GA T 190-1998 中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC NPD定性及定量分析方法.pdf

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1、ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 190-1998 中毒盼才中苯哇卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法Methods of qualitative and quantitative analysis for benzocaine ,lidocaine , procaine ，amethoaine , bupivacaine in case samples by GC /NPD 1998-12 -08发布1999- 03-01实施中华人民共和国公安部发布GA/T 190-1998 前言苯嗖卡因、利多卡因、普鲁卡因、

2、丁卡因、布比卡因在医疗上一般作为手术时的麻醉止痛药物，它们止痛作用迅速，有的在3-5min内即生效。常有用药不当引起中毒或怀疑中毒的事件发生，在中毒案件及事故中需要对中毒者的血液、肝组织、现场物证进行定性及定量分析。经1993年至1994年公安部立项研究，通过大量研究实验和实际案例、事故的应用，形成了较成熟的对苯嗖卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的分析方法。在此基础上制定出中毒检材中苯嗖卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法标准。本标准的主要内容为用GC/NPD方法分析五种局部麻醉药的原理、试剂、仪器、操作方法及结果评价。本标准适用于中毒后胃及内容

3、物、血、肝、注射部位肌肉及现场物证等检材中五种局麻药的分析。本分析方法回收率可达70%以上，血中检出限为10-20ng/mL。本标准的附录A和附录B都是标准的附录。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位z公安部第二研究所。本标准主要起草人:封世珍、李双庆、李玉兰、孙静、王芳琳。1 范围中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中苯瞠卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法Metbods of qualitative and quantitative analysis for benzocaine ,lidocai

4、ne , procaine ,ametbocaine , bupivacaine in case samples by GC/NPD GA/T 190-1998 本标准规定了局部麻醉药物引起的中毒案件或事故中对有关检材进行分析检验时的操作步骤、计算方法及结果评价。本标准适用于苯嗖卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因五种药物引起中毒后的现场物证、生物样品中的药物定性及定量分析。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/122-1995 毒物分析名词术

5、语3 定义本标准采用GA/T122的定义。4 分析方法本方法适用的检材有z怀疑引起中毒的现场物证F中毒者的血液、尿液、肝组织;口服者还需提供胃内容物、胃组织。4.1 原理生物体液及脏器、现场物证中的苯唾卡因、利多卡园、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因等局部麻醉药用SKFs2SA内标物，并用平行提取的添加标准品、空白脏器为对照进行质量控制。经用液一液萃取或液一圄萃取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪分析，可对中毒者体内治疗量、中毒量以上的药物进行定性及定量分析。4.2 试剂(所用试剂均为分析纯)4.2.1 乙酷、二氯甲烧、异丙醇、氯仿。4. 2. 2 Na2C03固体试剂。4.2.3 饱和Na2C

6、03溶液。4.2.4 l%HCl水液。中华人民共和国公安部1998-12-08批准1999- 03-01实施1 GA/T 190-1998 4.2.5 pH9缓冲液11MNaHC03用1MNa2C03调节pH值为9。4.2.6 GDX-403(或GDX103、C18等)固相小柱(用前先用5mL甲醇淋洗，然后用5mL水淋洗进行活化)。4.2.7 药物标准榕液4.2.7.1 单一药物标准溶液分别取苯嗖卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因各药物纯品用乙醇配制成1mg/mL的标准潜液，置一100C冰箱保存，此液可使用1a. 4.2.7.2 混合药物标准使用液取上述4.2.7.1中各药物的标准液1

7、.0 mL装于同一个10mL棕色容量瓶中，加乙醇至刻度，得0.10 mg/mL的混合标准液;再用乙醇稀释10倍，得0.010mg/mL的混合使用液，使用期7a。4.2.7.3 内标物潜液称取SKFs2SA药物纯品，用无水乙醇配制成1.0 mg/mL的标准贮存液，置-100C冰箱保存，此液可使用1a。取此液稀释成0.10mg/mL和0.010mg/mL的使用液，冰箱保存，使用期10a o 4.2.7.4 带内标物的混合药物使用液取前述4.2.7.2项的混合药物0.10mg/mL的标准液及4.2. 7. 3项的内标物0.10mg/mL的溶液各1.0 mL装于10mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，

8、得每毫升乙醇含各药物及内标物0.010mg 的使用液，冰箱保存，使用期7a。4.3 仪器4. 3. 1 配有氮磷检测器的气相色谱仪。4.3.2 积分仪或微处理机。4. 3. 3 10L微量注射器。4.3.4 振荡器。4.3.5 水洛锅或加热器。4.3.6 离心机。4.4 操作方法4.4. , 定性分析4.4.1.1 提取与净化4.4. 1. 1. , 液一液萃取法取检材血2.0mL或绞碎肝组织2.0g装于15mL具塞试管中，加含内标物的使用液200L(0.01 mg/mL).混匀，加56滴饱和Na2C03溶液调节pH值为1112;用7mL乙酷振荡提取至少5 min.离心，分出乙酷液装于另一个具

9、塞试管中，加1mL蒸馆水振0.5min洗涤一次，离心，用吸管吸出上层乙酷液装于小烧杯中。检材再用7mL乙酷振提5min.离心后分出的乙酷液合并到小烧杯中，在400C下加空气流吹干。烧杯中药物用1%HCI共8mL分3次榕解，经滤纸分次过滤到15mL具塞试管中，用NaZC03固体调节pH值为1112;用2mL氯仿振提5min.离心，吸出上层水液弃去，小心吸取底层榕荆于另一个尖底离心管中(勿带水份).在60700C下用空气流吹干。加100L甲醇强振潜解，供分析。4.4. 1. .2 液一固萃取法取检材血1.0 mL(或尿510mL)装于10mL试管中，加入内标物使用工作液100L(O.01 mg/

10、mL).加5mL pH9缓冲液稀释s稀释液转入己活化的固相桂中，流速为2mL/min左右F待检液全部流出以后，加5mL蒸馆水淋洗小柱，待水液全部流出以后，弃去流出水液。用柱下抽气或柱上加压法使柱中残留水份彻底流出，再用46mL的二氯甲烧/异丙醇(3I 1)洗脱，收集洗脱液于尖底试管中，如洗脱溶剂顶部有残留水份，应离心后用吸管吸出并弃出。在60700C下用空气流吹干.50100L甲醇溶解，供分析用。2 GA/T 190-1998 4.4.1.1.3 直接提取法取现场物证，如注射器、空瓶、针头等直接用甲醇漫泡提取，浓缩后供分析用。检材若为水溶液，直接用氯仿提取，分出氯仿液，浓缩至于自甲醇溶解后供分

11、析用。4.4. 1. 2 分析条件4.4. 1. 2. 1 色谱柱OV-17弹性石英毛细色谱柱，25mXO. 22 mmCid);3%OV-17玻璃填充柱，2mX 0.2 cm(id)。4.4.1.2.2 温度参考条件毛细管色谱柱进样口温:250C、检测器温(NPD):280C;柱温230C(l min)主卫生!立280C。填充色谱柱进样口温:280C、检测器温(NPD):280C; 柱温230C(l min)丘生!1280。4.4. 1. 2. 3 气流参考条件毛细管柱载气(N2)0.75 mL/min，分流比40:1; 填充柱载气(N2)40mL/min; 空气和燃气(H2)选用仪器最佳条

12、件。4.4.1.3 检测4.4. 1. 3. 1 进样将各样品提取液、混合药物标准液、单一药物标准液、内标物标准使用液1.0L注入上述分析条件的色谱柱中，每个样品进样2次。4.4. 1. 3. 2 记录分别记录各样品的保留时间(RT)值，并记录内标物标准使用模和检材样品中内标物的峰面积平均值。4.4. 1. 3. 3 计算a)计算各标准品、内标物、检材样品中各成分的RT平均值，并以内标物RT值为1计算其他成分的相对保留时间RRT值。b)计算检材样品中添加内标物的回收率，公式如下z4.4.2 定量分析一检材样品中内标物峰面积平均值内标物的回收率(%)一等量内标物标准品峰面积平均值4.4.2.1

13、提取净化如选用液一液萃取法需取2g检材2份p如选液一固萃取法需取1g检材2份，并取相应的空白样添加经定性分析后的待测药物一定量(l5g)，在检材和添加样品中加人内标物标准使用液15g(视含量定)。以下操作按4.4.1.1.1或4.4.1.1. 2步骤进行。4.4.2.2 分析条件按4.4.1.2中GC定性条件进行定量分析。4.4.2.3 测定4.4.2.3.1 进样取各检材和添加样品提取液1.0L注入色谱柱中，各进样2次。4.4.2. 3. 2 记录记录检材和添加样品中药物和内标物峰面积值。4.4.2. 3. 3 计算a)计算峰面积平均值，填入上述记录中。3 GA/T 190-1998 b)按

14、下列公式计算校正因子一待测药物进样量(g)X内标峰面积校正因子f= -=:.:6d!t.:;:=(用空白添加的结果计算)一内标进样量(g)X待测药物峰面积c)按下列公式计算药物含量，填入定量分析结果表中。一校正因子待测药物峰面积内标添加量(g)药物含量XCg/g(mL)一内标峰面积检材量g(mL汀d)按下列公式计算相对相差|X1-Xzl 相对相差(-%)= 主X 100 式中:XhXz一-两份检材平行定量测定的数值;主一-两份检材含量平均值。4.5 结果评价4.5.1 定性分析结果评价4.5.1.1 回收率指标当添加在检材中的内标物回收率大于50%，且空白榕剂、空白检材无干扰时，无论阳性结果或

15、阴性结果均可靠$如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。4.5. .2 定性分析必备条件阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知纯品药物取得一致的RT或RRT时，方为可靠;也可选择HPLC、GC/MS、TLC等其他方法验证分析。4.5.2 定量分析结果评价2份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均值计算J日相对相差大于20%，其定量结果不准确，应重新实验。4 GA/T 190-1998 附录A(标准的附录)五种局部麻醉商物及内标物色晴圆及分析敢据A1 五种局部麻醉药物及内标物气相色谱分析固如图Al所示。2 5 6 4 3 1一苯喽卡因

16、(3.28min); 2一利多卡因(5.16min); 3一普鲁卡因(6.79min); 4一内标物SKF5Z5A(8.52 min); 5一丁卡因(8.91 min); 6一布比卡因(9.69min) GC条件:OV-17弹性石英毛细柱.25mXO. 22 mm; 4 C /mm 柱温:230C(1min)一一一一-280C;进样口温:250C;检测器温:280C;Nz:O. 75 mL/min、Hz:3.5 mL/min、Air:100 mL/min;分流比:40:1 图AlA2 五种局部麻醉药及内标物平均回收率及栓出限如表Al所示。5 |lJ K回方收法阜、;飞药飞飞物占添加药物量苯幢卡

17、因液一液萃取法2mL血加95.5 2.0g 液一固萃取法1 mL血加78.4 1.0g 检出限，ng/mL血10.0 GA/T 190-1998 表Al利多卡因普鲁卡因96.2 90.3 93.3 86. 1 10.0 20.0 附最B标准的附录申毒撒据参考值内标物91. 5 86.4 20.0 中毒数据参考值如表Bl所示。表Bl血中有关药物正常、中毒、致死浓度数据药物治疗量中毒量利多卡因0.15-0.5 0.9-1. 4 普鲁卡因0.02-1. 3 2.1 布比卡因0.022-0.345 1. 0 丁卡因布比卡因87.6 92.0 91. 9 92.2 5.0 10.0 mg/lOO mL

18、致死量2.5 注2数据摘于CharlesL. Winek. Ph. D(Drug and Chemical Blood-Level Date，1989年，美国匹兹堡大学。6 F|omF H司。中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中苯哇卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法GA/T 190-1998 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:68522112中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印* 开本880X 1230 1/16 印张3/4字数13千字1999年7月第一版1999年7月第一次印刷印数1-600 定价8.00元379-51 书号:155066. 2-12601 标目