GB T 15477-1995 三碘甲腺原氨酸、甲状腺素放射免疫分析试剂盒.pdf

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1、UDC 621. 039. 8 F 54 华共，、要LGB/T 15477-1995 0盒Triiodothyronine, thyroxine radioimmunoassay kit 1995-01-27发布1995-10-01实施, 国第毛主是才注监督局发布一中华人民共和国国家标准三确甲腺原氨酸、甲状腺素放射免疫分析试jl!J盒Triiodothyronine, thyroxine radioimmunoassay kit 主题内容与适用范围GB/T 15477-1995 本标准规定了三峡甲腺原氨酸（T，）、甲状腺素（T放射免疫分析试剂盒的技术条件。本标准适用于聚乙二醇（PEG）为分离剂

2、的T，、T，放射免疫分析试开rj盒。采用其它分离方法的T,T，放射免疫分析试剂盒也可参照使用。2 引用标准GB 11806 EJ/T 804 3 术语放射性物质安全运输规定放射性同位素产品代号3, 1 放射免疫分析试剂盒radioimmunoassaykit 由放射性示踪物、参照物（标准品）、结合试剂及分离剂等有关材料组装在一起，按照其操作说明，利用抗原抗体特异性结合反应，在体外测定某一特定物质量，并能达到定精确度的试剂组合3.2 非特异结合率nonspecific binding percent(NSB) 放射免疫分析中，不加抗体时，标记抗原与其他试剂的结合的放射性计数率与加入的总放射性计数

3、率的比值，以百分数表示。3,3最大结合率maximumbinding percent阻。放射免疫分析中，在不加标准物或被测定物的条件下，NP零剂量时，标记抗原与抗体结合的放射性计数率与加入的总放射性计数率的比值，以百分数表示。又称零标准管结合率。3, 4 剂量反应曲线dose-responsecurve 标记抗原和非标记抗原与抗体结合数量之间的函数关系图，俗称标准曲线。3. 5批内变异系数withinassay variation 在一次测定中，经同一样品的多次测定而确定的变异系数。3.6批间变异系数betweenassay variation 在多次测定中，经同一样品的多次测定而确定的变异系

4、数3. 7 回收率recovery 在放射免疫分析中，测得的被测物的量与加入的被测物的已知量之比。3.8标准品standard 系指放射免疫分析中，用于度量被测物的参照物。该参照物一般与被测物有相同的化学结构和免疫活性，且性能稳定。3.9质量控制血清quality control serum 国家技术监督局1995-01-27批准1995-10-01实施1 GB/T 15477-1995 用来评价和检定测定试剂或试剂盒的血清。4 产品代号及试剂盒的组成4. 1 产品代号根据EJ/T804的规定编写产品的代号；T，放射免疫试剂盒产品代号RIAl1251011，T，的放射免疫试剂盒产品代号RIAl

5、12510214.2 试剂盒的组成5 a. b. c. d. ！标记抗原，标准品p抗血清；分离剂（PEG)o技术要求5. 1 灵敏度T，的浓度不低于0.3 nmol/L,T，的浓度不低于6.0 nmol/L。5.2 非特异结合率不大于10%其官分离方法不大于5%。5. 3 最大结合率应在40%65%之间5.4 精密度用样品测定值的变异系数表示。批内变异系数不大于10%(n;?l0），批间变异系数不大于15% (n;? 10）。5. 5准确度用质量控制血清的测定结果表示。在一次测定中，低、中、高三个不同剂量的质量控制血清的测定结果，至少有两个在允许范围G士ZSD）内。5.s 回收率T，应在95%

6、105%之间，T，应在97%102%之间。5. 7 相关系数r和有效剂量值剂量反应曲线的相关系数r的绝对值应不小于0.99。有效剂量EDZ5,ED50和ED75值的变化应在相应的允许范围内。5-8测定范围T，的浓度应在013nmol/L，飞的浓度应在0309nmol/L0 5. 9有效期在28条件下贮存，从出厂日期计算有效期不少于35d0 6 试验方法6. 1 灵敏度的测定按附录A（补充件）和附录B（补充件）的实验程序操作。以B/T值为纵坐标，以T,T，的浓度为横坐标，在直角坐标纸上作剂量反应曲线。求出零标准管结合率（B，）的标准差SD(n;?lO）。以零标准管结合率的均值减去！SD所得结合率

7、的相应剂量值，即为试剂盒的灵敏度。6. 2 非特异结合率（NSB）的测定取两支放免试管，分别加入与测定样品相同体积的T,T，零标准血清和对应的！标记抗原及与抗血清相同体积的温育液，然后按附录A（补充件）和附录B（补充件）实验程序操作。非特异结合率NSB2 一GB/T 15477 1995 按公式（1）计算。C -C, NSB一一一100%.( 1 ) c, c, 式中zc.一非特异管计数率，c，一一仪器本底计数率；C，总放射性管计数率。6-3最大结合率（B，）的测定按附录A（补充件）和附录B（补充件）实验程序操作，最大结合率B，按公式（2）计算。式中gc，零标准管计数率。6-4 精密度的测定C

8、B一100%C, -C, . ( 2 ) 精密度用质量控制血清或样品测定值的变异系数表示。按附录AC补充件）和附录B（补充件）实验程序操作，变异系数CV按公式（3）计算。SD ., CVT100% x 式中zSD一一次测定T,T，的浓度值的标准偏差，nmol/L;王一n次测定T,T，的浓度的均值（n二三10),nmol/Lo 6-5 准确度的测定按附录A（补充件）和附录BC补充件）实验程序操作，计算质量控制血清测定值的SD。6-6 回收率的测定. ( 3 ) 在已知T,T，浓度的血样中加入一定莹的T，、飞，然后测定血样中总T，、飞浓度。按附录A（补充件）和附录B（补充件）实验程序操作，回收率R

9、按公式（4）计算。R D, ;_ D, % 一一一100%式中：D，血样中测定的总T，、飞的浓度值，nmol/L;D，一血祥中已知T,T，的浓度值，nmol/L;D，一一血样中加入的T,T，的浓度假，nmol儿。6-7剂量反应曲线6. 7. 1 曲线的绘制 ( 4 ) . 按附录A（补充件）和附录B（补充件）实验程序操作。各标准剂量点的放射性结合率B/B。按公式(5）计算。式中sc.各标准剂量点计数率。C. -C一巢，B/B, 一一100%.”（5 ) 。C。C，川以各标准剂量点的放射性结合率为纵坐标，以各相应标准剂量点的浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制剂量反应曲线。6. 7. 2 r、ED

10、值计算由Logit(B/B，）对剂量的对数值作图，通过直线回归处理求出r,ED25、ED50、ED75o以ED25、ED50、ED75的值NP结合率BIB。分别为25%,50%和75%时的对应值）来判断剂量反应曲线的深移及偏衔。7 检验规则7. 1 型式检验3 GB/T 15477 1995 产品投产前及投产后工艺流程的改变和原料交更，均须按本标准技术要求中规定的内容检验。7.2 出厂检验7. 2. 1 全检项目对每批生产的每一个试剂盒都要实行检查，检查内容包括试剂盒组份、包装及标志应符合本标准的规定。7. 2. 2拍检项目试剂盒出厂前由生产单位的质量检验部门进行抽检。拙检项目包括NSB、Bo

11、、剂量反应曲线及质量控制血清测定值应符合本标准的规定。7. 2. 3 拍检方式抽检采取随机取样方式。批量100盒以下抽取I盒，101300盒抽取Z盒，301500盒抽取3盒，501盒以上抽取4盒。如果检验结果有一项不符合本标准的要求，应重新以两倍的数量随机取样进行核验。重新核验的结果，即使只有一项指标不符合本标准所规定的要求，则整批试剂盒判为不合格7.2.4 检验证书检验合格应填写产品合格证书，见附录C（补充件。8 标志、包装、贮存和运输a. 1 标志a. 1. 1 试剂盒封面标志试剂盒封面标志应包括：生产厂家ga. b. c. d. e. r. 产品名称s注册商标$产品代号$产品批号g批准文

12、号gg. 注意事项gh. 有效期。a. 1. 2 试剂标志试剂瓶标志应包括2名称，a. b. 批号；c. 浓度，d. 贮存条件： 失效期。a. 1.3放射性试剂瓶标志放射性试剂瓶标志应包括2名称ga b. c. d. 批号；放射性浓度；测量日期：e. 放射性标志。a.2包装和运输a. 2. 1 包装4 . , 一寸GB/T 15477-1995 5 碎破易不括置包倒应怕容不肉川漏啊泄防轧说、震境环mt的说连串b忧用主现使护阳2品防6产及mw贮有输口应附spa，133：，运B盒须家称号号号围理制序算标项，献证G剂必厂名代文批范原配程计指hF期文保合试制妒刊叫树叫副刊川州附制协盹橄户户叫甜阶存附装

13、输主装包且包2运E包nJR4lMnnuwnku a. b. m. d. . ghijk c. e. f. GB/T 15477-1995 附录AT，放射免疫分析方法（PEG法（补充件）原理Al 人血液中大部分T，与结合蛋白结合，游离部分甚少本方法采用ANS为阻断剂，使结合在结合蛋白上的T，解离出来e解离出来的T，和原有游离T，与加入的12!-T，同有限量的T，抗体在适宜条件下进行竞争性结合反应一部分12!-T，与抗体结合，而另一部分贝tl呈游离状态其游离的量与血样或标准中T，的浓度有关。T，浓度大，则游离的12!T，量就多，反之，T，浓度小，游离的1251-T3量少用聚乙二醇（PEG）作分离剂

14、将抗原抗体复合物沉淀下来，测定其放射性计数率用含T，不同浓度的血清作为标准品，就可以得到有函数关系的剂量反应曲线。从剂量反应曲线上查出被测品样中T，的浓度。仪器及设备A2 一般生物化学实验室仪器设备及计数器、放免试管、微量加祥器、负压泵、离心机和恒温水浴锅等。实验程序A3 a. 打开试剂盒，按说明书要求配制有关试剂待试剂平衡到室温后再使用。b. 取放免试管进行编号。1.2为T管，3,4为NSB管，5-16为标准管，17管后为待il!tl样品管。按表Al操作顺序实验。l T，浓度测定操作顺序表表Al试管组T，标准待测血样1111-T, 抗T，血清温育液PEG T 200 )-2 NSB 50 2

15、00 200 500 37温育60min 3-4 标准50 2口。200 500 5-16 样品50 200 200 500 17 加入PEG后，混匀，离心1520min(l 500，弃去上清液（T管除外。测定T管和各管放射性计数率c. 各管的计数率减去非特异管的计数率，计算出标准管和样品管的B/B，见式Al。以各标准管的B/B，为纵坐标，T，的浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制剂量反应曲线根据待测样品的B趴在剂量反应曲线上查得样品飞的浓度，见图Alo（C、cB/B, 一丁100%( Al ) 式中zG一一各标准剂量点计数率，c，待测样品计数率a6 一GB/T 15477一1995回、80 、

16、70 , 50 40 30 去。EJ罔问12.3 T，放射免疫剂量反应曲线附录T，放射免疫分析方法（PEGi去补充件）B 。因Al原理Bl 甲状腺分泌的激素90%以上是飞，分子量为777，人血清中大部分飞与综合蛋白结合，游离部分甚少本方法采用ANS为阻断剂，使结合在结合蛋白上的T解离出来。解离出来的T，和原有游离飞与加入的1251-T，同有限量的T，抗体在适宜条件下进行竞争性结合反应一部分I-T，与抗体结合，而另一部分则虽游离状态。其游离的量与血样或标准中飞的浓度有关。T，浓度大，则游离的121-T，量就多，反之，T，浓度小，游离的I-T量少。用聚乙二醇（PEG）作分离剂将抗原抗体复合物沉淀下

17、来，测定其放射性计数率由上述计数率与不同浓度的T，标准品得到有函数关系的剂量反应曲线从剂量反应曲线上查出被测样品中飞的浓度仪器及设备B2 一般生物化学实验室仪器设备及计数器、放免试管、微量加样器、负压泵、离心机和恒温水m锅等实验程序B3 打开试剂盒，按说明书要求配制有关试剂。待试剂平衡到室温后再使用a. sol- - - -一-I 1.5 3.1 6.2 T，的浓度，nmol/L7 . GB/T 15477 1995 b. 取放免试管进行编号。1.2为T管，3,4为NSB管；5一16为标准管117管后为待泪1样品管。按表Bl操作顺序实验。l ne T浓度测定操作顺序表表Bl试管组T标准待测血样

18、I-T, 抗T，血清温育液PEG T 2C8 1-2 NSB 50 200 200 500 37C温育45min 3 4 标准so 200 200 500 5 16 样品200 50 200 500 17 加入PEG后，混匀，离心1520min(l 500g），弃去上清液（T管除外）测定T管和各管放射性计数率。各管的计数率减去非特异管的计数率，计算出标准管和样品管的B矶，见式Bl以各标准管的BIB。为纵坐标，T，的浓度为横坐标，在半对数坐标纸上绘制剂量反应曲线。根据待测佯品的BIB。在剂量反应曲线上查得样品飞的浓度，见图Bloc. ) l nu ( . . C,(C ) -c一UB/B, 一亏

19、100%式中zc.一各标准剂量点计数率；c，一一待测样I ?i求90 . 811 70 61 . 50 40 这m句 、. 311 20 ID 309 206 10 51 26 1的浓度，nmol/LT，放射免疫如l址反应曲线图Bl8 、GB/T 15477-1995 附录C放射免疫分析试剂盒检验合格证书（补充件产品检验合格后，应填写检验合格证书。合格证书见表Cl表Cl放射免疫分析试剂盒检验合格证书产品名称批号生产人员标记物放化纯度放射性比度% . kBq/g 标准品批号抗血清批号NSB Bo r ED25 ED50 ED75 检验指标结论检验复核检验单位印章附加说明自本标准由中国核工业总公司

20、提出。本标准由中国原子能科学研究院同位素所负责起草。本标准主要起草人王衍真、李庆恕。、 、每瓶放射性浓度kBq 质量控制血清批号剂量低中高范围峙实测年月日BEhh叮盯户H因。中华人民共和国家标准三碗甲腺原氨酸、甲状腺素放射免疫分析试剂盒GB/T 15477-1995 国,. 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045电话，8522112中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印昏开本BBOX1230 1/16 印张3/4字数17千字1996年4月第一版1996年4月第一次印刷印数11 000 峰书号155066. 1-12283 峰标目28619 L一