GB T 13112-1991 食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法.pdf

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1、 中华人民共和国国家标准 GB/T 13112-91 食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法 Method for determination of sodium cyclamate in foods 1 主题内容与适用范围 本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠的三种测定方法气相色谱法、比色法、薄 层层析法。 本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定; 薄 层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸钠的含量测定，样品中含有 0.1g/kg 环已基氨基磺酸钠即可检出，最低检出量为 3 4 g 环己基氨基磺酸钠。 第一篇 气相色谱法 2 原理 在硫酸介质中环己基氨基

2、磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯( -ONO)， 利用气相色谱法进行定性和定量。 3 试剂 本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯(AR) ，水为蒸馏水。 3.1 正己烷。 3.2 氯化钠。 3.3 层析硅胶（或海砂） 。 3.4 50g/L 亚硝酸钠溶液。 3.5 100g/L 硫酸溶液。 3.5 环己基氨基磺酸钠标准溶液（含环己基氨基磺酸钠98）：精确称取 1.0000g 环己 基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至 100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠 10mg。 4 仪器 4.1 气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。 4.2 旋涡混合器。 4.3 离心机。 4.4 10 L 微量注

3、射器。 4.5 色谱条件 4.5.1 色谱柱：长 2m，内径 3mm,U 形不锈钢柱。 4.5.2 固定相：Chromosorb W AW DMCS80 100 目，涂以 10 SE-30。 4.5.3 测定条件 柱温：80；汽化温度：150；检测温度：150。 流速：氮气 40 mL/min；氢气 30 mL/min；空气 300 mL/min。 5 样品处理 5.1 液体样品：摇匀后直接称取。含二氧化碳的样品先加热除去，含酒精的样品加 40g/L 氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。 5.2 固体样品：凉果、蜜饯类样品将其剪碎制成试样。 6 分析步骤 6.1 试料制备 6.

4、1.1 液体试样：称取 20.0g 试样于 100 mL 带塞比色管，置冰浴中。 6.1.2 固体试样：称取 2.0g 已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至 呈干粉状，经漏斗倒入 100 mL 容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移压容量瓶中， 加水至刻度，不时摇动，1h 后过滤，即得试料，准确吸取 20 mL 于 100 mL 带塞比色管，置 冰浴中。 6.2 测定 6.2.1 标准曲线的制备，准确吸取 1.00 mL 环己基氨基磺酸钠标准溶液于 100 mL 带塞比色 管中，加水 20 mL，置冰浴中，加入 5mL 50g/L 亚硝酸钠溶液， 5mL 100g/L 硫酸溶

5、液, 摇匀, 在冰浴中放置 30 min，并经常摇动，然后准确加入 10 mL 正己烷， 5g 氯化钠，摇匀后置旋 涡混合器上振动 1min（或振摇 80 次） ，待静止分层后吸出己烷层于 10 mL 带塞离心管中进 行离心分离，每毫升已烷提取液相当 1mg 环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样 1 5 L于 气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。 6.2.2 样品管按 6.2.1 自“加入 5mL 50g/L 亚硝酸钠溶液”起依法操作，然后将试料 同样进样 1 5 L，测得响应值，从标准线图中查出相应含量。 7 计算 A 10 1000 10A X = = .(1) m V 1000 mV 式

6、中：X 样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg ； m样品质量, g ； V进样体积，L ； 10正己烷加入量，mL； A测定用试料中环己基氨基硝酸钠的含量，g 。 8 精密度和允许误差 重复测定变异系数7 。 两次平行测定相对允许误差绝对值10，平行测定结果用算术平均值表示，保留二 位小数。 第二篇 比色法 9 原理 在硫胺介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮 化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在 550 nm 波长测其吸光度，与标准比较定量。 10 试剂 10.1 三氯甲烷。 10.2 甲醇。 10.3 透析剂：称取 0.5g 二氯化汞和 12.5g 氯

7、化钠于烧杯中，以 0.01 mol/L 盐酸溶液定容 至 100mL。 10.4 10g/L 亚硝酸钠溶液。 10.5 100g/L 硫酸溶液。 10.6 100g/L 尿素溶液（临用时新配或冰箱保存） 。 10.7 100g/L 盐酸溶液。 10.8 10g/L 磺胺溶液：称取 1g 磺胺溶于 10盐酸溶液中，最后定容至 100 mL。 10 9 1g/L 盐胺萘乙二胺溶液。 10.10 环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取 0.1000g 环己基氨基磺酸钠，加水溶解，最 后定容至 100 mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠 1mg。 临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释 10 倍。此液每毫

8、升含环己基氨基磺酸钠 0.1mg。 11 仪器 11.1 分光光度计。 11.2 旋涡混合器。 11.3 离心机。 11.4 透析纸。 12 试样处理 同第 5 章。 13 分析步骤 13.1 提取 13.1.1 液体试料：称取 10.0g 试料于透析纸中，加 10 mL 透析剂，将析纸口扎紧，放入 盛有 100 mL 水的 200 mL 广口瓶内，加盖，透析 20 24 h 得透析液。 13.1.2 固体试料：准确吸取 10.0mL 经“6.1.2”处理后的试料提取液于透析纸中，以下 操作按“13.1.1”项下进行。 13.2 测定 13.2.1 取 2 支 50 mL 带塞比色管，分别加入

9、 10mL 透析液和 10mL 标准液，于 03 冰浴中， 加入 1mL 10 g/L 亚硝酸钠溶液， 1mL 100g/L 硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置 1h， 取出后加 15 mL 三氯甲烷， 置旋涡混合器上振动 1min， 静置后吸去上层液， 再加 15 mL 水，振动 1min，静止后吸去上层液，加 10 mL 100 g/L 尿素溶液，2mL 100 g/L 盐酸溶液， 再振动 5min，静置后吸去上层液，加 15 mL 水，振动 1min，静置后吸去上层液，分别准确 吸出 5 mL 三氯甲烷于 2 支 25mL 比色管中。另取一支 25mL 比色管加入 5mL 三氯甲烷

10、作参比管。 于各管中加入 15mL 甲醇，1mL 10g/L 磺胺，置冰水中 15min，取出回复常温后加入1mL 1g/L 盐酸萘乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在 15 30下放置 20 30 min，用 1cm 比色杯于 波长 550 nm 处测定吸光度，测得吸光度 A 及 As。 13.2.2 另取 2 支 50 mL 带塞比色管，分别加入 10 mL 水和 10 mL 透析液，除不加 10 g/L亚硝 酸钠外，其他按“13.2.1”项下进行，测得吸光度 Aso 及 Ao。 14 计算 c A-Ao 100+10 1 1000 X = .(2) m As-Aso V 1000 1000 式中

11、：X 样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg ； m样品质量，g ； V透析液用量，mL; c标准管浓度，g/mL； As标准液吸光度; Aso水的吸光度； A试料透析液吸光度； Ao不加亚硝酸钠的试料透析液吸光度。 15 精密度和允许误差 重复测定变异系数10。 两次平行测定相对允许误差绝对值10，平行测定结果用算术平均值表示，保留二 位小数。 第三篇 薄层层析法 16 原理 样品经酸化后，用乙醚提取，将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开，经显 色后，根据薄层板上环己基氨基磺酸的比移值及显色斑点深浅，与标准比较进行定性、概 略定量。 17 试剂 除另有规定外，所用的试剂为分析纯试剂，水

12、为蒸馏水或同等纯度水。 17.1 异丙醇。 17.2 正丁醇。 17.3 石油醚：沸程 30 60。 17.4 乙醚（不含过氧化物） 。 17.5 氢氧化胺。 17.6 无水乙醇。 17.7 氯化钠。 17.8 硫酸钠。 17.9 c(HCl) 6mol/L 盐酸: 取 50 mL，盐酸加到少量水中，再用水稀释至 100mL。 17.10 聚酰胺粉（尼龙-6 ）： 200 目。 17.11 环己基氨基磺酸标准溶液：精密称取 0.0200g 环己基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶 解后移入 10 mL 容量瓶中，并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于 2mg 环己基氨基磺酸，二周 后重新配制（环己基氨基磺酸

13、的熔点：169 170） 。 17.12 展开剂 17.12.1 正丁醇- 浓氨水- 无水乙醇（20 1 1）。 17.12.2 异丙醇- 浓氨水- 无水乙醇（20 1 1）。 17.13 显色剂：称取 0.040g 溴甲酚紫溶于 100mL 50乙醇溶液，用 1.2mL 0.4氢氧化钠 溶液调至 pH8。 18 仪器 18.1 吹风机。 18.2 层析缸。 18.3 玻璃板：5cm 20cm。 18.4 微量注射器：10 L。 18.5 玻璃喷雾器。 19 分析步骤 19.1 样品提取 19.1.1 饮料、果酱：称取 2.5g（ mL）已经混合均匀的样品（汽水需加热去除二氧化碳）, 置于 2

14、5 ml 带塞量筒中，加氯化钠至饱和（约 1g） ，加 0.5mL c(HCl) 6mol/L 盐酸酸化, 用 15、 10 mL 乙醚提取两次，每次振摇 1min，静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无 水硫酸钠滤入 25mL 容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。吸取 10.0 mL 乙醚提取液分两次置于 10 mL 带塞离心管中，在约 40水浴上挥发至干，加入 0.1mL无水 乙醇溶解残渣，备用。 19.1.2 糕点：称液 2.5g 糕点样品，研碎，置于 25 mL 带塞量筒中，用石油醚提取 3 次，每 次 20mL，每次振摇 3min，弃去石油醚，让样品挥干后（在通风橱

15、中不断搅拌样品，以除去 石油醚） ，加入 0.5mL c（HCl ） 6mol/L 盐酸酸化，再加约 1g 氯化钠，以下按 19.1.1 自“ 用 15、 10 mL 乙醚提取 2 次”起依法操作。 19.2 测定 19.2.1 聚酰胺粉板的制备：称取 4g 聚酸胺粉，加 1.0g 可溶性淀粉，加约 14mL 水研磨均匀 合适为止，立即倒入涂布器内制成面积为 5cm 20cm，厚度为 0.3mm 的薄层板 6 块，室温干 燥后，于 80干燥 1h，取出，置于干燥器中保存、备用。 19.2.2 点样：薄层板下端 2cm 的基线上，用微量注射器于板中间点 4L 样品液，两侧各点 2 L、 3 L

16、环己基氨基磺酸标准液。 19.2.3 展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂（17.12.1 或 17.12.2）的展 开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至 10 cm 以上时，取出在空气中挥干，喷 显色剂其斑点成黄色，背景为蓝色。样品中环己基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量 （用 17.12.2 展开剂时, 环己基氨基磺酸的比移值约为 0.47,山梨酸 0.73,苯甲酸 0.61,糖精 0.31）。 20 计算 A 1000 1.12 2.8A V1 X = = .(3) 10 V2 m V2 m1000 25 V1 式中: X 样品中环己基氨基磺酸钠的含量,g/kg 或

17、g/L; A样品点相当于环己基氨基磺酸的质量，mg ； m样品质量，g ； V1加入无水乙醇的体积，mL； V2测定时点样的体积，mL； 10测定时吸取乙醚提取液的体积，mL； 25样品乙醚提取液总体积，mL； 1.121.00 g 环己基氨基磺酸相当环己基氨基磺酸钠的质量，g 。 21 精密度 重复测定变异系数28。 本方法可以同时测定山梨酸，苯甲酸，糖精等成分。 附加说明： 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由广州市卫生防疫站、广东省卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责 起草。 本标准第一、二篇主要起草人张暖民、江月碧、吕澳生、梁立文、刘燕霞。 本标准第三篇主要起草人杨祖英、崔宏、蒋罗章、焦淑婷、易再明。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 中华人民共和国卫生部 1991-06-07 批准 1992-03-01 实施