GA T 1930-2021 法庭科学 疑似毒品中5,6-亚甲二氧基-2-氨基茚满、2-氨基茚满和乙基氨基丙基苯并呋喃检验 液相色谱和液相色谱-质谱法.pdf

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1、GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA/T 法庭科学 疑似毒品 中 5,6- 亚 甲二氧基-2- 氨基茚满 、 2- 氨基茚 满 和乙基 氨基丙基 苯并 呋喃检 验 液相色谱和 液相色 谱- 质 谱法 Forensic sciences Examination methods for MDAI 、2-AI 、5-EAPB in suspected drugs LC and LC-MS - 发布 - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发布 ICS 13.310 CCS A 92 GA/T I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工

2、作 导则 第1 部 分： 标 准化 文件 的结 构和 起草规 则 的规 定起 草。 请 注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本 文件 由全 国刑 事技 术标 准化技 术委 员会 毒物 分析 分技术 委员 会 （SAC/TC179/SC1 ）提 出并 归口 。 本 文件 起草 单位 ： 公安 部 物证鉴 定中 心 、 江 西省 公 安厅刑 警总 队刑 事技 术处 、 公 安部 禁毒 技术 情报 中心。 本 文件 主要 起草 人 ： 郑晓 雨、 钱 振华 、 翟 晚枫 、 郑 珲、 张 春水 、 王 洪宗 、 刘 勇孜、 赵阳

3、、 常 颖、 徐 鹏、李 彭、 赵彦 彪、 杨虹 贤、闻 武、 刘克 林、 高利 生 。GA/T 1 法庭科学 疑似毒 品中 5,6- 亚甲二氧基-2- 氨基茚满、2- 氨基茚满 和 乙基氨基丙 基苯 并呋喃检验 液相 色谱和液相 色谱- 质谱法 1 范围 本 文件 规 定 了 法 庭 科 学 领 域 疑 似 毒 品 样品 中5,6- 亚 甲 二 氧 基-2- 氨 基 茚 满 （MDAI ） 、2- 氨 基 茚 满 （2-AI ） 、 乙 基氨 基丙 基苯 并呋喃 （5-EAPB ） 的液 相 色谱- 质 谱 （LC-MS ） 定 性 检验方 法和 液相 色谱 （LC ） 定量检 验方 法。

4、本 文件 适用 于法 庭科 学领 域疑似 毒品 样品 中MDAI 、2-AI 、5-EAPB 的 定性 分析 和定量 分析 。 2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分析 实 验室 用 水规格 和试 验方 法 GB/T 27418 测量 不确 定 度评定 和表示 GA/T 122 毒 物分 析名 词术 语 3

5、术 语和 定义 GA/T 122 界 定的 术语 和定 义适用 于本 文件 。 4 原理 对疑似 毒品 样品 中 的 MDAI 、2-AI 、5-EAPB （化 合物 信息 参 见附 录 A ） 进行 提 取。采 用液 相色 谱- 质谱检 测， 以保 留时 间、 质谱特 征离 子对 和离 子 对 丰度比 作为 定性 判断 依据 ； 采用 液相 色谱 检测 ， 以色 谱峰面 积作 为定 量依 据， 用外标 单点 法或 外标 标准 曲线法 进行 定量 分析 。 5 试 剂和 材料 5.1 试剂 实验用 水应 符 合 GB/T 6682 中规 定的 一级 水。 除 非另 有说明 ， 在 分析 中使

6、用的 试剂均 为色 谱纯 ， 试 剂包括 ： a ） 乙腈； b） 甲醇； c ） 浓磷酸 ； d） 甲酸； e ） 乙酸铵 ； GA/T 2 f ） 甲酸- 乙酸 铵缓 冲液 （以配制1000mL 为例 ） ： 称取 乙 酸铵154mg ，用200mL 水溶 解， 量取 甲酸 1.0mL ，滴 入 上述 乙 酸铵溶液中， 转移至1000mL 容量 瓶 中 用水 定 容， 用 真空抽 滤 泵 抽滤 ，超 声波清 洗器 超声 ，即 可使 用； g） 0.1%甲酸 甲醇 溶液 （ 以配 制1000mL 为例） ： 量取 甲酸1.0mL，用 200mL 甲醇 稀释 ， 转 移至1000mL 容量瓶

7、中用 甲醇 定容 ，用 真空抽 滤泵 抽滤 ，超 声波 清洗器 超声 ，即 可使 用 ； h） 0.1%磷酸 水 溶液 （ 以配 制1000mL 为例） ： 量 取浓 磷酸1.0mL ， 用200mL 水稀释 ， 转移至1000mL 容量瓶 中用 水定 容， 用真 空抽滤 泵 抽 滤， 超声 波清 洗器超 声， 即可 使用 ； i ） 定性提 取溶 剂 （ 以 配制1000mL 为例 ） ： 量取950mL 甲酸- 乙酸 铵缓 冲液 和50mL 0.1% 甲酸 甲 醇 溶液， 混匀 即可 使用 ； j ） 定量 提取溶剂 （ 以 配制1000mL 为例） ：量取950mL 0.1% 磷酸水 溶

8、液 和50mL 乙腈 ，混匀 即可 使用； k） 标准溶 液： 1）标 准物 质 储 备液 ：1.0mg/mL MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准物 质 储 备液 ，0 4 冷 藏保 存， 有效期12个月 ； 2）标 准工 作溶 液按 实验 需 求分为 以下 四类： 定 性用标 准工作 溶液 ： 移取MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 物质 储 备液各适量 ，用定 性提 取溶剂 稀 释， 分 别配 制成100ng/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准工 作 溶液 。04 冷藏保 存 ， 有效 期7 天； 定 性质控 标准工 作溶 液： 移取MDAI 、2-AI

9、 、5-EAPB 标准物 质 储备 液 各适 量 ，用定性 提 取 溶剂 稀释 ，分 别配 制成1ng/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 工作 溶液 。0 4 冷藏保 存 ， 有效 期7 天； 外 标单 点法 定量 用标 准工作 溶液 ： 移取MDAI 、 2-AI 、 5-EAPB 标 准物 质 储 备液 各 适量 ， 用 定 量提 取 溶剂 稀释 ，配 制 成0.1mg/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准 工作 溶液 。0 4 冷藏 保存 ，有 效期7天 ； 外 标标准 曲线法 定量 用标准工 作溶液 ：移取MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标 准物

10、质 储备液 各 适量 ， 使用 定量 提取 溶剂 稀 释， 配 制成 浓度 为0.01mg/mL0.5mg/mL 范围 的MDAI 、 2AI 、 5-EAPB 标 准 工作 溶液 ，至 少配制5个 浓度 。 5.2 材料 材料包 括： a ） 具盖离 心管 ； b） 容量瓶 ； c ） 有机系 微孔 滤膜 ：0.22m ； d） 水系微 孔滤 膜：0.22m 。 6 仪 器和 设备 仪器 和 设备 包括 ： a ） 液相色 谱仪 （LC ） ： 配有 二极管 阵列 （DAD ） 或 紫 外检测 器 （UV） ； b） 液相色 谱- 质 谱仪 （LC-MS ）：配 电喷 雾离 子源 ，具 备M

11、RM 检测 模式 ； c ） 电子天 平 ： 定性 检验 实际 分度值d 0.1m g ，定 量检 验 实际分 度值d 0.01mg ； d） 离心机 ； GA/T 3 e ） 振荡器 ； f ） 真空抽 滤泵 ； g） 超声波 清洗 器； h） 移液器 或移 液管 。 7 操 作方 法 7.1 定性 分析 7.1.1 样品 制备 样品充 分均 质化 ， 根 据实 际需求 ， 称 取 10mg100mg 于具 盖离 心管 中 ， 加入 10mL 甲 醇， 密封并 振 荡 5min ， 以 不低 于 4000r/min 离心 5min ， 取上 清液 ， 用 定性 提取 溶剂 稀释 ， 稀释液

12、经 0.22m 的 水系 微 孔滤膜 过滤 ，滤 液作 为样 品溶液 ， 供 LC-MS 分析 。 7.1.2 仪 器检 测 7.1.2.1 液相 色谱- 质谱 仪条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 色谱柱 ：Zorbax Eclipse Plus RRHD C 18 （1.8 m ，2.1 100mm ）或 其他 等效 柱 ； 注： Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 柱为 Agilent 公司产品的 商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相

13、同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 柱温：40 C ； c ） 流动相 ：A 为 甲酸- 乙酸 铵 缓冲液 ，B 为 0.1% 甲酸 甲 醇溶液 ； d） 洗脱： 梯度 洗脱 程序 见表 1； 表 1 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 95% 5% 0.5 95% 5% 5.0 75% 25% 12.0 40% 60% 13.0 20% 80% 14.0 10% 90% 14.5 0% 100% 16.0 0% 100% 16.01 95% 5% 20 95% 5% e ） 流速：0.4mL/min ； f ） 进样量 ：1L ； g） 离子源 ：电 喷雾 离子

14、源； GA/T 4 h） 检测模 式 ： 正离 子模 式； i ） 毛细管 电压 ：4000V ； j ） 干燥气 ：10L/min ； k） 干燥气 温度 ：350C ； l ） 雾化气 ：25psi ； m ） MDAI 、2AI 的 离 子对 和 Fragmentor 电 压、 碰撞 能量 （CE ） ：见表 2 。 表 2 质谱 参考 条件 名称 母离子 m/z 子离子 m/z Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV MDAI 178.1 161.0 80 10 103.0 35 2-AI 134.1 117.0 80 12 115.0 30 5-EAPB 204.1 159.

15、0 95 12 131.0 25 7.1.2.2 进样 分别吸 取样品 空 白 （ 定性 提取溶 剂 ） 、 样品 溶液、 标准溶液 空 白 （ 定性 提取 溶剂）和 定 性用 标准工 作溶液 ， 按7.1.2.1 条件 进 样分析 。 或 根据 实际 需求 ， 再 分 别吸 取标 准溶 液空 白 （ 定 性提 取溶 剂 ） 和 定 性 质控标 准工 作溶 液， 按7.1.2.1条件 进 行分 析。 7.2 定量 分析 7.2.1 外 标单 点法 7.2.1.1 含量 预分 析 根据实 际需 求， 称取 10mg100mg 样 品置 于具 盖离 心 管中， 加入 10mL 定 量提 取溶剂 ，

16、 密 封并 振荡 10min ，以 不低 于 4000r/min 离心 5min ，取 上清 液作 为样品 溶液 ， 供 LC 分析 。或根 据实 际需 要， 将上 清液用 定量 提取 溶剂 稀释 ， 稀释 液作 为样 品溶 液， 供 LC 分 析。 采用 外标 单 点法定 量用 标准 工 作 溶液 作 为定量 参照 。 按照公 式 （1） 计算 样品 中 目标物 的 预 分析 百分 含量 。 ( ) 3 02 + = 100% C A V V V A V m 0 1 2 （1 ） 式中： 样 品中 目标 物的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表示 ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标

17、准工作 溶液 中目 标物 的浓 度，单 位为 毫克 每毫 升 （mg/mL ）； A 样品溶 液中 目标 物的 色谱 峰面积 值； A 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的色 谱峰面 积值 ； V 1 样 品初 次定 容体 积， 单位为 毫升 （mL ）； V 2 从 V 1 中移 取的 体积 ， 单位为 毫升 （mL ） ； GA/T 5 V 3 将 V 2 稀释 时加 入定量提 取溶 剂 的 体积 ，单 位为 毫升 （mL ） ； m 样品 的 称 量重 量 ， 单 位为毫 克 （mg ） 。 7.2.1.2 准确 定量 7.2.1.2.1 称 量重 量的计算 根

18、据 预 分析 中 目 标物 含量 测定结 果 ， 选 择合 适的 定 容体积 、 稀释 倍数 （ 样品 提 取操作 参数 参见 附录 B 中表 B.1） ， 并按 照公 式 （2） 计算 出样 品 称 量重 量 （m ） ，使 样 品溶 液中 目标 物的浓 度在 所用 标准 工作 溶液浓 度的 （100 30 ）% 范围内。 0 C V D m = （2 ） 式中 ： m 称量 重量 ，单 位为 毫 克 （mg ） ； C 0 外 标单 点法 定量 用 标 准工作 溶液 中目 标物 的浓 度， 单 位为 毫克 每毫 升 （mg/mL ） ； V 初次 定容 体 积， 单位 为 毫升 （mL ）

19、 ； D 稀释 倍数 ； 样 品中 目标 物的 预分 析百分 含 量 ，用 百分 比 （% ）表示 。 7.2.1.2.2 样品 制备 根据 7.2.1.2.1 计 算结 果， 平 行称取 样 品 2 份 于具 盖离 心管中 （需 要对 定量 结果 进 行不确 定度 评定 时 ， 至少平 行 称 取 6 份 ） 。 根 据 预分析 含量 结果 ，加 入相 应初次 定容 体积 的甲 醇， 密封并 振 荡 10min ，以不 低于 4000r/min 离心 5min ， 取上 清液 作 为样 品溶 液 ， 供 LC 分 析； 当 样品 溶液 需要稀 释时， 按照 稀释倍 数进行 稀释 定容 ，稀

20、释液 作为样 品溶 液， 供 LC 分析 。 7.2.1.2.3 仪 器检 测 7.2.1.2.3.1 液相 色谱 仪 条件 以下为 参考 条件 ，可 根据 不同品 牌仪 器和 不同 样品 等实际 情况 进行 调整 ： a ） 色 谱柱 ：C 18 （5 m ，150mm 4.6mm ） ； 注： Poroshell 120 EC-C18 柱为 Agilent 公司产品的商品名称 ， 给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 b） 柱 温：30C ； c ） 流 动相 ：A 为 0.1% 磷 酸水溶 液 ，B

21、为乙 腈； d） 洗 脱： 梯度 洗脱 程序 见表 3； 表 3 梯度 洗脱 程序 时间 min 流动相 A 流动相 B 0 95% 5% 10 10% 90% 13 10% 90% 13.1 95% 5% 16 95% 5% GA/T 6 e ） 流 速：1.0mL/min ； f ） 进样 量：5L 。 7.2.1.2.3.2 进样 分别吸 取样 品空 白 （ 定量 提取溶 剂 ） 、 样品 溶液、 标准溶液 空白 （ 定量 提取 溶剂 ） 和外 标单 点法 定 量用标 准工 作溶 液， 按7.2.1.2.3.1 条件 进样 分析 。 当 称取2 份样 品时 ，每 份样 品 进样23 针。

22、 7.2.1.2.4 计 算含 量 按照公 式 （1） 计算 样品 中 目标物 百分 含量 。 7.2.2 外标 标 准曲 线 法 7.2.2.1 标准 工作 曲线 绘 制 按照7.2.1.2.3.1条 件分析5.1 中配制 的 外标 标准 曲线 法 定量用 标准工 作溶 液， 以 目标物 的峰面 积值 为 纵坐标 ， 目标 物浓 度为 横 坐标 ， 分别 绘 制成 线性 范 围为0.01mg/mL 0.5mg/mL 的MDAI 、2-AI 、5-EAPB 标准工 作曲 线。 7.2.2.2 样品 制备 根据实际 需求， 平行 称取 样品2份各20mg200mg 于 具盖离心 管中， 加入50

23、mL 定量提取 溶剂 ， 密封 并振荡10min ， 以不 低于4000r/min 离心5min ， 取 上清 液 用有机 系 微孔 滤膜 过滤 ， 滤 液作 为样 品溶 液， 供 LC 分析 。 7.2.2.3 仪器 检测 7.2.2.3.1 液 相色 谱仪 条 件 同7.2.1.2.3.1 。 7.2.2.3.2 进样 分别吸 取 样 品空 白 （ 定量 提取溶 剂 ） 、样 品溶 液，按7.2.2.3.1 条 件进 样分 析 ， 每 份样品 平行 进样23 针。 7.2.2.4 计算 含量 以 外标 标准 曲线 法定 量用 标准工 作溶 液 中 目标 物的 峰面积 值为 纵坐 标、 外标

24、 标 准曲线 法定 量用 标 准 工作溶 液 中 目标 物的 浓度 为横坐 标进 行线 性回 归， 得到线 性方 程。 根据 样品 溶液 中 目标 物的 峰面 积值 ， 按公式 （3 ）计 算出 样品 中 目标物 的百分 含量 。 100% Y - b V = am （ ） （3 ） 式中： 样 品中 目标 物 的 百分 含量， 用百 分比 （% ）表 示； Y 样 品溶 液 中 目标 物 峰 面积 值 的平 均值 ； b 线 性方 程的 截距 ； V 样品 溶液 的定容 体积 ， 单位为 毫升 （mL）； a 线性 方程 的斜 率; GA/T 7 m 样品 的称 量重 量， 单 位为毫 克（

25、mg）。 8 结果 评 价与 表述 8.1 定性 结果 评价 阳性结 果评 价： 在相 同条 件下进 行测 定时 ， 样 品溶液 中目 标物 与浓 度接 近的 定性用 标准 工作 溶液 中 的目标 物相 比 ， 色 谱峰 保 留时间 一致 （ 相对 误差 在 2.5%之内 ） 、 定 性离 子对 （至 少两 对 ） 一致 ， 且离 子 对丰度比 相对偏 差不超过 表4规 定的范 围 ，样品 空白 无干扰， 则可判 断样品中 检出目标 物。MDAI 、 2-AI 、5-EAPB 的 液相 色谱 图及MRM 色 谱图 参见 附录C 。 表 4 离子 对丰 度比 的最 大 允许相对 偏 差范 围 离

26、子 对丰度比 50% 20% 50% 10% 20% 1 0 % 最大允许相对偏差 20% 25% 30% 50% 阴性结 果评 价： 样品 溶液 中未检 出目 标物 特征 离子 对， 定 性质 控标 准工 作溶 液中检 出目 标物 特征 离 子对， 标准 溶液 空白 无干 扰，则 可判 断样 品中 未检 出目标 物。 8.2 定量 结果 评价 8.2.1 相 对相 差检 验 平行称 取2 份样 品时 ， 测 定 数据按 照公 式 （4） 计算 相 对相差 （RD ）。 12 100% - RD = （4 ） 式中： RD 相 对相 差， 用百 分比 （% ） 表示 ； 1 、 2 两份 样品

27、 平行 定 量测定 的含 量数 值； 两份 样品 平行 定量 测定 的含量 平均 值 ； 当RD 10% 时， 数据 有效 ； 当RD 10% 时，需 要 重 新检验 。 8.2.2 异 常值 检验 平行称 取6 份样 品时 ，测 定 数据按 照公 式 （5） 进行Grubbs 可 疑值 判别 。 i0 i - G= s （5 ） 式中 ： i 可疑 值； 0 6 个 （5 个） 数据 的平 均值； s 6 个 （5 个） 数据 的单 次测定 标准 差； G i Grubbs 统 计值 。 当测定 次数n=6时，G 6 （95 ）=1.822 ； 当测 定次 数n=5时，G 5 （95 ）=1

28、.672。 G iG n （95 ） 时 ，数 据有 效，G i G n （95 ） 时， 应剔 除该 数 据，但 只能 剔除1个 数据 ， 否则本 次测 定无 效 ， 需要重 新检 验。 GA/T 8 8.2.3 定量 结 果计 算 平行称 取 2 份样 品时 ， 以 2 份样 品含 量测 定的 平均 值作为 定量 结果 。 平行称 取 6 份样 品时 ， 以 6 份（5 份 ） 样 品含 量测 定 的平均 值作 为定量 结 果。 8.3 结果 表述 阳性 结 果应 表述 为： 从样 品中检 出 MDAI/2-AI/5-EAPB 成分 。含 量 用 百分 比表 示。 阴性结 果应 表述 为：

29、 从样 品中未 检 出 MDAI/2-AI/5-EAPB 成分 。 8.4 测量 不确 定度 的评 定 与表述 如需提 供测 量不 确定 度， 定量结 果的 不确 定度 评定 与表述 按 GB/T 27418 执行。 GA/T 9 附录 A （资料 性） MDAI、2-AI 、5-EAPB 基 本 信息 MDAI 、2-AI 、5-EAPB 基 本信息 见 表 A.1 。 表A.1 MDAI 、2-AI 、5-EAPB 基 本信 息 中文名称 英文名称 化学式 结构式 CAS 号 5,6- 亚甲二氧基-2- 氨基茚满 MDAI C10H11NO2 132741-81-2 2- 氨基茚满 2-A

30、I C 9H 11N 2975-41-9 乙基氨基丙基苯并呋喃 5-EAPB C 13H 17NO 1823776-22-2 （盐酸盐） GA/T 10 附录 B （资料 性 ） 外标单 点法 样品 提取 操作 参数 外标单 点法 样品 提取 操作 参考参 数见 表 B.1 。 表B.1 外 标单 点法 样品 提取操 作参 考参 数 预分析含量 初次定容体积 mL 稀释倍数 外标单点法定量用 标准工作 溶液浓度 mg/mL 50% 100% 20 21 0.1 30% 50% 20 11 0.1 10% 30% 10 11 0.1 5% 10% 30 - 0.1 2% 5% 20 - 0.1

31、1% 2% 10 - 0.1 GA/T 11 附录 C （资料 性 ） MDAI、2-AI 、5-EAPB 相 关 谱图 C.1 MDAI 、2-AI 和 5-EAPB 的 液相 色谱 图见图 C.1 图 C.3 。 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 mAU 294nm,4nm (1.00) /5.140 图C.1 MDAI 的 液相 色谱 图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0.0 2.5 5.0 mAU 265nm,4nm (1.00) /2.164 2-AI/4.792 图C.2 2-AI 的 液相 色谱 图 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min 0 10 20 30 40 mAU 254nm,4nm (1.00) /2.141 5-EAPB/7.508 图C.3 5-EAPB 的液 相色 谱图 GA/T 12 C.2 MDAI 、2-AI 和 5-EAPB 的 MRM 色 谱图 见图 C.4 图 C.6 。 图C.4 MDAI 的 MRM 色谱 图 图C.5 2-AI 的 MRM 色谱 图 图C.6 5-EAPB 的 MRM 色 谱图