CNS 14460-1-2003 Method of test for veterinary drug residues in food－Test of Chloramphenicol（I）《食品中动物用药残留量检验方法－氯霉素之检验(Ⅰ)》.pdf

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1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 67.100.1 N6336-114460-1經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 89 年 7 月 29 日 92 年 11 月 18 日 (共 3 頁 )食品中動物用藥殘留量檢驗方法 氯黴素之檢驗（） Method of test for veterinary drug residues in food Test of Chloramphenicol（ I） 1. 適用範圍：本標準規定禽畜肉、內臟及其製品中氯黴素（ Chloramphenicol）之檢驗。 2. 檢驗方法：

2、高效液相層析法（ High performance liquid chromatography， HPLC）。 2.1 裝置 2.1.1 高效液相層析儀 2.1.1.1 偵檢器：具有 278 nm 波長紫外光之偵檢器。 2.1.1.2 層析管柱： ODS， 5 m ，內徑 4.0 mm25 cm。 2.1.2 攪拌均質器（ Blender）。 2.1.3 震盪器（ Vortex mixer）。 2.1.4 減壓濃縮裝置（ Rotary evaporator）。 2.1.5 離心機（ Centrifuge）。 2.1.6 氮氣蒸發濃縮裝置（ Nitrogen evaporator）。 2.1.7

3、 真空固相萃取裝置（ Solid phase extraction vacuum manifold）。 2.2 試藥：正己烷、乙酸乙酯採用殘量級，甲醇、乙 採用液相層析級，氯化鈉採試藥級，氯黴素對照用標準品。 2.3 器具及材料 2.3.1 離心瓶： 50 mL。 2.3.2 濃縮瓶： 250 mL。 2.3.3 固相萃取層析匣： C18， 500 mg。 2.3.4 試管： 5 mL、 15 mL。 2.3.5 濾膜：孔徑 0.45 m ， Polyvinylidene difluoride 材質。 2.4 移動相溶液之調製 2.4.1 去離子水與乙 以 75： 25（ v/v）之比例混合均

4、勻後以濾膜過濾，取濾液作為豬肉檢體分析之移動相溶液。 2.4.2 去離子水與乙 以 82： 18（ v/v）之比例混合均勻後以濾膜過濾，取濾液作為豬肝檢體分析之移動相溶液。 2.5 標準溶液之調製：稱取氯黴素對照用標準品約 100 mg，精確稱定，以甲醇溶解並定容至 100 mL，作為標準原液，臨用時再以去離子水稀釋成 0.05 1 g /mL，供作標準溶液。 2.6 檢液之調製 2 CNS 14460-1, N 6336-1 2.6.1 萃取：檢體細切，以均質機均質 後，取豬肉或豬肝 5 g，精確稱定，置於50 mL 離心瓶中，加入乙酸乙酯 30 mL，震盪 1 分鐘，再以 3500 rpm

5、 離心5 分鐘，將上層液倒入 250 mL 濃縮瓶，重複萃取步驟兩次，合併上層液，加入 4 %氯化鈉水溶液 4 mL，經減壓濃縮去除乙酸乙酯，將剩餘氯化鈉水溶液移入 50 mL 離心瓶中，另各以 4%氯化鈉水溶液 2 mL 溶洗濃縮瓶兩次並併入氯化鈉水溶液，再分別以正己烷 10 mL 洗濃縮瓶兩次並併入氯化鈉水溶液，震盪 30 秒，以 2000 rpm 離心 3 分鐘，棄上層液。豬肉檢體之下層液移入 15 mL 試管中供作淨化用；豬肝檢體之下層液再以乙酸乙酯 30 mL萃 取，震 盪 30 秒，以 2000 rpm 離心 3 分鐘，將上層液倒入 250 mL 濃縮瓶，重複萃取步驟兩次，合併上層

6、液，加入 4%氯化鈉水溶液 4 mL，經減壓濃縮去除乙酸乙酯，將剩餘氯化鈉水溶液移入 15 mL 離心瓶中，另各以 4 %氯化鈉水溶液 2 mL 溶洗濃縮瓶兩次並併入氯化鈉水溶液供作淨化用。 2.6.2 淨化：取第 2.6.1 節氯化鈉水溶液，注入先以甲醇 3 mL 再以去離子水 3 mL潤洗之 C18固相萃取層析匣，調整真空固相萃取裝置流速至每秒一滴（每滴體積約 0.04 mL），棄流出液。豬肉檢體直接以 60%甲醇水溶液 3 mL 沖提；豬肝檢體則依序再以去離子水 1 mL 及 30%甲醇水溶液 3 mL 流洗，棄洗液，然後以 60%甲醇水溶液 3 mL 沖提，並精確丟棄前 0.5 mL，

7、收集隨後之 1 mL 沖提液。沖提液於 45水浴氮氣濃縮並定容至 1 mL 供作檢液。 2.7 鑑別試驗及含量測定：精確量取適量之檢液及標準溶液，分別注入高效液相層析儀中，參照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之，並另以標準曲線求出檢體中氯黴素之含量（ ppm）： 檢體中氯黴素含量（ ppm） =MVCC：由標準曲線求得檢液中氯黴素之濃度（ g /mL） V：檢體最後經淨化定容之體積（ mL） M：取樣分析檢體之重量（ g） 高效液相層析儀測定參考條件 層析管柱： ODS， 5 m ，內徑 4 mm25 cm。 紫外光偵檢器：波長 278 nm。 移動相溶液：依第

8、 2.4 節所調製之溶液。 移動相流速： 1.0 mL/min。 註 1. 本檢驗方法之最低檢出限量為 0.01 ppm。 2. 不同食品基質是否影響檢驗結果，應自行檢討。 3 CNS 14460-1, N 6336-1 參考標準： 1. Kijak,P. J.1994. Confirmation of Chloramphenicol Residues in Bovine Milk by Gas Chromatography /Mass Spectrometry. J. AOAC Int. 77(1)： 34 40. 2. Pfenning, A. P., Madson, M. R., Roy

9、bal, J. E., Turnipseed, S. B., Gonzales, S. B., Gonzales, S. A., Hurlbut, J. A. and Salmon, G. D. 1998. Simultaneous Determination of Chloramphenicol,Florfenicol, and Thiamphenicol Residues in Milk by Gas Chromatography with Electron Capture Detection. J. AOAC Int. 81(4)： 714 720. 3. Epstein, R. L.,

10、 Henry, C. H., Holland, K. P., and Dreas, J. 1994. International Validation Study for the Determination of Chloramphenicol in Bovine Muscle. J. AOAC Int. 77(3)： 570 576. 4. Sanders, P., Guillot, P., Dagorn, M., and Delmas, J. M. 1991. Liquid Chromatographic Determination of Chloramphenicol in Calf Tissues： Studies of Stability in Muscle, Kidney, and Liver. J. AOAC Int. 74(3)： 483 486. 5. Bories, G. S. F., Peleran, J. C., and Wal, J. M. 1983. Liquid Chromatographic Determination and Mass Spectrometric Confirmation of Chloramphenicol Residues in Animal Tissues. J. AOAC Int. 66(6)： 1521 1526.