DB63 T1714-2018 宁夏枸杞组织培养育苗技术规范.pdf
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1、ICS 65.020.01 B61 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 17142018 宁夏枸杞组织培养育苗技术规范 2018 - 12 - 26 发布 2019 - 03 - 20 实施 青海省市场监督管理局 发布 DB63/T 17142018 I 前 言 本标准的编写符合GB/T 1.1-2009给出的规则。 本规范由中国科学院西北高原生物研究所提出并归口。 本规范起草单位:中国科学院西北高原生物研究所。 本标准起草人:王莉、李毅、胡延平、王溪、王建科、王均、石琳、杨文韬。 DB63/T 17142018 1 宁夏枸杞组织培养育苗技术规范 1 范围 本标准规定了宁夏枸杞( Lyc
2、ium barbarum L.)组织培养快繁育苗中的术语和定义、一般要求,描 述了前期准备、外植体处理和培养方法,给出了宁夏枸杞组织培养育苗不同阶段的技术内容。 本标准适用于宁夏枸杞组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件,本标准使用的其它术语
3、、定义见附录A规定。 3.1 不定苗 adventiti ous shoots 离体条件下由植物器官或组织形成的苗。 3.2 再生植株 Plantlet 不定苗生根后形成的完整植株。 3.3 预培养 pre-culture 在对外植体进行诱导培养前,先在无激素或无附加物的培养基上进行的第一个培养过程。 4 一般要求 4.1 本标准所使用的试剂纯度不低于附录 B 的规定。 4.2 在配制溶液和培养基母液时使用不低于 GB/T 6682 规定的二级水,配制培养基使用不低于三级水。 当溶液、母液和培养基等出现浑浊、沉淀或出现微生物污染时,须重新配制。 4.3 本标准中所用溶液以%表示的,除乙醇为体积
4、分数外,均为质量分数。 DB63/T 17142018 2 5 前期准备 5.1 培养基母液配制 依据改良MS培养基的组成,即附录C的规定。按照10倍量配制大量元素母液,按照100倍量配制微量 元素母液和有机元素母液,按照200倍量配制铁盐母液。将配制好的母液分别装入玻璃瓶中,铁盐母液 须使用棕色玻璃瓶,分别贴上标签,注明母液名称、配制倍数及日期,贮存在2 4 的冰箱中。 5.2 植物生长调节剂配制 植物生长调节剂选用附录B,单独配成0.1 mg/ml的溶液。分别贴上标签,注明名称、配制浓度和日 期,贮存在2 4 的冰箱中。 5.3 其他试剂配制与使用 5.3.1 分别配制 0.1%的氯化汞、
5、70%乙醇、10 mg/ml 柠檬酸钠、1 0 mg/ml L-抗坏血酸和 10 mg/ml 肌 醇、1M 氢氧化钠和 1M 盐酸溶液,分别贴上标签,注明名称、配制浓度和日期,贮存在 2 4 的冰 箱中。 5.3.2 蔗糖和酸水解酪素按照培养基配方直接称量。 5.3.3 琼脂粉用量每批次需进行预备试验确定,在培养基中的最终浓度在 0.27%1.30%之间。 5.4 培养基配方 按照培养的目标和不同阶段,培养基分为预培养基、诱导培养基、增殖培养基和生根培养基,其配 方如下: 预培养基:MS 基础培养基+6-BA0.2 mg/L0.3 mg/L +2,4-D2.0 mg/L+CH300 mg/L+
6、Vc2.0 mg/L+ 蔗糖 3%+琼脂粉; 诱导培养基:MS 基础培养基+6-BA3.0 mg/L+NAA0.0 m g/L2.0 mg/L+ CH300 mg/L+V c2.0 mg/L+ 蔗糖 3%+琼脂粉; 增殖培养基:MS 基础培养基+6-BA0.0 mg /L1.0 mg/L+ CH300 mg/L+Vc2.0 mg/L+蔗糖 3%+琼 脂粉; 生根培养基:MS 基础培养基+6-BA0.0 mg /L1.0 mg/L+ CH300 mg/L +蔗糖 3%+琼脂粉。 5.5 培养基的制备 培养基按照LY/T 1882之4.2.1的方法,并依据本标准附录C和5.4的配方要求配制,pH调
7、整为5.6 5.8。灭菌、保存按照LY/T 1882之4.2.2和4.2.3的方法。 6 外植体处理方法 6.1 外植体的获取 每年5月7月剪取无病、虫危害当年生嫩枝条。 6.2 外植体消毒 将去除叶片的嫩枝用流水冲洗干净后,剪成包 含2个3个叶腋的段,在超净工作台上用70%的酒精 漂洗茎段30s,再用0.1%的氯化汞消毒8 min 10 min,最后用无菌水冲洗4次6次。 DB63/T 17142018 3 7 培养方法与程序 7.1 外植体预培养 将无菌茎段接种于预培养基上,茎段下端应插入培养基。在温度为22 25 ,光照强度2000 Lux3000 Lux光照条件下培养2周。 7.2 腋
8、芽诱导培养 将深绿色、表面膨大、切口处有淡黄色愈伤组织出现的茎段外植体平放到诱导培养基上,茎段平放 入培养基上,在温度22 25 、光照强度2000 Lux30 00 Lux、光照时间12 h/d 14 h/d的条件 下培养2周3周,形成腋芽。 7.3 不定苗诱导分化培养 将新形成的腋芽切下, 转接至诱导培养基上, 在温度为22 25 , 光照强度3000 Lux5000 Lux、 光照时间14 h/d16 h/d的条件下培养。培养3周4周后,腋芽在基部、叶腋处形成不定芽,逐渐生长 形成不定苗及不定苗丛。 7.4 不定苗增殖培养 将生长至1.0 cm2.0 cm的丛生不定苗从基部进行分割, 转
9、接于增殖培养基中。 在温度22 25, 光照强度为5000 Lux10000 Lux、光照时间为 14 h/d16h/d条件下培养4周。高度不足2.0 cm的不定 苗继代到增殖培养基培养,高度大于2.0 cm的不定苗进行生根培养。 7.5 生根培养 将高度大于2.0 cm丛生苗进行单株分离,视高度切段2.0 cm3.0 cm后接种到生根培养基中,在温 度22 25 ,光照强度3000 Lux5000 Lux、光照时间为16 h/天的条件下进行培养10 d14 d , 基部生长出健壮根,形成再生植株后进行移栽。 DB63/T 17142018 4 A A 附 录 A (资料性附录) 植物组织培养
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