SN T 1699.2-2006 猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1699.2-2006 Protocol of direct immunofluorescent test for porcine epidemic diarrhea 猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程施jli实己反U一no-nu-二尸户。、fhbnu-J nu-h n/iruub2006-01-26发布发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局前吉SN/T 1699分为三部分:一一猪流行性腹泻微量血清中和试验操作规程;一一猪流行性膜泻病毒直接免疫荧光试验操作规程;一一猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫股附试验操作规程。本部分为SN/T1699的第

2、2部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由爵家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人z罗琼、梁刚、林志雄、李力施。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。SN/T 1699. 2-2006 I SN/T 1699.2 2006 猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作规程1 范围SN/T 1699的本部分规定了猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验的操作方法。本部分适用于猪流行性腹泻的诊断。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T1699的本部分的引用商成为本部分的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)

3、或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6822 分析实验室用水规格和试验用法3 铺路语下列缩略i否适用于SN/T1699的本部分。3. 1 PED 猪流行性朦泻。4 仪器设备荧光显微镜、冰冻切片机、眼科镜子、载玻片、盖玻片、染色缸。5 试验材料5.1 0.01 mol/L pH7. 2磷酸盐援冲琅CPBS)配制方法见A.1.1，或按诊断试剂说明书配棋。5.2 甘油罐;中盐水配制方法见A.1.2;或按诊断试剂说明书配制。5.3 0.2%。伊文思蓝溶溜配制方法见A.1.3，或按诊断试剂

4、说明书配制。5.4 荧光抗体经结合了异硫氨酸荧光黄CFITC)的兔抗PED病毒抗体。由指定单位提供，按说明书要求，保存使用。5.5 * 本部分使用水符合GB/T6822中二级水的规格。5.6 被检样品采取一段长约10cm病死猪的空肠，样品应无菌采取，且无腐败。5. 7 阳性样本指定单位提供。5.8 阴性样本指定单位提供。1 SN/T 1699. 2-2006 6 操作方法6. 1 标本的制作将取得的病死猪的空肠样本，放于洁净培养血中，加入少量PBS攘，用眼科剪子剖开肠管在PBS被中轻轻漂洗，除去肠腔内容物，取洁净的肠管为样本。6. 1. 1 肠上皮细胞洗脱物涂片取一段洁净样本，PBS被混浊后，

5、取出肠洁净的载玻片上涂片，15 min，取出自然风干，6. 1.2 肠组织冰冻切片另取一段洁净样本，剪成o.2 cmO. 8 管冻结后，将肠管切片，贴于洁净的载切片标本。6.2 染色按荧光抗体说明书滴如到固定的肠上皮细作30mino 6.3 漂洗从温箱中取出后，6.4 封固标本漂洗后，风干，满加甘油援冲盐水，加盖暖片封面。6.5 镜检寰荧光显微镜下，用520的标本，必要时进行显微7 结果判定7. 1 阳性细跑浆内7.2 阴性结脑浆内未见有弥2 玻璃棒搅拌1min3 min，待铀耳钩取肠土皮洗脱物，于酣缸内，室温条件下固定子将肠段立在冰冻台上，待肠宜。放搜盒中于37C握箱感7j(漫泡三次，每次3

6、mino 5 nm紫外光下，观察各个己染色或脂核内的荧光不能判为，凡呈暗绿色或黄色的荧SN/T 1699.2 2006 附录A(规范性附来)试剂配制与器材处理A.1 试剂配制A. 1. 1 0.01 mol/L pH7. 2磷酸盐缓冲滚CPS)磷酸氢二铀CNa2日P04 12H40) 8.70 g 磷酸工氧铀CNaH2P04.2日40)0.89g 氟化铀CNaCl)22. 80 g 以上试剂应选用分析纯，将上述成分榕解于适量蒸锢水中，最后定容至3000 mL, 103 kPa 20 min 高压灭菌，40C保存，30d内使用。A. 1. 2 甘油缓冲盐水取纯甘油9份，PBS液1份，混合即成。A

7、. 1.3 0.2%。伊文恩蓝溶班称取0.2g伊文患蓝榕解于1000mL蒸铺水或PBS液。A.2 载玻片与盖玻片的处理先用中性洗涤剂充分洗净，浸于3%盐酸中12h24 h，冲洗后贮于元水乙薛中备用。用过的玻片可用水浸泡，对感染性栋本应及时灭菌，用中性洗涤剂擦洗后，提于浓硫酸中18h，冲洗晒干备用。UOON-N.白白户HZ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准猪流行性腹泻病毒直接免疫荧光试验操作现程SN/丁1699.2-20069号中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷争号开本880X 1230 1/16 印张0.5字数7千字2006年4月第一版2006年4月第一次印刷印数1-20009夺书号:155066 2-16754 定价6.00元SN/1699.2-2006