SN T 1723.2-2006 马铃薯金线虫检疫鉴定方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1723.2-2006 马铃薯金钱虫检在鉴定方法Inspection and identification of gloden potato cyst nematode Globodera rostochiensis (明lo11enweber)Behrans 2006阳01皿26发布2006-08-16实施又雪雪仁JI中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局发布SN/T 1723分为两部分:一一马铃薯白线虫检疫鉴定方法;一一马铃薯金线虫检疫鉴定方法。本部分为SN/T1723的第2部分。自目击本部分的蹄录C是规范性附录，附录A和附录B均为资料性附录。

2、本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位:中国检验检疫科学研究院。SN/T 1723. 2-2006 本部分参加起草单位:中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本部分起草人z葛建军、姜丽、沈培垠、周虹。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1723.2 2006 马铃薯金线虫检疫鉴定方法1 菇围SN/T 1723的本部分规定了进境植物检疫中马铃薯金线虫检疫的基本原则，以及检疫鉴定方法。本部分适用于输华的马铃薯种薯、食用马铃薯、带根、土的茄属植物及其他带根、土的植物，繁殖材料中马铃薯金钱虫的检疫鉴定。2 符号下列符号适用

3、于SN/T1723的本部分。n一一测计的线虫样本数目L一一虫体体长(m或mm)S，-一口针长度(m)Sp-一一交合剌长度m)3 原理马铃薯金钱虫goldenpotato cyst nematode 学名:Globodera rostochiensis (W ollenweber, 1923) Behrans, 1975 异名:H eterodera schachtii rostochiensis W ollen:weber, 1923 Heterodera schachtii solani Zimmermann, 1927 英文名:golden potato cyst nematode; ye

4、llow potato cyst nematode; golden nematode 分类地位z线虫门(Nemata或Nematoda)、垫刃自(Tylenchida)、异皮线虫科(Heteroderidae)、球胞囊线虫属(Globodera)。马铃薯金线虫的侵染循环、传播途径、寄主范围、生物学和形态学特征是其检疫鉴定方法的依据。马铃薯金钱虫的寄主范围、分布、生活史和传播途径参见附录Ao4 仪器、用具及药品4. 1 仪器、用具光学显微镜、解剖镜、恒温箱、漂浮筒、20目网筛、60目网筛、100目网筛、500目网筛、酒精灯、烧杯、1000 mL三角瓶、毛笔、毛刷等。4.2 药品擂精、丁香油、过氧

5、化氢、中性树胶、福尔马林(40%)、冰乙酸、甘油、二三乙薛胶、乳酣油、硫酸镜、蒸馆水等。5 现场检接与抽样5. 1 现场检瘟检查马铃薯种薯、食用马铃薯辛辛块的带土情况，肉眼观察薯块基本不带土壤，则对进境的马铃薯薯块进行随机抽样，带回实验室检验;肉眼观察发现薯块带有土壤，应将带有土壤的所有薯块带回实验室进行检查。王军看带根、土的茄属植物及其他带根、士的植物繁撞材料的带二七情况，收集上述植物繁殖材料和运输工具上可能携带的土壤，连同植物繁殖材料一并带回实验室检查。1 SN/T 1723.2-2006 5.2 抽样5.2. 1 抽样方式棋盘式或五点式随机抽样。抽样时应注意上、中、下层的代表性。5.2.

6、2 抽样比例以品种为单位，按总件数的10%抽样，每件按种薯总数的5%10%抽样。6 实验窒检验6. 1 土壤的收集使用毛尉将马薯等繁殖材料的带内凹表面的土壤;若马铃薯种6. 2. 1 Fenwick-Oostenbrink漂浮法此方法二般用于检验100g以上的泥土将现场采集到的土样铺于干净轻轻压碎，用孔径为3mm 和下筛淋温;漂浮筒内灌满清被淋洗至漂浮筒内;进入下:由光处风干，用于(或用小的圆木棍)将泥土杂的植物组织和粗砂等杂物后备用;将漂浮筒水槽流到下筛(100自)至瓶口处;静置片刻，待镜检。将上述泥土倒人2000mL的工果更佳)后至水深5cm左布鲁;片刻，待三角瓶颈部的水笔网，使所有的胞囊

7、被冲到滤，待滤纸琼干后即可6.2.3 直接过筛分离马铃薯薯块上马将洗涤马铃薯薯杂贯留在20目的粗筛幼虫、雄虫和其他蠕虫漏斗中过滤，待滤纸琼干6.3 镜检飞毛4晾干后的滤纸可在解剖富凹玻片上或装有白色滤纸的小方法参见附录丑。7 马铃薯金钱虫的鉴定特征7. 1 形态特征7. 1. 1 雌虫近球形，具突出的颈，虫体球形部分的角质层具有网状脊，无侧线。口针锥部约为口针长度的中，然后用水喷淋冲洗，使用于收集胞囊线虫的2龄瓶内，一并倒入装有滤纸的中镜检。0号狼毛笔将其挑歪。胞囊的胚阴板击tl作2 -JSN/T 1723.2 2006 50%，有时略弯曲，口针基部球圆形，明显向后倾斜，口针套管向后延伸略占口

8、针长度的75%。排1世孔明显，位于颈基部。民门膜孔略凹陷，阴门横裂状。月工门位于阴门膜孔之外，虹门与阴门间角质层有20个平行脊(见圈1)。c岳司日医三3A一一一幼虫整体;P一一雄虫尾部;。一一雄虫虫体中部侧日一胞囊;I一一雄虫头部和颈部;1一一雄虫整体组回17.1.2 胞囊G昌自HO 近球形具突出的颈，无突出的阴门椎;新胞囊的阴门区可能是完整的，但较老的跑囊标本的部分或全部阴门膜孔丢失，形成1个单环膜孔型Csinglecircular fenestra)阴门膜孔。无阴n桥、下桥及其他残存的虫体腺体结构;元泪状突，但阴门区域可能有一些小而不规则黑色素沉积物。无亚晶层，角质膜与雌虫相似。3 SN/

9、T 1723. 2-2006 7. 1.3 雄虫蠕虫形，犀短、钝圆，热力杀死固定时，虫体弯曲，后部卷曲900180旷。，呈规员则4环纹，侧E区S:4条刻线延伸至尾末端，两条外刻线具网纹但旦内刻线元。头部固、生最缩，其6个7个环纹，头骨架严重骨化。口针发育好，基部球向后倾斜，口针锥部占整个口针长的45%，口针套管向后延伸到70%口针长处。中食道球椭圈形，中间有明显的新月形瓣门，无明显的食道肠瓣状结构。半月体2个环纹长，位于排世孔前2个3个环纹处，半月小体1个环纹长，位于排泄孔后9个12个体环处。单精巢，世殖腔开口小，具升起的唇。交合刺强壮，弓形，末端单指尖状。引带小。7. 1. 4 2龄幼虫蠕虫

10、形，但在卵内折叠成4折，角质庭环纹清晰，倒区刻线4条，偶尔有网格化。头匾，稍微缝缩，4个6个环纹。头骨架严重骨化，前、后头状体分别位于第2或第3个和第6个8个体环处。口针发育好，口针锥部小于口针长的50%，口针基部球略向后倾斜，食道腺体在腹面延伸至排泄孔后35%体长处，排泄孔位于20%体长处，半月体2个体环长，位于排泄孔前1个环纹处，半月小体小于1个体环长，位于排泄孔后S个6个环纹处。尾部逐渐变绵，直至尾端，后部的一半到三分之二为透明尾见圈。7.2 测计值7.2. 1 雌虫(n=25) : L(不包括颈)=520(420640)m，St=22.9m土1.2m，日针基部至背食道腺开口的距离为5.

11、7m土O.9m，头基部宽5.2m土0.7m，头端至中食道球瓣门的距离为73.2m土14.6m，中食道球瓣门至排泄孔的距离为65.2m士20.2m，头端至排泄孔的距离为145.3m 17.4m，中食道球平均直径30m土2.8m，阴门膜孔直径22.4m土2.8m，阴门裂长9.7m士1.9m，虹门至阴门膜孔距离60m土10.1m，缸门至阴门问角质层脊数为21.6个土3.5个。7.2.2 脂囊(n口25): L(不包括颈)=445m土50m，体宽382m土61m，颈长104m土19m，阴门推直径18.8m士2.2m，旺门至阴门盆距离66.5m士10.3m，格氏比值(JII门至阴门盆近缘的距离/阴门盆直

12、径)3.6土0.807.2.3 雄虫=50): L=l 197m士100m，排世孔处体宽28.1m士1.7m，头基部宽11.8m土0.6m，头高6.8m土0.3m，St=25.8m士O9m，口针基部到背食道腺开口的距离为5.3m土0.9m，头端到中食道球瓣门距离98.5m士7.4m，中食道球瓣门至排泄孔的距离为73.8m士9.0m，头端到排泄孔距离172.3m土12.1m，犀长5.4m士1.1m，r世黯腔处体宽13.5m土0.4m，Sp=35.5m士2.8m，引带长10.3m士1.5mo7.2.4 2龄幼虫(n=25) : L口468m土20m，排泄孔处体宽18.3m士0.5m，基部头宽9.9

13、m土0.4m，头高4.6m土O.6m，头端到中食道球瓣门距离69.2m士1.9m，St=21.8m土O.7m，口针基部到食道腺开口的长度为2.6m士0.6m，中食道球瓣门至排世孔距离31.3m土2.3m，头端至排泄孔100.5m土2.4m，尾长43.9m士11.6m，脏门处体宽11.4m士0.6m，透明尾长26.5m 士1.8mo7.3 与相似种的区别马铃薯金线虫与马铃薯白线虫在形态上极为相似，两个种的主要区别见附录Co8 结果判定以胞囊或雌虫的形态学作为该线虫鉴定的主要依据，2龄幼虫和雄成虫作为鉴定的辅助依据。符合上述形态特征和测计值的可鉴定为马铃薯金钱虫。4 明明- SN/T 1723.

14、2-2006 9 样品的保存9. 1 样品保存样品经登记，经手人签字，妥善保存2个月。如发现马铃薯金线虫，该样品至少需保存6个月，以备复验、谈判和仲裁。保存期满后，发现马铃薯金钱虫的，需作销毁处理。9.2 钱。虫标本的保存截获的马铃薯金钱虫的胞囊、雌虫、雄虫和幼虫可制作成标本，永久保存。5 SN/T 1723. 2-2006 附录A资料性附录)玛铃薯金钱虫的寄主范围、分布、生活史和传播途径A.1 马铃薯金钱虫的害虫A.2 马铃薯金钱虫的分布A.3 A.4 玛铃薯金钱虫的传播途径子和番茄。此外，茄属的90种植物及具有不向抗性水平的杂草如s.sarachoides、S.dul 色列(仅在1954和

15、1965年偶巴基斯坦、菲律宾、斯里兰马铃薯金线虫以2龄幼虫在土壤内作短距离的移动，农事操作、农具和交通工具可将农田中的土壤6 / SN/T 1723. 2-2006 带走，从而传播马铃薯金线虫;马铃薯种薯、菌木、花卉鳞球菜、消费或加工用马铃薯块茎上沾醋的土壤可将马铃薯金钱虫的胞囊传播到新的马铃薯生产地区，因此，胞囊是马铃薯金线虫远距离传播的主要途径。附录B(资料性附录)胞囊线虫旺阴板棕本的制作将分离到的于双目解剖镜下用解剖除旺阴板的沾甜物和卵的边缘;将修整后的胚阴板移至塑料载玻片的另一70%、95%和100%的酒精和丁香油处理，使为涂平后将处理好的旺阴板(3枚4枚)上);待凹穴载玻片中的树胶于

16、因后，力日盖玻片后树胶正好铺满盏玻片中放置巳浸泡过的胞囊，或眉笔或0号狼毛每轻轻剔，用解剖刀适当修整虹5月板净化了的胚阴板，然后再通过片的凹穴内加一滴中性树跤，稍竹针将胚阴板扶宜，使其外表面向中性树胶，盖上盖玻片(加进去树胶的量以在7 SN/T 1723.2 2006 附录C规范性附景)马铃薯金钱虫和马铃薯白线虫的主要区如马铃薯白线虫与马铃薯金线虫在形态上极为相似，两个种的主要区别在于马铃薯自线虫的幼虫通常比马铃薯金线虫的大;白线虫的幼虫口针较长为2l26(23.6)m，而金线虫的幼虫口针较短为2123(21. 8)m;白线虫的幼虫体长较长为440525(484)m，而金线虫的幼虫体长较短为4

17、25505(468)m;白线虫的幼虫尾长较长为4652(51.9)m，而金线虫幼虫尾长为4050(43.的m;白线虫幼虫口针基部球前表面向前突起，而金钱虫的幼虫口针基部球圆形，向后倾斜。白线虫的雄虫为白色或奶油色至亮褐色，金钱虫雌虫为金黄色;白线虫雌虫口针较长，为2329(26.7)m，而金线虫雌虫口针较短为2125(22.9)m;白线虫i雄虫拥门与虹门向角质层的脊数为820(12.2)，而金线虫雌虫阴门与虹门间角质层的脊数为1631(21.的。白线虫胞囊阴门与缸门i可距离较短，为3235m，而金线虫胞囊阴门与旺门间距离较长，为88102m(见图C.l和表C.l)。8 。A B C AB一一马

18、铃薯白线虫2龄幼虫口针zC-D一一马铃薯金线虫2龄幼虫口比D 10 J.l 立一一马铃薯白线虫雌虫脏门阴n区，示角质层脊数zF一一马铃薯金线虫雌虫脏门-阴门区，示角质层脊数。E A-D 回C.1马铃薯金钱虫和马铃薯自钱虫的区别仿Stone，1973J F SN/T 1723. 2-2006 表C.1马铃事金钱虫和马铃薯白线虫的主要区别及到1计值范围单位为微米2龄幼虫胞囊类别雌虫口针口针体长尾长口针基球阴门盆直径脊数，)JlI阴距b)格氏比值马铃薯21-23 425-505 40-50 前表商图，21-25 8-20 12-31 37-77 1. 3-9. 5 金线虫(22) (468) (43

19、.9) 向后倾斜(22.9) (14) (55) (3) 马铃薯21-26 440-525 46-52 前表面向23-29 18-21 8-20 22-67 1. 2-3. 5 自线虫(23) (484) (51. 9) 前突起(26. 7) (19) (14) (50) (3) a) B工阴脊数是指雌虫胚门和阴门之阔的角质层的脊数。b) 指胚n歪阴门盆边缘的距离。9 OONiN.RhFH军中华人民共和国出入境检验检疫行业标准马铃薯金钱且检瘟鉴定方法SN/T 1723. 2-2006 9毛中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045网址电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷* 开本880X 1230 1/16 印张1字数17千字2006年5月第一版2006年5月第一次印刷印数1-2000争夺书号，155066 2-16780 定价10.00元