CNS 14887-2005 Method of test for Flumequine Nalidixic acid and Oxolinic acid in feeds《饲料中氟灭菌、纳利得酸及欧索林酸之检验方法》.pdf

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1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 65.120 N419714887經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 1 月 10 日 年月日 (共 2 頁 )飼料中氟滅菌、納利得酸及歐索林酸之檢驗方法 Method of test for Flumequine, Nalidixic acid and Oxolinic acid in feeds 1. 適用範圍：本標準規定飼料中氟滅菌（ Flumequine）、納利得酸（ Nalidixic acid）及歐索林酸（ Oxolinic acid）之檢驗方法。 2.

2、 原理：飼料中氟滅菌、納利得酸及歐索林酸以 0.3 偏磷酸及乙腈（ 1： 10, v/v）之溶液萃取後，以正己烷去油脂，並經 C18過濾層析匣純化後，用高效液相層析法(high performance liquid chromatography, HPLC)測定。 3. 裝置 3.1 高效液相層析儀 3.1.1 檢測器：具有激發波長（ Ex） 327 nm，放射波長（ Em） 367 nm 之螢光檢測器。 3.1.2 層析管： SB-C8， 5 m 或同級品。 3.2 離心機 (Centrifuge) 3.3 振盪器 (Shaker) 3.4 減壓濃縮裝置 (Rotary evaporator

3、) 3.5 真空固相萃取裝置 (Solid phase extraction vacuum manifold)及 C18過濾層析匣 4. 試藥：乙腈 (acetonitrile)、甲醇 (methanol)、 85 % 磷酸（ ortho-phosphoric acid 85 %）及三乙基胺（ triethylamine, TEA）均採用液相層析級，氫氧化鈉 (NaOH)、磷酸二氫鈉 (NaH2PO4)及偏磷酸 (metaphosphoric acid)均採用試藥特級，氟滅菌、納利得酸及歐索林酸標準品。 5. 溶液之製備 5.1 標準溶液之製備：精確秤取氟滅菌、納 利得酸及歐索林酸於褐色定量瓶

4、中，以0.01 N 氫氧化鈉及甲醇（ 8： 2）溶解並定容，配製成 1000 g/mL，作為標準原液，使用時再量取上述各標準原液置於容量瓶中，以移動相稀釋，供作標準溶液。 5.2 0.05 M 磷酸二氫鈉緩衝溶液之製備：秤取 6.9 g 磷酸二氫鈉，加 950 mL 水溶解，以磷酸調整 pH 值至 2.5，再加水至 1000 mL。 6. 檢液之製備 6.1 萃取：秤取 5.0 g 飼料樣品，加入 25 mL 之 0.3 偏磷酸及乙腈（ 1： 10, v/v），振盪 10 分鐘，以 3000 rpm 離心 10 分鐘，其殘渣再重複萃取一次，合併二次上清液約 50 mL 移入褐色分液漏斗，加入

5、50 mL 乙腈飽和之正己烷，振盪 10分鐘，靜置 30 分鐘。乙腈層移入濃縮瓶中，於 40 水浴減壓濃縮至乾，殘留物以 10 mL 水溶解，供作淨化用。 6.2 淨化：取第 6.1 節之供淨化用溶液，注入先以 10 mL 甲醇及 10 mL 去離子水潤洗之 C18過濾層析匣，原濃縮瓶以 1 mL 之 10 甲醇溶液清洗，亦注入 C18 2 CNS 14887, N 4197 過濾層析匣，再以 5 mL 甲醇及 0.05 M 磷酸二氫鈉緩衝溶液（ 7： 3, v/v）沖提，收集沖提液，以氮氣吹乾，殘留物以移動相定容 1 mL，並經五倍稀釋後，供作檢液。 7. 回收率測定：取 100 ppm 之

6、氟滅菌、納利得酸及歐索林酸加入 5.0 g 空白飼料各 100及 200 L 以構成 2 及 4 ppm；另以 1000 ppm 加入 5.0 g 空白飼料各 100 及 500 L以構成 20 及 100 ppm 兩種濃度，依序進行第 6.1 節及第 6.2 節之步驟，扣除該飼料原有背景值，比對標準曲線計算飼料加藥回收率。 8. 鑑別試驗及含量測定：精確量取 10 L 之檢液及標準溶液，分別注入高效液相層析儀。 8.1 高效液相層析儀分析參考條件 層析管： SB-C8， 5 m 或同級品。 螢光檢測器：激發波長 327 nm，放射波長 367 nm。 移動相：甲醇、乙腈及含 3 mL TEA

7、 及 1.8 mL 磷酸之 1000 mL 去離子蒸餾水（ 10： 25:65, v/v/v）。 流速： 1.0 mL/min。 8.2 計算 依下列計算式求出飼料樣品中各動物用藥之含量 (ppm)。 檢體中各動物用藥之含量 (ppm) CVM稀釋倍數回收率 C：由標準曲線求得檢液中各動物用藥之濃度 (g /mL) V：飼料樣品經淨化後定容之體積 (mL) M：取樣分析檢體之重量 (g) 9. 標準曲線之製作：將氟滅菌、歐索林酸及納利得酸之標準品使濃度為 1.0 g/mL、2.0 g/mL、 5.0 g/mL、 10.0 g/mL 及 20.0 g/mL，取 2 L 注入 HPLC，所得面積製出標準曲線。 備考：本檢驗方法之最低檢出限量為 2 ppm。