GA T 1612-2019 法庭科学 生物检材中乐果等八种有机磷类农药检验 气相色谱和气相色谱-质谱法.pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物 检材 中 乐果等 八种有机磷 类农药检验 气相色谱 和 气相 色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for eight organophosphorus pesticides including dimethoate in biological samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。

2、请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC1） 提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心 、 山东省公安厅 。 本标准 主要 起草人： 栾玉静 、 杜鸿雁 、 王瑞花 、 董颖、 魏春明、 王爱华 、 任昕昕、 王芳琳、 常靖 、 于忠山 、 高宏 、 宋丽娟 。 GA/T 1 法庭科学 生物 检材 中 乐果等 八种有机磷 类 农药 检验 气相色谱和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物 检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中

3、乐果、氧乐果、马拉硫磷、 对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 的 气相色谱（ GC） 定量检验方法 和 气相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物 检材中 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、 倍硫 磷和 乙拌磷 的定性 分析 和 定量分析。 其他可疑样品 中 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、 甲拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 的定性 分析和 定量分析 可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是 注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括

4、所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物样品进行提、净化及浓缩，采用气相色 谱法进行定 量、 气相色谱 -质谱法进行定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为 定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。 除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 乙酸乙酯（色谱纯

5、） ； b) 环己烷（色谱纯） ； c) 甲醇 ； d) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据标准物质的纯度，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 标准物质溶液， 置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月 。 或采用市售标准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 单一 标准工作 溶液 ： 移取 1.0mg/mL 的 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对 硫磷、甲 GA/T 2 基对硫磷、甲拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 标准物质溶液 各 1mL，分别 用 甲醇 稀释 并定容至 10mL， 混匀 ， 配制成浓度为 0.1mg

6、/mL 的 单一 标准工作 溶 液 ， 密封，置 于 冰箱中冷 藏 保存 。 有效 期 3 个月 。 实验中所用其 他 浓度的单一标准工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质 溶 液用甲醇 稀释得到 。 注： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 玻璃试管 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气 相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 气相色谱仪：配有火焰光度检测器（ FPD）； c) 凝胶渗透 色谱净化浓缩联用仪； d) 电子天平； e) 振荡器； f) 离心机； g) 移液器； h) 浓缩器； i) 匀浆机。 7 操

7、作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取 铰碎（或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g 于具盖离心管中 ，加入乙酸乙酯或二氯甲烷 3.0mL6.0mL， 振荡 5min， 8000r/min 离心 10min，分离有 机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相 ， 置于浓缩器上 45浓缩至干， 残留物 用 甲醇 100L 溶 解 ，作为检材样品提取液供 仪器 分析 。 如需净化，按 7.1.1.2 操作。 7.1.1.2 样品净化 取 7.1.1.1 中两次提取后 合并 的有机相， 用 凝胶渗透

8、色谱仪净化 按 7.1.2.1.1 操作， 浓缩至 1mL，再 置于浓缩器上 45浓缩至干， 残留物 用 甲醇 100L 溶解 ，作为检材样品提取液供 仪器 分析 。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 标准 物质，作为添加样品 （添加样品的浓度为 1.0g/mL（ g） ） ， 与检材样品平行操作，得到空白样品提取 液和添加样品提取液供仪器 分析 。 GA/T 3 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器 条件 7.

9、1.2.1.1 凝胶色谱净化浓缩联用仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等 实际 情况 进行调整 : a) 净化柱： 20mm300mm，填料 为 50.0 g 中性 多孔的交联 苯乙烯二乙烯基苯聚合物或类似物 ； b) 流动相： 环己烷 /乙酸乙酯 （ 体积比 1:1 ）混合溶剂 ； c) 流速： 4.7 mL/min； d) 收集时间： 收集 540 s 900s 的洗 脱液； e) 在线浓缩温度和真空度： 1 区： 40 30.0 kPa； 2 区： 50 25.0 kPa； 3 区： 50 22.0 kPa。 7.1.2.1.2 气相色谱 -质谱 条件 以下为参考条件

10、，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS柱（ 30m0.25mm0.25m）或 等效色谱柱 ； 注： DB-5MS 柱 是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100保持 2min，以 30/min速率升温至 280，保持 17min； c) 进样口温度： 280； d) 传输线温度： 260； e) 载气：氦气； f) 进样方式：分流进样，分流比 10 1； g) 电子轰击能量： 70eV； h) 离子源温度：

11、250； i) 倍增器电压：自动调谐值； j) 柱流量： 1mL/min ； k) 质量 扫描 范围： 40amu450amu ； l) 扫描 方式：全扫描（ Scan） ； m) 目标物 质谱特征离子碎片峰： 见表 1。 表 1 检测目标物 质 谱特征离子碎片峰 名称 质谱特征离子碎片峰（ EI 源） 甲拌磷 m/z 75*、 m/z 121、 m/z 231、 m/z260 乙拌磷 m/z 88*、 m/z 97、 m/z 186、 m/z 274 马拉 硫磷 m/z 125*、 m/z 93、 m/z 158、 m/z 173 乙基 对硫磷 m/z 97*、 m/z109、 m/z 13

12、9、 m/z291 乐果 m/z 87*、 m/z 93、 m/z 125、 m/z229 氧乐果 m/z 156*、 m/z 110、 m/z 213 甲基对硫磷 m/z 109*、 m/z 125、 m/z 263 倍硫磷 m/z 278*、 m/z 109、 m/z 125、 m/z169 注 ： *为定量离子 。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液 及 标准工作溶液，按 7.1.2.1 的 分析条件进样分析。 GA/T 4 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎 （或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0

13、g 2.0g 两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量 相似 基质的空白样品 三 份， 其中 两份分别添加 乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对 硫磷、甲 拌磷、 倍硫磷和 乙拌磷 （ 添加样品中目标物含量应为检材 样品 中目标物含量的 (100 50)%）， 另一份 作为空白样品，与检材 样品平行 操作 ， 得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器 条件 7.2.2.1.1 气相色谱 -质谱 条件 按 7.1.2.1.2规定的条件分析。 7.2.2.1.2 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整

14、 ： a) 检测器： FPD； b) 色谱柱： DB-5柱（ 30m0.25mm0.25m）或 等效色谱 柱 ； 注： DB-5 柱 是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 120保持 1min，以 8/min速率升温至 260， 再 以 30/min速率升温至 280， 保持 3min； d) 进样口温度： 260； e) 检 测器温度： 300 ； f) 载气 ：氮气 ； g) 进样方式：分流进样 ； h) 分流比： 10 1； i) 柱流量： 1.

15、0mL/min。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析 2 3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 2 3 次的目标物保留时间和峰面积值 （用 定量离子 的峰面积进行计 算） ，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； GA/T 5 M 添 添

16、加样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g ） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算 相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（ 2）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (2) 式中： RD相对相差， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两个检材样品平行定量测定的含量数值； X 两个检材样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价

17、8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液 一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰， 则可判断检材样品中检出目标物。 相关谱图参见 附录 A 中 图 A.1图 A.8。 表 1 定性确证时相对 离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50% 20% 50% 10% 20% 10% 允许的相对偏差 20% 25% 30% 50% 8.1.2 阴性结果评价 检

18、材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 GC-MS 分析 ， 八种有机磷类农药 检 出 限参 见附录 A 中 表 A.1。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠 ， 应按 7.2重新提取检验 。 有机磷 类农药 中毒诊断参考资料参见附录 B。 GA/T 6 A A 附 录 A （资料性附录） 有机磷 类农药 相关谱图 及检出 限 A.1 有机磷 类农药 相关谱图 有机磷相关谱图

19、见图 A.1图 A.8。 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 75 121 97 26016 28 47 65 231107 153129 18659 169141 203 214 SPO O S S 图 A.1 甲拌磷质谱图（ m/z 75， 121， 231， 260） 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 14

20、0 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 88 60 97 47 125 142 153 186 274 35 75 109 201 212 229 245160 SPO O S S 图 A.2 乙拌磷质谱图（ m/z 88， 97， 186， 274） 25.0 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 I

21、nten. (x10,000) 29 125 93 173 158 47 14363 79 31 256211111 284238 184 S P O O O O S O O 图 A.3 马拉硫磷质谱图（ m/z 125， 93， 158， 173） GA/T 7 25.0 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 97 109 291 29 139 12581 44 155 63 186 26147 167 218 274246

22、 O N OO P O S O 图 A.4 乙基对硫磷质谱图（ m/z 97， 109， 139， 291） 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 87 93 125 47 5815 42 7930 229143 157109 172 198 SPO O S NH O 图 A.5 乐果质谱图 （ m/z 87， 93， 125， 229） 10 20 30 40 50 60 7

23、0 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 156 110 79 12658 1412815 9547 21318363 128 170 203 SPO O O NH O 图 A.6 氧乐果质谱图（ m/z 156， 110， 213） GA/T 8 25.0 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (

24、x10,000) 109 125 263 79 9347 632815 139 201 246 155 233 O P N O O O O S 图 A.7 甲基对硫磷质谱图（ m/z 109， 125， 263） 25.0 50.0 75.0 100.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 Inten. (x10,000) 278 125109 16993 153794716 63 263 24523118428 216200 O O S P S O 图 A.8 倍硫磷质谱图（ m/z 2

25、78， 109， 125， 169） A.2 生物 检材 中 八 种 有机磷 类 检 出 限 生物 检材 中 八 种有机磷 类 检 出 限见表 A.1。 表 A.1 生物样品中 八 种有机磷的检 出 限 目标物 甲拌磷 乙拌磷 马拉硫磷 乙基对硫磷 乐果 氧乐果 甲基对硫磷 倍硫磷 检出限 g/mL 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 0.5 0.5 1.0 GA/T 9 附 录 B （资料性附录） 有机磷 中毒诊断参考资料 B.1 中毒症状 B.1.1 基本症状 在有机磷中毒中， 瞳孔缩小是 有机磷农药中毒 的重要体征 。 中毒者口腔及呼吸道 会有 较多带 “蒜臭 ” 味的分泌物，严重者

26、出现肺水肿，表现为呼吸困难，不能平卧；烦躁不安，发绀；咳嗽、咯白色或血性 泡沫痰；心率减慢、心音弱，两肺布满哮鸣音及湿性罗音；甚至可发生呼吸衰竭、脑水肿、急性肾功能 衰竭、 急性心力衰竭 。 由于有机磷农药对胃肠黏膜有刺激和平滑肌蠕动增加的作用，经口中毒者还可以有恶心、呕吐、腹 痛、腹泻等消化系统症状。 中、重度中毒者可有小肌束颤动，能发展到四肢及躯干肌束，严重者发生肌无力，甚至呼吸肌麻痹。 在 中枢神经系统症状 方面， 主要为头晕、乏力，重症者神志恍惚，甚至呈现昏迷，阵发性惊厥状态， 严重者发生脑水肿或中枢性呼吸衰竭直至死亡。 B.1.2 急性中毒症 状 急性中毒发病时间与毒物品种、剂量和侵

27、入途径密切相关。经皮肤吸收中毒，一般在接触 2 6d内 发病，口服毒在 10min至 2h内出现症状。一旦中毒症状出现后，病情迅速发展。 急性中毒可分为三级： 轻度中毒 ：有头晕、头痛、恶心、呕吐、多汗、胸闷、视力模糊、无力、瞳孔缩小 ； 中度中毒：除上述症状外，还有肌纤维颤动、瞳孔明显缩小、轻度呼吸困难、流涎、腹痛、腹 泻、步态蹒跚，意识 模糊 ； 重度中毒：除上述症状外，并出现昏迷、肺水肿、呼吸麻痹、脑水肿 。 在急性中毒症状缓解后和迟发性神经病发病前，一般在急性中毒后 24h 96h突然发生死亡，称 “中 间型综合征 ”。其发病机制与胆碱酯酶受到长期抑制，影响神经 -肌肉接头处突触后的功

28、能。死亡前可先 有颈、上肢和呼吸肌麻痹、上肢和呼吸肌麻痹。累及颅神经者，出现睑下垂、眼外展障碍和面瘫。 B.2 中毒死亡机理 有机磷 农药的急性中毒症状大多与胆碱酯酶活 性被抑制有关，可归纳毒蕈碱样症状、烟碱样症状、 中枢神经系统症状 ， 其中 ： 毒蕈碱样症状：这组症状出现最早，主要是副交感神经末梢兴奋所致，类似毒蕈碱作用，表现 为平滑肌痉挛和腺体分泌增加。临床表现先有恶心、呕吐、腹痛、多汗、尚有流泪、流涕、流 涎、腹泻、尿频、大小便失禁、心跳减慢和 瞳孔 缩小 ； 烟碱样症状：乙酰胆碱在横纹肌 神经肌肉接头 处过度蓄积和刺激，使面、眼睑、舌、四肢和全 身横纹肌发生肌纤维颤动，甚至全身肌肉强直性痉挛。患者常有全身紧束和压迫感，而后发生 肌力减退和瘫痪 ； 中枢神经系统症状：中枢神经系统受乙酰胆碱刺激后有头晕、头痛、疲乏、共济失调、烦躁不 安、诡妄、抽搐和昏迷。 GA/T 10 B.3 有机磷 农药 成人中毒致死量 有机磷农药成人中毒致死量见表 B.1。 表 B.1 有机磷 农药成人中毒致死量 农药名称 成人口服致死量 g 甲基对硫磷 0.31.0 乙基对硫磷 0.10.3 甲拌磷 0.1 乐果 2.0 马拉硫磷 60