DB42 T 671-2010 食用菌菌种质量鉴定技术规程.pdf
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1、ICS 67.080.20B61湖 北 省 地 方 标 准DB42DB42/T 671 2010食 用 菌 菌 种 质 量 鉴 定 技 术 规 程 Regulation of qaulity identification for edible fungi spawn 2010-12-17发 布 2011-01-18实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB42/T 671-2010 I 前 言本 标 准 由 华 中 农 业 大 学 提 出 。本 标 准 起 草 单 位 : 华 中 农 业 大 学 植 物 科 技 学 院 , 农 业 部 微 生 物 产 品 质 量 监 督 检 验
2、 测 试 中 心 ( 武 汉 ) ,湖 北 省 食 用 菌 工 程 技 术 研 究 中 心 。本 标 准 主 要 起 草 人 : 边 银 丙 、 王 卓 仁 、 樊 晓 琳 、 李 维 琳 、 肖 扬 、 徐 章 逸 。 DB42/T 671-2010 1 食 用 菌 菌 种 质 量 鉴 定 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 食 用 菌 菌 种 质 量 鉴 定 技 术 规 程 的 术 语 和 定 义 、 鉴 定 技 术 要 求 、 菌 种 送 样 与 留 样 、 菌种 质 量 要 求 、 菌 种 质 量 鉴 定 方 法 、 菌 种 质 量 的 判 定 、 菌 种 标 签 、 包
3、装 、 保 藏 、 运 输 和 检 验 报 告 。本 标 准 适 用 于 湖 北 省 主 要 栽 培 食 用 菌 : 香 菇 (Lentinula edodes)、 黑 木 耳 (Auriculariaauricula)、 双 孢 蘑 菇 (Agaricus bisporus)、 平 菇 (Pleurotus ostreatus)、 白 灵 菇 (Pleurotusnebrodensis)、 杏 鲍 菇 (Pleurotus eryngii var.eryngii) 的 母 种 ( 一 级 菌 种 ) 、 原 种 ( 二 级 菌 种 )和 栽 培 种 ( 三 级 菌 种 ) 的 质 量 鉴 定
4、 。2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 , 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 , 其 最 新 版 本 ( 包 括 所 有 的 修 改 单 ) 适 用 于 本 文 件 。GB/T 12728-2006 食 用 菌 术 语GB 19169 黑 木 耳 菌 种GB 19170 香 菇 菌 种GB 19171 双 孢 蘑 菇 菌 种GB 19172 平 菇 菌 种NY 862 杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 菌 种NY/T 528-20
5、02 食 用 菌 菌 种 生 产 技 术 规 程NY/T 1097-2006 食 用 菌 菌 种 真 实 性 鉴 定 酯 酶 同 工 酶 法NY/T 1730-2009 食 用 菌 菌 种 真 实 性 鉴 定 ISSR法NY/T 1743-2009 食 用 菌 菌 种 真 实 性 鉴 定 RAPD法NY 5099 无 公 害 食 品 食 用 菌 栽 培 基 质 安 全 技 术 要 求 NY/T 5333-2006 无 公 害 食 品 食 用 菌 生 产 技 术 规 范 食 用 菌 菌 种 管 理 办 法 ( 2006年 3月 27日 农 业 部 令 第 62号 )3 术 语 和 定 义下 列
6、术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。3.1 菌 种 纯 度 culture purity指 某 一 菌 种 只 含 有 特 定 品 种 的 菌 丝 体 。3.2 菌 种 活 力 culture vigour 菌 种 活 力 包 括 菌 种 萌 发 、 定 植 能 力 和 吃 料 能 力 。 DB42/T 671-2010 2 3.3 待 检 菌 种 tested culture指 由 受 检 单 位 或 委 托 方 提 供 的 需 要 检 验 机 构 进 行 检 验 的 菌 种 , 包 括 母 种 、 原 种 和 栽 培 种 。3.4 标 准 菌 种 standard culture
7、指 由 法 定 菌 种 保 藏 机 构 进 行 保 藏 的 、 菌 种 来 源 明 确 且 种 性 稳 定 、 活 力 正 常 的 菌 种 , 包 括 标 准 母 种 、标 准 原 种 和 标 准 栽 培 种 。4 鉴 定 技 术 要 求4.1 鉴 定 技 术 人 员 应 符 合 农 业 部 2006 年 食 用 菌 菌 种 管 理 办 法 的 要 求 。4.2 鉴 定 单 位 资 质应 符 合 农 业 部 2006 年 食 用 菌 菌 种 管 理 办 法 的 要 求 。4.3 鉴 定 场 地 的 选 择鉴 定 场 地 所 处 的 环 境 应 不 影 响 检 验 结 果 的 有 效 性 或 不
8、 对 其 所 要 求 的 测 量 准 确 度 产 生 不 利 的 影 响 。检 验 场 地 的 检 验 工 作 区 域 、 能 源 、 采 光 、 控 温 、 通 风 等 应 该 保 证 有 利 于 正 常 检 验 工 作 的 进 行 。4.3.1 显 微 镜 观 察 室室 内 要 求 干 燥 、 通 风 、 环 境 卫 生 洁 净 。 显 微 镜 所 在 试 验 台 有 局 部 照 明 , 远 离 水 源 。4.3.2 微 生 物 培 养 室室 内 应 干 燥 、 通 风 , 具 有 紫 外 灯 等 消 毒 条 件 , 与 外 间 安 全 隔 离 。4.3.3 生 化 分 析 室 具 有 检
9、 测 食 用 菌 生 物 学 特 性 和 各 项 理 化 指 标 的 实 验 条 件 。 分 析 用 药 剂 放 置 于 药 剂 橱 中 , 药 剂 橱 放在 人 员 进 出 或 操 作 时 不 易 靠 近 的 阴 凉 地 方 , 避 免 阳 光 直 射 。 电 烘 箱 、 高 速 离 心 机 等 设 备 , 应 远 离 药 剂橱 , 无 菌 操 作 台 远 离 空 调 。 保 持 周 围 环 境 卫 生 , 干 燥 , 注 意 通 风 。4.3.4 分 子 生 物 学 实 验 室分 子 实 验 室 分 为 核 酸 检 测 区 (试 剂 贮 存 和 准 备 区 , 样 品 粉 碎 区 , 核
10、酸 制 备 区 , 扩 增 区 , 产 物 分 析区 ), 蛋 白 质 检 测 区 ( 蛋 白 质 分 离 纯 化 区 , 蛋 白 质 检 测 区 ) 和 其 他 区 域 设 置 洗 涤 消 毒 室 ( 洗 涤 、 消 毒 、制 备 纯 水 和 /或 双 蒸 水 、 制 冰 等 ) 、 高 速 /超 高 速 离 心 机 室 、 低 温 /超 低 温 冰 箱 室 等 3 个 区 。 各 区 的 工 作服 、 实 验 用 具 和 实 验 记 录 本 应 区 分 标 记 , 不 能 混 用 。4.3.5 栽 培 场 所 和 栽 培 基 质栽 培 场 所 应 符 合 NY/T 5333-2006 的
11、要 求 。 栽 培 基 质 应 符 合 NY 5099 的 要 求 。5 菌 种 送 样 与 留 样 菌 种 送 样 时 同 一 待 检 菌 种 应 不 少 于 4 支 (瓶 、 袋 )。 检 验 机 构 应 将 样 品 分 为 A、 B 两 份 , 每 份 2 支 (瓶 、袋 )以 上 , 其 中 1 份 送 检 , 另 1 份 留 样 备 查 。 留 样 菌 种 应 于 4 6 下 贮 存 , 贮 存 时 间 应 符 合 GB 19169、GB 19170-2003、 GB 19171、 GB 19172、 NY 862 的 规 定 。 DB42/T 671-2010 3 6 菌 种 质
12、量 要 求6.1 菌 种 种 性 质 量 要 求6.1.1 感 官 特 性黑 木 耳 菌 种 应 符 合 GB 19169 规 定 的 质 量 要 求 。香 菇 菌 种 应 符 合 GB 19170 规 定 的 质 量 要 求 。双 孢 蘑 菇 菌 种 应 符 合 GB 19171 规 定 的 质 量 要 求 。平 菇 菌 种 应 符 合 GB 19172 规 定 的 质 量 要 求 。杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 菌 种 应 符 合 NY 862规 定 的 质 量 要 求 。6.1.2 生 物 学 特 性 表 1 菌 种 生 物 学 特 性 的 质 量 要 求 项 目 质 量 要 求母 种 菌
13、 丝 生 长 速 度 黑 木 耳 菌 种 、 香 菇 菌 种 、 双 孢 蘑 菇 菌 种 、 平 菇 菌 种 、 杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 菌种 应 依 次 符 合 GB 19169、 GB 19170、 GB 19171、 GB 19172、 NY 862 的质 量 要 求原 种 、 栽 培 种 菌 丝 生 长 速度 黑 木 耳 菌 种 、 香 菇 菌 种 、 双 孢 蘑 菇 菌 种 、 平 菇 菌 种 、 杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 菌种 应 依 次 符 合 GB 19169、 GB 19170、 GB 19171、 GB 19172、 NY 862 的质 量 要 求拮 抗 现 象 采
14、用 PDA 琼 脂 培 养 基 , 将 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 进 行 对 峙 培 养 。 待 两 个 菌落 交 接 后 , 再 继 续 培 养 10d 后 观 察 。 如 果 交 接 处 出 现 明 显 的 拮 抗 线 、 隔离 带 或 隆 起 成 栅 栏 状 , 即 为 拮 抗 反 应 , 应 判 定 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 属 于不 同 的 菌 株 或 品 种 ; 如 果 没 有 表 现 出 拮 抗 反 应 , 则 应 结 合 其 它 方 法 进 行判 断 菌 丝 生 长 温 度 范 围 应 符 合 黑 木 耳 ( 636) 、 平 菇 (335) 、 香 菇 (
15、532) 、 双 孢 蘑 菇 (530) 、白 灵 菇 (532) 、 杏 鲍 菇 (533) 的 温 度 范 围 要 求 , 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种相 差 不 应 超 过 2菌 丝 生 长 最 适 温 度 应 符 合 黑 木 耳 (262) 、 平 菇 (252) 、 香 菇 (232) 、 双 孢 蘑 菇 (241) 、杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 (251) 的 温 度 范 围 要 求 , 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 相 差 不 应超 过 2菌 丝 生 长 最 适 pH 值 应 符 合 香 菇 pH5.0-6.0、 黑 木 耳 pH5.0-6.5、 平 菇 和 白 灵
16、菇 pH5.5-6.5、 双孢 蘑 菇 pH6.5-7.0、 杏 鲍 菇 pH6.5-7.5 的 pH 范 围 要 求 , 待 检 菌 种 与 标 准 菌种 最 适 pH 相 差 不 应 超 过 0.56.1.3 双 孢 蘑 菇 酯 酶 同 工 酶应 符 合 GB 19171的 质 量 要 求 。6.1.4 DNA指 纹 图 谱 按 照 NY/T 1730-2009、 NY/T 1743-2009规 定 的 方 法 进 行 。 统 计 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 的 DNA条 带 ,计 算 相 似 系 数 。 若 相 似 系 数 低 于 80%, 则 判 定 两 者 为 不 同 菌 株
17、 ; 若 相 似 系 数 大 于 80%, 则 应 结 合 其 它方 法 进 行 判 断 。6.1.5 农 艺 性 状 DB42/T 671-2010 4 表 2 菌 种 农 艺 性 状 的 质 量 要 求项 目 质 量 要 求菌 种 萌 发 定 植 能 力 母 种 、 原 种 转 接 及 栽 培 种 播 种 后 应 在 24h 之 内 萌 发定 植结 菇 转 潮 能 力 ( 双 孢 蘑 菇 ) 覆 土 后 12d16d 开 始 出 菇 , 18d22d 采 收 , 每 潮 间隔 7d10d生 物 学 效 率 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 的 差 异 值 应 不 超 过 5%第 1 潮
18、和 第 2 潮 菇 的 产 量 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 之 间 应 不 存 在 显 著 性 差 异菇 ( 耳 ) 形 ( 包 括 脉 纹 多 少 、 皱 缩 程 度 ) 、 质 地 、 色 泽 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 应 没 有 明 显 差 异菇 盖 直 径 和 厚 度 、 菇 柄 长 度 和 直 径 ; 耳 片 大 小和 厚 度 待 检 菌 种 与 标 准 菌 种 之 间 应 不 存 在 显 著 性 差 异6.2 菌 种 纯 度 质 量 要 求黑 木 耳 菌 种 应 符 合 GB 19169 规 定 的 质 量 要 求 。香 菇 菌 种 应 符 合 GB 19170
19、规 定 的 质 量 要 求 。双 孢 蘑 菇 菌 种 应 符 合 GB 19171 规 定 的 质 量 要 求 。平 菇 菌 种 应 符 合 GB 19172 规 定 的 质 量 要 求 。杏 鲍 菇 和 白 灵 菇 菌 种 应 符 合 NY 862 规 定 的 质 量 要 求 。凡 是 含 有 细 菌 、 放 线 菌 、 霉 菌 、 螨 虫 、 线 虫 等 生 物 及 其 代 谢 物 的 菌 种 应 判 定 为 不 合 格 菌 种 。 6.3 菌 种 活 力 质 量 要 求6.3.1 菌 丝 萌 发 、 定 植 能 力菌 丝 应 在 24h 以 内 萌 发 、 定 植 。6.3.2 菌 丝
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