GA T 1614-2019 法庭科学 生物检材中氯胺酮检验 气相色谱和气相色谱-质谱法.pdf

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1、 ICS 13.130 A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T XXXX-XXXX 法庭科学 生物检材中氯胺酮检验 气相色谱和气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for ketamine in biological samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分

2、技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）归口。 本标准 起草单位： 公安部物证鉴定中心 、 北京市公安司法鉴定中心（一） 。 本标准起草人 ： 王芳琳 、张蕾萍 、 于忠山 、 何毅 、乔静 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材 中氯胺酮 检验 气相色谱 和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材 （尿 、肝、肾 、胃及胃内容 等） 中 氯胺酮的气相色谱（ GC） 定量 检验方法 和气相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材 中氯胺酮的定性 分析和 定量分析 。 其他 可 疑 样 品中 氯胺酮 的定性分 析和定量分析可

3、参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本 文件 的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、 净化及浓缩 ， 采 用 气相 色谱法 定量、 气相色谱 -质谱 法 定性 定量 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度 比 作为定性判 断依据； 以 峰面

4、积 为 定量 依据 ，用外标法或内标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水， 在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括 ： a) 乙醚； b) 三氯甲烷 ； c) 甲醇； d) 1mol/L 盐酸 ： 量取 8.3mL 浓盐酸， 用水 稀释至 100mL； e) 1mol/L 氢氧化钠 ：称取氢氧化钠 40.0g，加水溶 解 并 稀释 至 1000mL； f) 标准溶液： GA/T 2 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ： 根据氯胺酮标准物质的纯度和盐型换算后，称取适量，用甲醇配制 成 1.0mg/mL 氯胺酮 标准物质溶液，

5、置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶 液； 2) 10.0g/mL 标准工作 溶 液： 移取 1.0mg/mL 的 氯胺酮 标准物质溶液 0.1mL，用 甲醇稀释 至 10mL， 混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的标准工作溶液，密封，置于冰箱中 冷藏 保存。有效期 3 个月。 实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准 工作 溶液用甲醇稀释得到 ； 3) 1.0mg/mL 内标溶 液： 根据 内标物 普罗地芬（ SKF525A， 或其他合适内标物 ） 的纯度和盐型换算 后，称取适量，用甲醇配制成 1.0mg/mL 内标 溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期

6、 6 个月。或 采用市售 内标溶液 ； 4) 10.0g /mL 内标 工作 溶液：移取 1.0mg/mL 的内标溶液 0.1mL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇稀释 至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的内标溶液 ，密封， 置于冰箱中冷藏保存。有效期 1 个月 。 实验中所用其他浓度的内标 工作 溶液均由 1.0mg/mL 内标溶液用甲醇稀释得到。 注： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料 包括 ： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪：配有氮磷检测器（ NPD）或电子捕获检测器（ ECD）；

7、b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 离心机； d) 振荡器； e) 浓缩器 ； f) 电子天平； g) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液 萃取 移 取 尿 液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL，或 称取 铰碎的肝 脏 等固体 检材 样品 1.0g 2.0g 于具 盖 离 心管 中。 加 入 1mol/L 氢氧化钠溶液调 pH 值至 9 10， 再加入 乙醚或 三氯甲烷 5.0mL 10.0mL 提取 ， 振荡 10min， 8000r/min 离心 10 min， 分离 有机相 ， 重复提取一次，合并两次提取

8、的有机相， 置于 浓缩 器上 50 下浓缩至干 ， 残留物 用甲醇 50L 100L 溶解， 作为检材样品提取液 供 GC-MS 分析 ， 如需 净化，残留物 按 7.1.1.2 操作。 GA/T 3 7.1.1.2 样品净化 （ 酸碱反提 ） 在 7.1.1.1 提取 的 残留物 中 ，加入水 1mL、 200L 1mol/L 盐酸 溶液， 振 荡 2min， 8000r/min 离心 2min， 移取 水相， 在水相中加入 环己烷， 振荡 5min， 8000r/min 离心 2min，弃去环 己 烷 ， 水相中 加入 1 mol/L 的 氢氧化钠 溶液调 pH 值至 9 10， 再加入

9、乙醚或 三氯甲烷 6.0mL， 振 荡 10min， 8000r/min 离心 10min， 分离 有机相 ， 置于 浓缩器上 50 下浓缩至干 。 残留物用 甲醇 50L 100L 溶解 ， 作为检材样品提取液 供 GC-MS 分析 。 7.1.1.3 质控 样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中 ， 一份 作 为空白样品，一份添加 氯胺酮 标准 物质 作为添加样品 （ 添加样品浓度为 1.0g/mL(g)） ，混匀 ， 与 检材 平行操作 ，得到空白样品提取液和 添 加 样品提取液，供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条

10、件 （ 气相色谱 -质谱 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： DB-5MS 毛细色谱柱 （ 30m 0.25mm 0.25m） 或等效色谱柱 ； 注 ： DB-5MS 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的 认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程 ： 100 保持 2min， 以 30 /min 速率 升温至 280 ，保持 17min； c) 进 样 口 温度： 280 ； d) 传输线温度： 230 ； e) 离子源温度： 200 ； f)

11、 进样方式：分流进样，分流比 5:1 50:1； g) 载气： 氦气； h) 柱流量： 1mL/min 2mL/min； i) 质量扫描范围： 40amu 450amu； j) 扫描方式： 全扫描（ SCAN） 。 7.1.2.2 进样 分别吸取 检材、 空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 分析条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取 尿 液等液体样品 1.0mL 2.0mL， 或称取铰碎的 肝脏等 固体 样品 1.0g 2.0g两份 （若 采用内标法 ， 则添 加 内标 SKF525A 1.0g，混匀 ）， 按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基

12、质的空白样品三份，其中两份添加 氯胺酮 标准物质作为添加样品（添加样品中目标 物含量应为检材样品中目标物含量的 (100 30)% ，若 采用内标法 ， 还 需 添加 内标 SKF525A 1.0g，混匀 ）， 另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供 GC-MS分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 GA/T 4 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器： NPD 或 ECD； b) 色谱柱： DB-1 毛细色谱柱 （ 30m 0.32mm 0.25m）或等效色谱柱

13、； 注 ： DB-1 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 180 保持 1min，以 10 /min 速率升温至 280 ，保持 10min； d) 进样口温度： 280 ； e) 检测器温度： 300 ； f) 载气：氮气； g) 进样方式：分流进样； h) 分流比： 5:1 50:1； i) 柱流量： 1mL/min 2mL/min。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱 条件 按 7.1.2.1 规定的 条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸

14、取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液 （若采用内标法， 还需吸取内标工作溶液 ） ， 按 7.2.2.1 的分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算 含量 7.2.3.1.1 外标 -单点 法 记录各样品提取液平行进样 2 3 次的目标物保留时间和峰面积值，按 公式（ 1）计算含量 ： 添样添 样添样 VMA VMAW = .（ 1） 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加

15、样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g ） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容 体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.1.2 内标 -单点 法 记录各样品 提取液平行进样 2 3 次的目标物 和内标物 保留时间和峰面积值，按公式（ 2）计算 校正 因子，按公式（ 3）计算 含量 ： GA/T 5 标内 内标 AM AMf = . (2) 式中： f 校正因子； M标 添加样品中目标物添加量，单位为微克 (g)

16、； A内 添加样品中 内标物峰面积平均值； M内 添加样品中内标物添加量，单位为微克 (g)； A 标 添加样品中 目标物峰面积平均值。 样内 内样 MA MAfW = . (3) 式中： W 检材 样品中目标物含量，单位为微克每克 (g/g)或微克每毫升（ g/mL)； f 校正因子； A 样 检材 样品中目标物峰面积平均值； M 内 检材样品中 内标物添加量，单位为微克 (g)； A 内 检材样品提取液中 内标物峰面积平均值； M 样 检材 样品的取样量，单位为克 (g)或毫升（ mL)。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品 中目标物的 含量，按公式 （ 4）

17、 计算相对相差： %100X XXRD 21 = . (4) 式中： RD相对相差 ，用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两份案件样品平行定量测定的含量数值； X 两份 检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳 性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液 一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰， 则可判断检材样品中检出目标物。 相关图谱参见

18、附录 A。 表 1 特征 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% GA/T 6 8.1.2 阴性结果评价 在相同条件下进行样品测定时， 检材样品 中 未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中 出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 本方法检 出限参见附录 A中表 A.1。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量 两 份检材的平均值计算。如果检材样品中目 标物含量的 RD20%，定量数据不可靠 ， 应按 7.2

19、重新提 取检验。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 氯胺酮 的 相关图谱 及数据 A.1 相关谱图 氯胺酮相关色谱图和质谱图见图 A.1 图 A.3。 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 min - 4.0 - 3.0 - 2.0 - 1.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 uV (x1,00 0) Chroma togr am 6.680/ 2305 3 6.680/ 2305 3 图 A.1

20、 氯胺酮 的 GC/NPD 谱 图 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5 1 5 . 0 1 7 . 5 2 0 . 0 m i n 0 . 0 1 . 0 2 . 0 3 . 0 4 . 0 5 . 0 uV ( x 1 0 , 0 0 0 ) C h r o m a t o g r a m 6. 136 /7477 7 6. 136 /7477 7 图 A.2 氯胺酮 的 GC/ECD 谱 图 GA/T 8 25 50 75 100 125 150 175 200 225 m/z 0 250 500 750 Int. 180 209 152 30 138 166115102 42 237125 1947551 89 O Cl NH 图 A.3 氯胺酮的质谱图 A.2 检出限 生物检材 中氯胺酮 的检出限 见表 A.1。 表 A.1 生物检材 中氯胺酮的检出限 样 品 检出限 GC GC-MS 血 液 g/mL 0.05 0.1 组 织 g/g 0.1 0.5 _