HJ 1215-2021 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法.pdf

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1、中华人民共和国国家生态环境标准 HJ 1215 2021 水质 浮游植物的 测定 滤膜- 显微 镜计数法 Water quality Determination of phytoplankton Filtration membrane-Microscope counting method 本电子版 为正式 标 准文本， 由生态 环 境部环境 标准研 究 所审校排 版。 2021-11-29 发布 2022-06-01 实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 12152021 i 目 次 前 言 . ii 1 适 用范 围 . 1 2 规 范性 引用 文件. 1 3 术 语和 定义 . 1 4

2、方 法原 理 . 1 5 试 剂和 材料 . 2 6 仪 器和 设备 . 2 7 样品 . 3 8 分 析步 骤 . 4 9 结 果计 算与 表示. 6 10 精 密度 . 6 11 质量 保证 和质 量控 制 . 7 12 废 物处 置 . 7 附录 A （ 规范 性附 录） 方法检 出限 计算 方法 . 8 附录 B （ 资料 性附 录） 惠普尔 目镜 分划 板标 定 . 9 附录 C （ 资料 性附 录） 丝状体 、似 球形 群体 浮游 植物细 胞数 量估 算 . 12 参考文 献 . 13 HJ 1215 2021 ii 前 言 为贯彻 中 华人 民共 和国 环境保 护法 中华 人民

3、共 和国水 污染 防治 法 ， 防 治 生态环 境污 染， 改善 生态环 境质 量， 规范 水中 浮游植 物的 测定 方法 ，制 定本标 准。 本标准 规定 了测 定地 表水 中浮游 植物 的滤 膜- 显微镜 计数法 。 本标准 的附 录 A 为规范 性 附录， 附 录 B 和附 录 C 为 资料性 附录 。 本标准 为首 次发 布。 本标准 由生 态环 境部 生态 环境监 测司 、法 规与 标准 司组织 制订 。 本标准 主要 起草 单位 ：浙 江省生 态环 境监 测中 心。 本标准 验证 单位： 上海 市环 境监测 中心、 浙江 省海 洋监 测预报 中心、 浙江 省杭 州生 态环境 监测

4、中心 、 浙江省 宁波 生态 环境 监测 中心、 江苏 省常 州环 境 监 测中心 和自 然资 源部 第二 海洋研 究所 。 本标准 生态 环境 部 2021 年 11 月 29 日 批准 。 本标准 自 2022 年 6 月 1 日 起实施 。 本标准 由生 态环 境部 解释 。 HJ 12152021 1 水质 浮 游植物的 测定 滤膜- 显微 镜计数 法 1 适 用范 围 本标准 规定 了测 定水 中浮 游植物 的滤 膜- 显微镜 计数 法。 本标准 适用 于地 表水 中浮 游植物 的快 速测 定。 当样品 最大 过滤 体积 为 1000 ml 时，方法 检出 限为 40 cells/L

5、 。方法检 出限 计算 方法详 见附 录 A 。 2 规 范性 引用 文件 本标准 引用了 下列 文件或 其中的 条款。 凡是 注明日 期的引 用文件 ，仅 注日期 的版本 适用于 本标 准 。 凡是未 注日 期的 引用 文件 ，其最 新版 本（ 包括 所有 的修改 单） 适用 于本 标准 。 GB/T 14581 水质 湖泊 和水 库 采 样技 术指导 HJ/T 91 地表水 和污 水监 测技 术规 范 HJ 494 水质 采样 技术 指导 3 术 语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。 3.1 浮游植 物 phytoplankton 在水中 营浮 游生 活的 微小 藻类植 物，

6、 通常 浮游 植物 就是浮 游藻 类， 包括 原核 的蓝藻 和其 它各 类真 核 藻类。 3.2 计数单 位 counting unit 显微镜 视野 下选 择计 数的 最小单 元， 如细 胞。 3.3 浮游植 物密 度 density of phytoplankton 单位体 积内 浮游 植物 的细 胞数，cells/L 。 3.4 显微镜 计数 视野 microscope counting field 显微镜 视野 中限 定一 定面 积的区 域， 用来 定量 计数 浮游植 物。 4 方 法原 理 样品通 过一 定孔 径的 滤膜 ， 群 体 、 丝 状体 及单 细胞 浮 游植物 截留 在滤

7、膜上 ， 滤 膜经透 明处 理后 在显 微镜下 镜检 。 HJ 1215 2021 2 5 试 剂和 材料 除非另 有说 明， 分析 时均 使 用符合 国家 标准 的分 析纯 试剂， 实验 用水 为新 制备 的 去离子 水或 蒸馏 水。 5.1 碘（I 2）。 5.2 碘 化 钾（KI）。 5.3 甲醛 溶液 ： w(HCHO) 37% 40% 。 5.4 鲁 哥 氏碘 液 ： 称取 60 g 碘 化钾 （5.2 ） 溶 解在 100 ml 水中 ， 再 加入 40 g 碘（5.1 ） ， 充 分 搅 拌使 其完全 溶解 ， 加 水 定容 至 1000 ml ，转移至 棕 色磨口 玻璃 瓶，

8、室温 避光 保存。 5.5 显微 镜浸 没油 ： n D 23 =1.515 或 n E 23 =1.518，配 透 明玻 璃 滴棒 。 5.6 滤膜 ：混合 纤 维素 酯 膜 ，直径 25 mm ，孔径 0.45 m 3 m 。 注： 每批次滤膜应进行水化测 试和油透明测试， 满足可水化和可透明 要求后方可使用。 将 1 张未使用的滤膜放入盛 水的烧杯中， 若滤膜被水完全浸润， 则滤膜可水化。 取 1 张未使用的滤膜， 置于滴有显微镜浸没油的载玻片上， 若滤膜被浸没油完全浸润，则滤膜可透明。 6 仪 器和 设备 6.1 25 号 浮游 生物 网： 网 孔直 径 0.064 mm ， 网呈圆

9、锥形， 网口 套在 铜环 上， 网底端 有出 水开 关活 塞。 6.2 定性 采样 瓶：30 ml 100 ml 广口 聚乙 烯瓶 。 6.3 采水 器： 不锈 钢或 有 机玻璃 材质 ，圆 柱形 。容 量和深 度规 格要 满足 采样 要求。 6.4 定量 采样 瓶：1 L 2 L 广口聚乙烯 瓶。 6.5 冷藏 箱。 6.6 真空 抽滤 装置 ：包 括漏斗 （直 径 25 mm ，容积 200 ml ） 、多 孔聚 酯滤 膜 支撑板 、收 集瓶 、真 空泵 （相对 真空 度 17 kPa ，可调 ） 。 6.7 载玻 片：25 mm 76 mm 。 注： 载玻片和盖玻片使用前 应 用浓盐酸和

10、乙醇浸泡。若条件允许，选择可直接使用的载玻片或盖玻片。 6.8 盖玻 片：25 mm 25 mm 。 6.9 无齿 组织 镊子 。 6.10 载玻 片晾 片板 ：适 配同规 格载 玻片 。 6.11 烘箱 ：70 2 ，温度 可调 。 6.12 正置 生物 显微 镜或 倒置生 物显 微镜 ：物 镜 4 、10 、20 、40 ； 目镜 10 或 15 。 6.13 载物 台测 微计 ：又 称镜台 测微 计，1 mm/100 DIV ，分 划值 为 0.01 mm 。 注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。 6.14 惠普 尔目 镜分 划板 （Whip

11、ple grid ） ： 边长 为 7 mm 10 mm 的正方形大 格，划 分 为 100 个相 同 的 正方形 中格 ，位 于中 央 的 1 个中 格进 一步 划分 为 25 个相同 的正 方形 小格 。 注： 不具备惠普尔目镜分划板 时，亦可使用同规格的网格型目镜分划板（即中央的中格未细分为 25 小格的网格型 目镜分划板）。 6.15 计数 器。 6.16 一般 实验 室常 用设 备。 HJ 12152021 3 7 样品 7.1 样品 采集 7.1.1 定 性样 品 点位布 设及 采样 频次 按 照 GB/T 14581 、HJ/T 91 和 HJ 494 的 相关 规定 执行 。

12、使用 25 号 浮游 生物 网（6.1 ）采 集定 性样 品。 关闭 浮 游生物 网底 端出 水活 塞开 关，在 水面 表层 至 0.5 m 水深处 以 20 cm/s 30 cm/s 的速度做 “ ”形 往复， 缓慢 拖动 约 1 min 3 min ，待网中 明显 有浮 游植物 进入 ，将 浮游 生物 网（6.1 ） 提出 水面 ，网 内 水自然 通过 网孔 滤出 ，待 底部剩 少许 水样 （5 ml 10 ml ）时，将 底端 出口 移 入定性 采样 瓶（6.2 ）中 ， 打开底 端活 塞开 关收 集定 性样品 。采 集分 层样 品 时， 用 25 号浮 游生 物网 （6.1 ） 过滤

13、特定 水层 样品 ， 其他步 骤同 采集 表层 样品 。定性 样品 采集 完成 后 及时将 浮游 生物 网清 洗干 净。样 品采 集后 放入 冷藏 箱（6.5 ） 冷藏 避光 运输 。 如有定 性样 品采 集技 术规 范，按 技术 规范 有关 要求 执行。 7.1.2 定 量样 品 按照 GB/T 14581 、HJ/T 91 和 HJ 494 的 相关 规定 采 集定量 样品 。 使用采 水器 （6.3 ） 采集 1 L 2 L 样品至定 量采 样瓶 （6.4 ）中 。若 水体 透明 度 较高， 浮游 植物 数 量较少 时， 应酌 情增 加采 样体积 。定 量样 品采 集完 成后， 定量 采

14、样 瓶（6.4 ） 不应装 满， 以便 摇匀 。 注 1 ： 有些浮游植物（如蓝藻 ）常上浮在水面或成片、条带分布，可在此水华密集区域采样作为峰值参考。 注 2 ： 定量样品采集应在定性 样品采集之前。应保持固定时间段采样，以便结果之间可相互比较。 7.2 样品 保存 7.2.1 定 性样 品 定性样 品采 集后 应立 即加 入鲁哥 氏碘 液（5.4 ）固 定 ，用量 为水 样体 积的 1.0% 1.5% 。镜 检活 体 样品不 加鲁 哥氏 碘液 （5.4 ）固定 。定 性样 品在 室温 避光条 件下 可保 存 3 周；1 5 冷藏 避光 条件 下可保 存 12 个 月。 活体 样 品 4 1

15、0 冷藏 避光 条件下 可保 存 36 h 。 7.2.2 定 量样 品 定量样 品采 集后 立即 加入 鲁哥氏 碘液 （5.4 ） 固定 ， 用量为 水样 体积 的 1.0% 1.5% 。 也可 将鲁 哥 氏碘液 （5.4 ） 提前 加入 定 量 采样 瓶（6.4 ）中 带至 现 场使用 。定 量样 品在 室温 避光条 件下 可保 存 3 周； 1 5 冷藏 避光 条件 下可保 存 12 个 月。 样品在 保存 过程 中， 应每 周检查 鲁哥 氏碘 液（5.4 ） 的氧化 程度 ，若 样品 颜色 变浅， 应向 样品 中补 加适量 的鲁 哥氏 碘液 （5.4 ） ，直 到样 品的 颜色 恢复

16、为 黄褐色 。 注： 若样品需长期保存，应加 入甲醛溶液（5.3 ），用量为水 样体积的 4% 。 HJ 1215 2021 4 8 分 析步 骤 8.1 试样 制备 8.1.1 预检 按照 8.1.2 8.1.5 的 要求 完 成预检 装片 ，判 断样 品浮 游植物 密度 ，便 于样 品的 后续分 析。 8.1.2 混 匀样 品 每次取 样前 ，采 用上 下颠 倒至 少 30 次的 方式 充分 混 匀样品 ，混 匀动 作要 轻。 8.1.3 过 滤体 积 根据预 检估 算浮 游植 物密 度，调 整样 品过 滤体 积， 最终使 滤膜 上约 有 40 个10 5 个 浮游 植物 细 胞。不 同预

17、 检估 计密 度水平 下推 荐的 样品 过滤 体积 见表 1 。 表1 推荐 选用 的样 品过 滤体积 预估浮游植物细胞密度水平（cells/L ） 推荐的样品过滤体积V0 （ml ） 10 8 及以上 0.5 2 10 7 5 10 10 6 5 25 10 5 1050 10 4 5 100 10 3 50200 10 2 500 40 1000 注 1 ：样品过滤 体积大于漏斗 容量时， 应保证后续 样品加入时不 扰动滤膜上的浮游植物。 注 2 ：样 品 过 滤 体 积 小 于 5 ml 时 ， 以 实 验 用 水 再 悬 浮 样 品 。 首 先 用 移 液 器 （6.16 ） 量 取

18、一 定 体 积 的 样 品 至 10 ml 50 ml 规格的离心管中，再加入一定 体积的实验用水，使悬浮后 样品总体积在 5 ml 及以上 即可，最后用胶头滴 管（6.16 ）加入 2 滴3 滴鲁哥 氏碘液（5.4 ）固定。 8.1.4 样 品过 滤 用量筒 或移 液器 （6.16 ） 快 速量取 适量 样品 体积 ， 将 样品加 入装 有滤 膜 （5.6 ） 的 真空抽 滤装 置 （6.6） 漏斗中 ， 静 置 2 min 3 min ， 真空 抽滤， 至漏 斗中 有 0.5 cm 液层 时关 闭真 空泵， 使剩余 液体 完全 通过 漏 斗，切 忌抽 干滤 膜。 8.1.5 装 片制 备

19、样品过 滤完 成后 ， 用无 齿 组织镊 子 （6.9 ） 取下 滤膜 ， 保 持截 留浮 游植 物的 一 面向上 ， 放在 滴有 2 滴 显微镜 浸没 油 （5.5） 的载 玻片 （6.7） 上， 再用 透明 玻璃滴 棒在 滤膜 上 滴 2 滴 显微镜 浸没 油 （5.5 ） ， 将 载 玻片 （6.7 ）放 入载 玻片 晾 片板 （6.10 ） ， 置于 烘箱 （6.11 ）中，70 2 加热 2 h 。2 h 后 取出 载玻 片 晾片板 （6.10 ） ， 观 察滤 膜 是否透 明。 若已 透明， 再 在滤膜 上滴 加 2 滴显 微镜 浸没油 （5.5 ） ， 盖 上盖 玻片HJ 121

20、52021 5 （6.8 ） ， 装 片制 备完 成 。 若 滤膜加 热 2 h 后未 透明 ， 延 长加热 时间 ， 不超 过 24 h 。 盖 上盖 玻片 （6.8 ） 时， 勿扰动 滤膜 。 8.2 定性 样品 分析 在显微 镜 （6.12 ） 下观 察定 性样品 ， 鉴 定浮 游植 物的 种类。 优势 种类 鉴定 到种 ， 其他 种类 至少 应鉴 定到属 。部 分鉴 定参 考资 料见参 考文 献。 注： 种类鉴定除用定性样品观 察外，还可吸取已完成计数的定量样品进行观察。 8.3 定量 样品 分析 8.3.1 显 微镜 标定 计数前 标定 显微 镜（6.12 ） ，确定 计数 视野 面

21、积 （Whipple 视野 或目 镜视 场视 野 ） 。显 微镜 标定 工具 包括载 物台 测微 计（6.13 ）和惠 普尔 目镜 分划 板（6.14 ） 。 惠普 尔目 镜分 划板 标定方 法参 见附 录 B 。 8.3.2 显 微镜 计数 不同 密 度水 平 样 品推 荐视 野类别 及计 数视 野数 量见 表 2 。将 装片 （8.1.5 ） 置 于显微 镜（6.12 ）载 物 台上， 用 Whipple 视 野或 目镜视 场视 野进 行镜 检计 数。 较 低密 度水平 样 品计 数， 建 议选 择目 镜视 场视 野 计数。 根据 浮游 植物 细胞 大小， 选择 目 镜 10 、 物 镜

22、20 或 目镜 10 、 物 镜 40放 大倍 数镜 检， 记录 每个视 野的 浮游 植物 种类 及数量 。 表 2 不同 密度 水平 样品 推荐视 野类 别及 计数 视野 数 样品 推荐计数视野类别 推荐计数 视野数 高密度水平（10 8 cells/L 及以上） Whipple 视野 10个 中密度 水平（10 6 cells/L 10 7 cells/L ） Whipple 视野 20个 低密度水平（10 6 cells/L 以下） 目镜视场视野 20个 Whipple 视 野计 数规 则： 视 野中处 于下 边界 及右 边界 线的藻 类计 入总 数， 处于 上边界 及左 边界 线 的

23、藻类不 计入 总数 ， 如 图 1 。 若出现 丝状 体等 较大 个体 显著穿 过两 个或 多个 格子 的边界 时 ， 应 在 低倍 镜 下 单独计 数 ， 再 计入 总数 。 破损细 胞不 计数 。 丝状 体 或似球 形群 体细 胞数 估算 参见附 录 C 。 计数 时宜 缓 慢 移动显 微镜 载物 台， 应 避 免在一 个区 域重 复抽 样， 确保滤 膜上、 下、 左、 右和 中部区 域的 视野 均有 抽样 。 显微镜 视野 在滤 膜上 的移 动方向 如 图 2 所 示。 图1 Whipple 视野 计数 约 定规则 示意 图 C 为 计数 在内 U 为不 计数 在内 HJ 1215 20

24、21 6 图2 显微 镜视 野在 滤膜 上的移 动示 意图 9 结 果计 算与 表示 9.1 结果 计算 样品中 浮游 植物 的细 胞密 度按照 公式 （1 ）计 算。 N = A f A c n V 0 1000 （1 ） 式中： N 样品 中浮 游植 物的细 胞密 度 ，cells/L ； A f滤膜 有效 过滤 面积 ，mm 2 ； A c 计 数面 积 （ 镜检 计数 的视 野面积 之 和） ，mm 2 ； n 显微 镜观 察计数 的 浮 游植物 细胞 数 ，cells ； V 0 过滤 样品 的取 样体积 ，ml ； 1000 体 积单 位换 算系 数 ，ml/L 。 9.2 结果

25、表示 测定结 果以 科学 计数 法表 示，保 留 2 位有 效数 字。 10 精 密度 6 家 实 验 室 分 别 对 含 高 密 度 水平 （1.0 10 8 cells/L ） 、 中 密 度 水平 （4.0 10 6 cells/L ） 和 低 密 度 水 平 （7.0 10 4 cells/L ）的浮 游植物 样品 进行 了 6 次重 复测定 ：实 验室 内相 对标 准偏差 分别 为 0.18% 0.64% ，0.22% 0.49% ，0.37% 1.16% ；实 验室 间相 对标准 偏差 分别 为：0.28% 、0.68% 、1.57%。计 算精密 度所 用数 据均 经 以 10 为

26、 底进 行对 数转 换。 高 、中、 低密 度验 证样 品的 实验室 间 95% 置 信区 间 见表 3 。 表 3 高、 中、 低密 度水平 验证 样品 的实 验室 间 95% 置信 区间 样品 均值（cells/L ） 95% 置信区间（cells/L ） 高密度 水平 9.8 10 7 9.3 10 7 1.0 10 8 中密度 水平 4.0 10 6 3.6 10 6 4.4 10 6 低密度 水平 7.0 10 4 5.7 10 4 8.2 10 4 参考线 透明滤 膜 移动轨迹 HJ 12152021 7 11 质 量保 证和 质量 控制 11.1 最小 计数 量： 优势 种种类

27、计数 最 少 100 个150 个。 11.2 每 批 次 样 品 中 ， 随 机 抽 取 10% 的 样 品 做 平 行 测 定 ， 用 计 数 差 异 百 分 比 （percent difference in enumeration ，PDE ） 评估 数据的 精密 度。 按照 公式 （2） 计算 PDE 。 PDE= | N 1 N 2 | N 1 N 2 （2） 式中：PDE 计数 差异 百分比 ，% ； 1 平行样 1 测 定结 果的 均值 ，cells/L ； 2 平行样 2 测 定结 果的 均值 ，cells/L 。 11.3 定期 标定 显微 镜， 标定目 镜分 划板 及视 野

28、面 积，每 年至 少 1 次。 12 废 物处 置 实验中 产生 的废 液应 分类 收集， 集中 保管 ，依 法委 托有资 质的 单位 进行 处理 。 HJ 1215 2021 8 附 录 A （规范 性附 录） 方法检 出限 计算 方法 附录 A 给 出了 方法 检出 限 的计算 方法 。方 法检 出限 与计数 视野 数、 可计 数视 野总数 及子 样本 体 积 有关。 假设 样品 在滤 膜上 符合随 机分 布， 可通 过泊 松统计 确定 其检 出限 ，计 算公式 见公 式（A.1）。 MDL= N e n e V 0 ln 0 .01 （A.1 ） 式中：MDL 显著性 水平 0.01 时

29、的 方 法检 出限 ，cells/L ； N e 可 计数 视野 总 数 ； n e 观察 的计 数视野 数； V 0 样品 的 过 滤体 积，L ； 0.01 显 著性 水平 。 HJ 12152021 9 附 录 B （资料 性附 录） 惠普尔 目镜 分划 板标 定 B.1 标定 工具 B.1.1 载 物台 测微 计 载物台 测微 计 （6.13 ） 如图 B.1 所示， 是一 块特 制的 载 玻片， 其中 央有 一个 小圆 圈。 圈 内刻 有分 度， 将长度 为 1 mm 的直线等 分为 100 个 小格 ，每 个小 格长度 等 于 10 m 。 图B.1 载 物台 测微 计示 意图 B

30、.1.2 惠 普尔 目镜 分划 板 惠普尔 目镜 分划 板 （6.14 ） 如图 B.2 所示， 是一 种网格 型目镜 分划 板 ， 外观 为 刻 有方格 的玻 璃圆 盘， 包含 1 个 大格 ，大 格被等 分成 100 个中 格， 中心位 置的 1 个 中格 又被 等分为 25 个小 格。 标定 惠普 尔 目 镜分划 板，以 计算 不同 放 大倍数 下 的 Whipple 视野 面积 。 使 用载 物台 测微 计 （6.13 ） 标定 惠普 尔目 镜分 划板。 载物 台测 微计 规格 为 1 mm ，均分成 100 等 分 ，每小 格代 表 10 m 。 图B.2 惠 普尔 目镜 分划 板示

31、意 图 HJ 1215 2021 10 B.2 惠普 尔目 镜分 划板 标 定步骤 B.2.1 将 惠普 尔目 镜分 划 板 （6.14 ） 刻度 向下 装入 目镜隔 板上 。 B.2.2 将载 物台 测微 计 （6.13 ）放 在显 微镜 载物 台上， 刻度 朝上 。先 用低 倍镜对 焦， 使视 野中 载物 台 测微计 标尺 刻度 清晰 。 B.2.3 转 动目 镜， 使惠 普 尔目镜 分划 板标尺 与 载物 台测微 计标尺 刻 度平 行， 移动载 物台 使载 物台 测 微 计 标尺 与惠 普尔 目镜 分划 板标尺 重叠 ，再 使两 尺的 “0” 刻度 完全 重合 。定 位 后，查 找确 定

32、两 尺 第 2 个 完全重 合的 刻度 ，计 数两 组重合 刻度 之间 惠普 尔目 镜分划 板的 格 数 N w 和载 物台测 微计 标尺 的格 数 N s ， 如图 B.3 所示。 载物 台测 微计每 格长 度 10 m ， 在 一定放 大倍 数下 ， 惠 普尔 目镜分 划板 的标 定结 果即 是 每格的 长度 。 图 B.3 载 物台 测微 计标 定惠普 尔目 镜分 划板 示意 图 惠普尔 目镜 分划 板中 格的 标定边 长按 照公 式（B.1 ） 计算。 L e = L s N s N w （B.1 ） 式中： L e 惠 普尔 目镜 分划板 的中 格边 长 ，m ； L s 载 物台

33、测微 计标尺上单格 的长度 ，m ； N s 两 组重 合刻 度线 之 间 载物 台测 微计 标尺 的格数 ； N w 两组 重合 刻度 线之 间 惠普 尔目 镜分 划 板 上中格 的格 数 。 将计算 数据 填入 表 B.1 。依 据表 B.1 完成 表 B.2 。 HJ 12152021 11 表B.1 惠 普尔 目镜 分划 板标定 结果 物镜、目镜组合 次数 大格边长/mm 均值 中格边长/m 均值 物镜 4 、目镜 10 1 2 3 物镜 10 、目镜 10 1 2 3 物镜 20 、目镜 10 1 2 3 物镜 40 、目镜 10 1 2 3 表B.2 惠 普尔 目镜 分划 板面积

34、计算 结果 物镜、目镜组合 次数 惠普尔目镜分划板大格面积/mm 2 均值 物镜 4 、目镜 10 1 2 3 物镜 10、目镜 10 1 2 3 物镜 20、目镜 10 1 2 3 物镜 40、目镜 10 1 2 3 HJ 1215 2021 12 附 录 C （资料 性附 录） 丝状体 、似 球形 群体 浮游 植物细 胞数 量估 算 C.1 丝状 体细 胞数 估算 取多个 丝 状 体的 多次 计数 平均 值 或者 中位 数作 为丝 状体的 平均 细胞 数 。 一般 选 择计 数 30 个丝 状体 ， 分析 30 个 丝状 体的 细胞 数 量分布 ， 若 呈正 态分 布， 按照公 式（C.1

35、 ）计 算 丝 状 体总细 胞数 量。 N T = N t n t （C.1 ） 式中： N T 丝状 体总 细 胞数 ，cells ； t 丝 状体 平均 细胞 数 ，cells/ 个； n t 丝状 体 数目 ， 个 。 若呈偏 态分 布 ， 按照 公式 （C.2 ）计 算 丝 状体 总细 胞 数量 。 N T =M n t （C.2 ） 式中： N T 丝状 体总 细 胞数 ，cells ； M 丝状 体平 均 细 胞数 中位值 ，cells/ 个； n t 丝状 体 数目 ， 个 。 C.2 似球 形群 体细 胞数 估 算 通过群体 直径 估算 似 球形 群体细 胞数 。按照 公式 （

36、C.3 ）计算 似 球形 群体 细胞 数 。 log 10 N c =2.99 log 10 d c 2.80 （C.3 ） 式中： N c 似球 形 群 体 细胞数 ，cells ； 2.99 线 性回 归方 程的 斜率 ； d c 平均 群体 直径 ，m ； 2.80 线 性回 归方 程的 截距 。 使用该 公式 估算 微囊 藻群 体细胞 数时 ， 测 量似 球形 群体体 积应 忽略 群体 的表 层胶被 ， 群 体直 径为充 满细胞 部分 的直 径；将 非 球形群 体视 为 圆 柱体 、卵 圆体估算 群 体体 积； 应随机 测量 至 少 30 个群 体 ， 以 获得合 理 的 群体 平均

37、体积 ，平均 群体 直径 为等同 于 群体 平 均体 积的 似球形 群 体的直径 。 特别大 的群 体， 可通过 目 镜分划 板对 大群体 的 一小 部分 面 积进 行细 胞计 数 ， 然后估 算整个 群体面积 总细胞 数 ， 并 在 工作 记录 表 上加 以说 明 。 HJ 12152021 13 参考文 献 1 胡鸿 钧, 魏印 心. 中 国 淡水藻 类 系 统、 分类 及生态M. 北京: 科 学出 版社, 2006. 2 中国 孢子 植物 志编 辑委 员会. 中国 淡水 藻志, 1-22 卷M. 北京: 科 学出 版社, 1998-2016. 3 胡鸿 钧, 李尧 英, 魏 印 心等. 中国 淡水 藻类M. 北京: 科 学技 术出 版社, 1980. 4 胡鸿 钧. 水华 蓝藻 生物 学M. 北京: 科 学出 版社, 2011. 5 刘 威, 朱远 生， 黄迎 艳译. 欧洲 硅藻 鉴定 系统M. 广州: 中山 大学 出版 社, 2012. 6 章宗 涉, 黄祥 飞. 淡 水 浮游生 物研 究方 法M. 北京: 科学 出版 社, 1991.