、性及 用途 A.1 生 物学 特性 树 高 5m 。 树 皮暗 灰色， 浅 裂。 冬 芽卵 圆形， 近黑 色 ， 密被 褐色 短绒 毛。 奇 数 羽状复 叶对 生， 小叶5 片（3 片7 片 ） ， 菱 状卵 形或卵 圆形 ， 边缘 具钝 锯 齿， 近基 部全 缘 ， 两 面无 毛。 花杂 性 ， 圆 锥花 序 生 于 当年生 小枝 顶端 及叶 腋， 与叶同 时开 放或 后于 叶开 放； 花 瓣 4 片， 白色 带黄 绿色。 翅果 倒卵 状 长 圆 形 或 倒披针 形， 顶端 钝或 微凹 。 A.2 生 态学 特性 及用 途 主要在 温带 地区 分布 ， 辽 宁省 产 于凌 源、 喀左、 绥

15、中、 建 平、 北 票、 葫芦 岛 和朝阳 等地 区 。 其树 干 笔直枝 叶茂 盛， 树形 优美 ， 为速 生树 种， 花朵 在 5 月盛开 ， 盛 开时 为白 色， 花朵虽 然不 大但 是 较 为 密 集 紧凑， 组合 而成 的 圆 锥形 花序极 具观 赏价 值， 是园 林绿化 的优 良树 种， 常被 用于庭 院绿 化、 公 园 、 行 道 树、 道 路绿 化、 小区 主干 道、 农 田防 护林 等。 耐寒 耐旱耐 盐碱 ， 喜 光， 不耐 荫， 耐 干燥 瘠薄 土 壤 ， 不 耐 湿涝， 抗逆 性较 强， 管理 简单粗 放。 树皮 用作 中药 “秦皮 ” ， 有消 炎解 热， 收敛止 泻的 功能 ； 种 子 可 榨 油制肥 皂。 DB21/T 3561 2021 5