DB53 T 903-2019 金钗石斛组培育苗技术规程.pdf

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1、 DB53/T 9032019 金钗石斛组培育苗技术规程 2019 - 03 - 01 发布 2019 - 06 - 01 实施 ICS 65.020 B 38 云南省地方标准 云南省市场监督管理局 发布 DB53/T 9032019 I 前 言 本标准按照GB/T1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由云南省德宏热带农业科学研究所提出。 本标准由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。 本标准起草单位：云南省德宏热带农业科学研究所。 本标准主要起草人：高燕、白燕冰、李泽生、李桂琳、姜艳、罗凯、周侯光、姚春、李薇莎。 DB53/T 903201

2、9 1 金钗石斛组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了金钗石斛 （ Dendrobium nobile Lindl.）组培育苗的组培苗生产条件、培养基配制、 外植体选择及处理、接种及瓶苗生产、假植苗培育、包装、标志与运输等要求。 本标准适用于金钗石斛组培苗工厂化生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB53/T 623-2014 “魔帝”系及“肉饼”系兜兰盆花生产技术规程 3 组培苗生产条件 3.1 组培室 组培室必须配备灭菌室、储藏室、接种

3、室、培养室等组培生产的基本条件。灭菌室用于接种工具和 培养基消毒；储藏室用于灭菌好的培养基储藏；接种室用于接种材料消毒、接种、容器苗转接；培养室 用于容器苗培养。 3.2 设备 组培育苗设备有高压灭菌锅、超净工作台、电热消毒器，冰箱、电子天平（精度0.000 1）、电子 称（精度0.01）、空调、臭氧发生器、除湿机等。 玻璃器皿：量筒、容量瓶、烧杯、培养瓶等。 3.3 试剂 培养基组成试剂包括：硝酸钾、硝酸铵、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、无水氯化钙、七水硫酸亚铁、 乙二胺四乙酸二钠、一水硫酸锰、七水硫酸锌、硼酸、碘化钾、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、甘氨酸、盐 酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇。 外植体

4、消毒试剂包括：次氯酸钠、酒精、消毒液等。 酸碱调节试剂包括：盐酸、氢氧化钠。 3.4 添加物 添加物包括马铃薯和香蕉。 4 培养基配制 4.1 培养基组成 DB53/T 9032019 2 培养基为改良的MS（Murashige和Skoog，1962）基本培养基，具体配方参见附录A。 4.2 母液配制 母液用蒸馏水或超纯水配制，配制方法见附录A。大量元素母液室温密封保存，铁盐、微量元素、 有机附加物母液置于4 保存，植物生长调节剂避光保存于4 条件下。母液如有沉淀或有微生物和藻 类生长，应废弃不用。 4.3 培养基配制 培养基配制要求如下： a)根据所需培养基配方用量，按比例吸取母液放入烧杯，

5、按附录A称取琼脂粉和蔗糖用纯净水加热 充分溶解，有机添加物要去皮打浆，加入至容器内用纯净水定容后，搅拌均匀。 b)用1.0 mol/L盐酸或1.0 mol/L氢氧化钠调整培养基酸碱度值为pH 5.8。 c)培养基要趁热分装到培养器皿内，及时密封。 4.4 培养基及蒴果消毒 4.4.1 培养基消毒 培养基消毒要求如下： a)将分装并密封好的培养基放入高压消毒锅内消毒。 b)加热至0.11 MPa压力下，温度121 下，灭菌20 min。 c)关闭电源，自然冷却至压力表指针降至0 时，开锅取出培养基。 4.4.2 蒴果消毒 流水冲洗20 min30 min,用0.1 %的洗洁精或洗衣粉溶液漂洗，用

6、自来水冲洗干净，纯净水冲洗2 次3 次，置于玻璃瓶中备用。在超净工作台上用75 %的酒精浸泡消毒60 s80 s，放入10次氯酸钠 溶液中轻轻摇动，消毒15 min20 min，用无菌水清洗5 次6 次，用无菌滤纸吸干蒴果表面水分，或 用酒精灯烘烤蒴果表面至干燥。 4.5 培养基储藏 经过灭菌的培养基，及时转运至储藏室储藏，放置3 d后，无污染培养基在7 d内使用完毕。 5 外植体选择及处理 5.1 外植体选择 选择优质高产、抗性强、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害、无机械损伤的母株,采集成熟未开 裂的蒴果。 5.2 采集时间 10 月11 月选择晴天的早上露水干后采集蒴果。采集的蒴果加标签，

7、标明母株编号、采集地点、 采集时间等。蒴果若要长途运输或储藏，宜用保湿材料包扎。未用的蒴果应放入密封容器中置于4 保 存，保存时间不应超过30 d。 DB53/T 9032019 3 6 接种及瓶苗生产 6.1 接种前准备 6.1.1 接种前，接种人员用洗洁剂洗手，然后换鞋、工作服、带上口罩、帽子方可进接种室。 6.1.2 开启超净工作台紫外灯杀菌 20 min30 min。接种时，关闭紫外灯，开启风机，同时开启电热 消毒器，并加热至（3002）。 6.1.3 接种工具、器皿、纸经高温灭菌，镊子、刀片、支架也可用酒精灯灼烧消毒。 6.1.4 超净工作台使用前，用 75酒精擦台面和玻璃挡板，照明

8、灯、紫外灯及超净工作台每星期用消 毒液擦洗一次。 6.1.5 母瓶和培养基容器用 75酒精擦净表面后放入超净工作台。 6.2 瓶苗生产 6.2.1 培养条件 培养室温度为22 28 ，光照强度为1600 Lx22 00 Lx，每天光照时间为8 h12 h。 6.2.2 种子萌发培养 将消毒好的蒴果置于无菌的过滤纸或接种器皿中，切开蒴果，将种子均匀播撒于萌发培养基表面， 培养50 d后，形成原球茎。 6.2.3 增殖培养 将获得的原球茎均匀接种到增殖分化培养基上，培养60 d后，形成分化苗。 6.2.4 继代培养 将获得的分化苗分割，单芽接种到继代培养基上，培养60 d后，形成继代苗。 6.2.

9、5 壮苗生根培养 将获得的继代苗分割单芽，单芽株高2 cm接入继代培养 基中培养，单芽株高2 cm 接入壮苗生 根培养基中培养，接种标准：650 mL组培瓶每瓶接种18株20株，240 mL组培瓶每瓶接种10株12株， 培养50 d70 d后即可炼苗。 6.2.6 瓶苗炼苗 将株高4 cm以上的生根瓶苗置于遮光率为 85， 温度25 30 的温室或荫棚下炼苗20 d30d。 6.2.7 瓶苗质量分级 在符合综合控制指标要求的前提下，合格生根瓶苗以苗高、茎粗、根数指标确定，质量等级分为 级、级分级标准见表1 。 7 假植苗培育 7.1 基质 假植苗基质应选用沥水、透气性好的基质，如刨花、锯木渣等

10、，用杀菌剂消毒处理。 DB53/T 9032019 4 表1 金钗石斛组培瓶苗质量分级表 苗木等级 级苗 级苗 种类 茎粗 cm 苗高 cm 根数 茎粗 cm 苗高 cm 根数 综合控制指标 生根瓶苗 2.5 5.0 5 1.52.5 3.05.0 25 1.来自品种纯正，纯度 100%； 2.叶色浓绿舒展，叶片无坏死斑， 无畸形叶； 3.无污染、无烂茎、无烂根； 4.根系生长良好，分布均匀，舒展 不卷曲。 7.2 育苗大棚 用遮光率85的遮荫网搭建育苗大棚，离地苗床高60 cm80 cm，宽100 cm120 cm，长以地形而 定，苗床之间距离50 cm。 7.3 假植时间 全年均可进行瓶苗

11、假植，以10月至翌年5月为瓶苗最佳假植时间。 7.4 瓶苗处理 将瓶中的幼苗小心取出，洗净附着在根上的培养基，放入50多菌灵可湿性粉剂1 000倍液中浸泡5 min10 min，捞出放入透气的容器内，均匀摊开，置阴凉通风处晾干。 7.5 假植 假植前5 d7 d，将基质平铺于苗床上，厚度6 cm8 cm，用0.1%高锰酸钾或50多菌灵可湿性粉 剂1 000倍液等消毒处理。按3株/丛，株行距5 cm 5 cm假植，根不能裸露在基质表面，假植后浇透定 根水。从出瓶到假植完毕，不应超过3 d。 7.6 假植苗管理 7.6.1 光照管理 采用遮光率为85的遮阳网，注意通风换气。 7.6.2 温度管理

12、适宜生长温度为20 28 ，温度32 时，要注意降温；温度10 时，采取保温措施。 7.6.3 水分管理 假植后，每天早晚各浇水 1 次，幼苗成活后，保持基质湿润。 7.6.4 施肥管理 假植 7 d10 d，用氮磷钾平衡肥料稀释成 3 000 倍液进行叶面喷施，15 d 施一次。 7.6.5 病虫害防治 DB53/T 9032019 5 假植苗采用75百菌清600 倍液或65代森锰锌500倍液交替使用，每月喷药1 次2 次；出现病 害时，连续喷2次3次，时间间隔为5 d。 7.6.6 出圃 假植苗培育90 d120 d，抽新芽苗高4 cm以上，即可出圃。 8 包装、标志与运输 8.1 运输前

13、处理 假植苗出圃前1 d2 d不浇水，小心拔出生根苗，每捆10丛包装，每丛不少于3株。 8.2 包装 瓶苗或假植苗包装方法参照DB53/T 623-2014规程执行。 8.3 标志 在包装箱上加贴标签，注明品种名称、等级规格、数量、执行标准号、生产单位、商标。 8.4 运输 瓶苗或假植苗包装完毕后，紧密排列在运输箱或纸箱内，分层放置，避免倒置和挤压，长途运输过 程中的温度宜为20 28 ，最高温不宜超过32 ，湿度保持在6070。 假植苗应存放在阴凉、 通风的环境，运到目的地后及时移栽，宜在3 d内移栽完。 DB53/T 9032019 6 附 录 A （资料性附录） 金钗石斛组织培养培养基配

14、方 表 A.1给出了金钗石斛组织培养培养基配方。 A.1 金钗石斛组织培养培养基配方 药品类别 药品名称 种子萌发培养基 mg/L 增殖培养基 mg/L 继代培养基 mg/L 壮苗生根培养基 mg/L KNO3 1 140 1 425 1 900 950 NH4NO3 990 1 237.5 1 650 825 MgSO47H 2O 222 277.5 370 185 KH2PO4 102 127.5 170 85 大量元素 CaCl2 132 165 220 110 FeSO47H 2O 27.8 27.8 27.8 27.8 铁盐 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.3 37.3

15、MnSO44H 2O 17.8 17.8 17.8 17.8 ZnSO47H 2O 8.6 8.6 8.6 8.6 H3BO3 6.2 6.2 6.2 6.2 KI 0.83 0.83 0.83 0.83 Na2MoO42H 2O 0.25 0.25 0.25 0.25 CuSO45H 2O 0.025 0.025 0.025 0.025 微量元素 CoCl26H 2O 0.025 0.025 0.025 0.025 甘氨酸 2 2 2 2 盐酸硫胺素 B 1 0.1 0.1 0.1 0.1 盐酸吡哆素 B 6 0.5 0.5 0.5 0.5 烟酸 0.5 0.5 0.5 0.5 有机附加物 肌醇 50 50 50 50 6-BA 0.050.1 0.10.2 NAA 0.10.2 0.050.1 0.20.5植物生长调节剂 IBA 0.10.2 碳源 蔗糖 20 000 25 000 25 000 20 000 凝固剂 琼脂 4 800 4 700 4 600 4 800 防褐变剂 活性炭 1 000 香蕉 20 000 40 000 70 000 添加物 马铃薯 20 000 80 000 60 000 30 000 _ DB53/T 9032019 版权专有 不得翻印 侵权必究 举报电话： （0871）63215572