CNS 15091-19-2007 Method of test for deep sea water - Determination of coliform《深层海水检验法－大肠杆菌群之测定》.pdf

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1、1 印月966月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 71.040.40 N7001-1915091-19經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 966月26日 月日 (共2頁)深層海水檢驗法大腸桿菌群之測定 Method of test for deep sea water Determination of coliform 1. 適用範圍：本標準規定深層海水中大腸桿菌群之檢驗。 2. 檢驗方法：檢驗大腸桿菌群常用之方法，是在定溫下將樣本培養在含有乳糖的Endo培養基上一段時間後，如產生具紅色色系金屬光澤的菌落數即為大腸桿菌群。 3. 器材及儀器 3.1

2、 採樣容器：50 mL無菌有蓋之塑膠製離心試管。 3.2 量筒及燒杯：50 mL量筒及1000 mL燒杯各一個。 3.3 培養皿塗抹棒：硼矽玻璃製，需經過消毒。 3.4 培養皿：硼矽玻璃製或可拋棄式塑膠製培養皿。其大小以6015 mm、5012 mm或其他適當大小者。 3.5 培養箱：溫度能保持在(351)者。 3.6 無菌濾紙：市售直徑47 mm、孔徑0.2 m之混合纖維過濾膜(Mixed Cellulose Ester)。 3.7 高溫滅菌裝置。 3.8 加熱板：可調溫度，並附磁石攪拌功能者。 3.9 天平：能精稱至0.001 g者。 3.10 過濾幫浦及過濾器材。 4. 採樣與保存 4.

3、1 將樣水直接裝入無菌袋或是無菌試管後隨即放置於4 的冰箱中保存。 4.2 水樣應於採樣後24小時內完成檢測並置入培養箱中培養。 5. 培養基：市售之LES Endo agar或m-Endo broth培養基粉末。其製作方法如下 5.1 將48 g培養基粉末（依使用之藥品廠牌建議方式配製）溶於含20 mL酒精(95 %，v/v)之1000 mL蒸餾水中。 5.2 將此培養基溶液在加熱板上煮沸至完全溶解成透明紫色，此培養基不可高溫高壓滅菌。 5.3 將稍微冷卻但尚未凝固之培養基分裝5 mL至直徑60 mm的培養皿中，置於室溫下等其凝固後，將之存放在210 的黑暗環境中。 5.4 培養基的使用以不

4、超過兩週為限。 6. 分析步驟 6.1 取定量之樣本(50 mL)過濾於直徑47 mm、孔徑0.2 m之濾膜上。過濾壓力應小於100 mmHg。 6.2 將濾膜平貼於培養基上。 2 CNS 15091-19, N 7001-19 6.3 蓋上培養皿蓋子，放入35的培養箱內，培養24小時。 6.4 將培養後之培養皿，以目視方式計數培養皿濾紙上所呈現之具紅色系金屬光澤的光點(CFU; Colony Forming Units)，並記錄之。 7. 大腸桿菌群(coliform)數量計算公式 100VnmL) (CFU/100 coliform =n：培養皿上計數到之紅色色系金屬光澤之菌落數。 V：樣

5、本過濾於濾紙上之水樣體積(50 mL)。 8. 品質管制 8.1 微生物採樣人員及檢測人員應具備微生物基本訓練及知識。 8.2 進行微生物檢測時，所用的盛裝器具均應經滅菌處理。 8.3 應記錄所有水樣的原始數據，以備查核之用。 8.4 每個水樣需至少進行三重複。 8.5 實驗均在無菌平台上進行。 8.6 檢測紀錄須註明採樣時間、培養起始及終了時間、培養基名稱、培養溫度及各結果的數據等相關資料。 8.7 使用過後器皿於正常棄置前之處理方法(可依以下任一方式執行) 8.7.1 以滅菌釜滅菌。 8.7.2 將使用過之培養瓶、培養皿置於大型鍋內，加滿水(須蓋過器皿)加熱沸騰45分鐘。 8.7.3 在每一培養皿中倒入5 mL(約一茶匙)漂白劑，至少放置5分鐘後，置於密封袋內丟棄。 備考1. 大腸桿菌群是鳥類或是哺乳動物腸管內之常見菌，它隨著糞便排出而散播，但由於大腸桿菌群在高鹽海水狀況下很難存活，因此在自然海洋水體中均無法被檢測出有大腸桿菌群存在。 2. 深層海水泛指位於海平面200公尺以下之海水。大腸桿菌群一般無法在此海水中被檢測出，本方法係作為污染指標檢測。