DB42 T 140-2017 桑蚕一代杂交种检验规程.pdf
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1、ICS 65.020.30 B 44 备案号: DB42 湖北省 地 方 标 准 DB42/T 140 2017 代替 DB42/T 140-2002 桑蚕一代杂交种检验规程 The testing rules for F1 hybrid eggs of silkworm (报批稿) 2017 - 05 - 16发布 2017 - 09 - 01实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 1402017 I 目 次 前言 . III 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 定义 . 1 4 检验 . 2 4.1 蚕种繁育检验 . 2 4.2 母蛾微粒子病检疫 . 4 4.3 成品
2、质量检验 . 6 附录 A(规范性附录) 蚕种繁育检验单 . 8 附录 B(规范性附录) 桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检验抽样装盒 规定(散卵种) . 9 附录 C(规范性附录) 桑蚕一代杂交种送检母蛾清单和母蛾微粒子病检疫单 . 10 附录 D(规范性附录) 桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检疫合格标准(散卵种) . 11 附录 E(规范性附录) 桑蚕一代杂交种母蛾检验报告(代检验证书) . 12 附录 F(规范性附录) 蚕种成品质量检验报表 . 13 附录 G(规范性附录) 蚕种成品质量检验合格证书 . 14 附录 H(资料性附录) 染色液的配制方法 . 15 DB42/T 1402017 II
3、DB42/T 1402017 III 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1部分:标准的结构和编写给出的规则编写。 本标准代替 DB42/T 140-2002家蚕一代杂交种检验规程。 本标准与 DB42/T 140-2002相比 ,除编辑性修改外, 主要变化如下: 修改了标准名称(将标准名称家蚕一代杂交种检 验规程修订为桑蚕一代杂交种检验规程); 增加了规范性引用文件 (见第 2章) ; 修改了部分定义条文的表述( 2002年版 2.1、 2.2、 2.3、 2.5、 2.6、 2.7,本版 3.1、 3.2、 3.3、 3.5、 3.6、 3.7); 增加了蚕种
4、繁育环境检验( 2002年版 3.1.1,本版 4.1.1.1); 删除了蚕种繁育检验中的卵质调查( 2002年版 3.1.4); 增加了母蛾盒的送样、母蛾盒的验收( 2002年版 3.2, 本版 4.2.4、 4.2.5); 增加了成品卵微粒子病检疫和数据修约(本版 4.3.5、 4.3.6); 修改了微粒子孢子的鉴别法( 2002年版 3.2.5,本版 4.2.9); 在附录 C中增加了 桑蚕一代杂交种送检母蛾清单 (本版附录 C中 表 C.1) ; 增加了附录 H。 本标准由湖北省农业科学院提出。 本标准由湖北省农业科学院归口 管理。 本标准起草单位:湖北省农业科学院经济作物研究所、湖北
5、省果茶办公室。 本标准主要起草人:吴 凡 、 李德臣 、 陈登松 、 郝 瑜 、 关永东 、 胡 刚 、 肖胜武 、 熊 超 、范 锦、 余银山 。 本标准 历次发布版本情况为: DB42/T 140-1997; DB42/T 140-2002。 DB42/T 1402017 1 桑蚕一代杂交种检验规程 1 范围 本标准规定了桑蚕一代杂交种检验的技术要求。 本标准适用于湖北省内生产的桑蚕一代杂交种检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T
6、8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 NY/T 327 桑蚕一代杂交种检验规程 3 术语 和 定义 下列 术语 和 定义适用于本标准。 3.1 良卵率 good egg percentage 在调查的 样本中,良卵粒数占蚕卵总粒数的百分比。 3.2 简化催青 simple incubation 在丙 2戊 2、戊 3己 5胚胎发育阶段,分别用不同的温度、湿度、光线保护使蚕卵孵化的方法。 3.3 实用孵化率 practical hatchability 在调查的样本中,连续最大二日孵化的蚕卵粒数占总良卵粒数的百分比。 3.4 品种纯度 purity of variety 调查样本中,符合
7、品种性状的个体数占调查总个体数的百分比。 3.5 杂交率 percentage of hybridized silkworm 在调查的样本中, 符合品种性状的一代杂交种的个体数占调查总数的百分比。 DB42/T 1402017 2 3.6 母蛾微粒子病率 pebrine rate of female moth 指带微粒子孢子的母蛾 数 占制种批 /段母蛾总数的百分比。 3.7 蚕卵微粒子病率 rate of pebrine contaminated eggs 蚕卵微粒子病率(简称病卵率)是指带微粒子孢子的蚕卵数占调查样本蚕卵总数的百分比。 4 检验 4.1 蚕种繁育检验 4.1.1 预知检验
8、预知检验包括蚕种繁育环境检验,迟眠、弱小、病态蚕镜检,不结茧蚕、病死蚕检查,苗蛾、病态 蛾镜检。 4.1.1.1 蚕种繁育环境检验 在蚕种繁育生产 开始前 15 d,以原蚕饲育户或饲育小组为镜检批,对蚕种繁育饲养的相关用具及周 边环境进行抽检 。 每个原蚕区饲育户或饲育小组饲养量抽样数量不少于 30个,所涉及到的每个点抽样重 复 3次。将所抽得的样本置于乳钵中,加入适量 2 %KOH液碾碎后制样镜检。 4.1.1.2 迟眠、弱小、病态蚕镜检 以 饲育区或原蚕饲育户 为镜检批,按 1龄 3龄全抽, 4龄 5龄 510头蚕 /箔的标准抽样;将样本置 29 30 、相对湿度 80 %90 %的环境中
9、,经 2 d3 d后,将小蚕整体,大蚕取中肠放入乳钵中,加入 适量 2 %KOH液碾碎后制样镜检。 4.1.1.3 不 结茧蚕、病死蚕检查 以饲育区或原蚕饲育户为检验批,检验全部不结茧蚕、病死蚕;用镊子撕开蚕体观察丝腺,若有乳 白色 脓疱状斑块 为微粒子病;若丝腺病变不明显,可加入适量 2 %KOH液磨碎镜检。 4.1.1.4 苗蛾、病态蛾镜检 以饲育区或原蚕饲育户为检验批,抽 30只苗蛾、病态蛾;将样本置乳钵中,加适量 2 %KOH液碾磨 后制样镜检。 4.1.2 品种纯度调查 在 5龄第 3 d,按饲育批,抽 5 %饲育区或原蚕户调查幼虫的体色、体形、斑纹,选出不符合品种固 有性状的个体,
10、计算其纯度。 品种纯度计算公式: 100% 调查总头数符合品种性状的蚕头数)品种纯度( . (1) DB42/T 1402017 3 4.1.3 种茧调查 种茧调查包括种茧调查时期、收茧量调查、公斤茧粒数调查、死笼率调查、茧层率调查、种茧调查 规则。 4.1.3.1 种茧调查时期 春季在盛上蔟后 7足天,夏、秋季在盛上蔟后 6足天进行种茧调查。 4.1.3.2 收茧量调查 除薄皮茧、烂茧外,其余种茧称量计重。 4.1.3.3 公斤茧粒数调查 蚁量 20 g的饲育批,逐箔随机抽样共 500 g点数,计算公斤茧粒数;蚁量 20 g的饲育批,逐箔随 机抽样共 1000 g点数,计算公斤茧粒数。 公斤
11、茧粒数计算公式: 1000 g )样茧重量( 样茧粒数公斤茧粒数(粒) . (2) 4.1.3.4 死笼率调查 蚁量 100 g的饲育批,逐箔随机抽样共 1000粒茧;蚁量 100 g的饲育批,逐箔随机抽样共 2000粒 茧。原蚕户种茧 20 kg的抽 200粒茧,原蚕户种茧 20 kg的抽 400粒茧,然后逐粒剖茧调查;凡茧内病 死蚕蛹、半脱皮蚕蛹等均作死笼茧;僵蚕、僵蛹、蝇蛆蛹、虫害蛹及受伤出血蛹等不作死笼茧。 死笼率计算公式: 100% 调查茧总粒数 死笼粒数)死笼率( . (3) 4.1.3.5 茧层率调查 剥去 茧衣,每批随机抽样雌雄茧各 50粒,剖茧称取全茧量、茧层量。 茧层率计算
12、公式: 100 5050% 粒合计全茧量雌雄茧各 粒合计茧层量雌雄茧各)茧层率( . (4) 4.1.3.6 种茧调查规则 若有不合格项目,最多可再重复抽样两次,成绩以二次平均计算。 4.1.4 判定规则 养蚕前环境检验有微粒子孢子的需严格消毒,经复检合格后方可饲养原蚕;其它预知检查项发现有 微粒子孢子的整区(户)淘汰;品种纯度 95 %,淘汰不符合该品种性状的个体;品种纯度 95 %属原 种质量问题整批(户)淘汰;蚕种繁育质量检验其中一项未达标为不 合格,该饲育批(区)淘汰。 4.1.5 制表 将各项检验项目数据汇总分析,填写蚕种繁育检验单见附录 A,随母蛾送样时报检验单位。 DB42/T
13、1402017 4 4.2 母蛾微粒子病检疫 母蛾微粒子病检疫采取集团磨蛾法检验。 4.2.1 母蛾抽样 母蛾检疫批按制种批划分,同一制种批下可按制种日、户分段;抽样袋蛾时随机抽取制种母蛾样本, 苗末蛾必须全袋。按附录 B抽样装盒规定的数量抽取母蛾装入蛾盒(袋)。蛾盒(袋)上标明生产单位 名称、品种名称、批次、段号、蛾盒号。 4.2.2 母蛾装盒 按批(段)及毛种张数,对照桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检验抽样装盒规定(见附录 B)比 例装盒;抽样要 有随机性和代表性,不得剔选和遗漏,每盒以 30蛾作为一个检验单位装盒袋蛾。 4.2.3 母蛾干燥处理 母蛾盒分批收集,顺序排放,平摊箔内,集中放于通
14、风干燥室内,待 5日母蛾自然死亡后进行烘蛾, 即浸种可检鲜蛾;烘蛾温度不得超过 70 ,以蛾头胸干硬,胸腹部稍软为宜;干燥的母蛾以 10盒(袋) 扎一小捆, 100盒(袋)扎一大捆,集中放入铁皮箱内,加入石灰包、樟脑丸等以防发热、霉烂及虫、 鼠害等。 4.2.4 母蛾盒的送样 即时浸酸种袋蛾后即送样。冷藏浸酸种及越年种在母蛾干燥处理后送样。在干燥处理后 15 d内必须 将母蛾送到检验单位进行检验。送样过 程中防止蚕蛾散落,避免受潮、污染、损坏或丢失;送样单位应 随样品附送检清单,标明生产单位、制种期别、品种、批(段)号、毛种数量、送样(蛾盒)数量等, 并填写桑蚕一代杂交种送检母蛾清单见附录 C
15、。 4.2.5 母蛾盒的验收 凡蛾盒填写不清,批(段)号、盒号错乱,或发霉、腐烂、虫蛀、鼠咬、焦烘或其他影响检验正确 判断的,检验单位应拒收,该批样本不予检验。 4.2.6 母蛾检疫方法 采用集团磨蛾法。 4.2.7 检疫程序 抽样编号 拆盒投蛾 注液磨碎 过滤校正 离心沉淀 振荡取样 制片镜检 复检确认 结果 记载。 4.2.7.1 抽样编号 根据制种批、段的蚕种数量,按附 录 D的规定,将送检母蛾盒分成第 1样本(含苗蛾、末蛾)与第 2 样本,先取第 1样本进行编号并进入检疫流程。 4.2.7.2 拆盒投蛾 蛾盒编号随磨蛾液传递。 4.2.7.3 注液磨碎 DB42/T 1402017 5
16、 在磨蛾杯中加注 0.5 %碳酸钠或碳酸钾溶液 80 mL-90 mL,转速 8000400 r/min 磨蛾 15 s 以上。 4.2.7.4 过滤校正 将蛾液过滤至离心管内,加水校正离心管液量。 4.2.7.5 离心沉淀 转速 3000150 r/min 离心 3 min,倒出上清液,在沉淀物中加入 1 %2 %KOH 溶液约 1 mL。 4.2.7.6 振荡取样 手握离心管,在振荡器上振荡。 4.2.7.7 制片镜检 在每个管中取 4 滴样液, 点于两块载玻片上制成临时标本。 4.2.7.8 复检确认 用光学显微镜在高于 600 倍下由两名检验员分别检验,每人检验两滴样液,每滴样液观察不
17、少于 5 个视野。若两人检验结果不一致,或有微粒子孢子,则应重新取样,复检确认。 4.2.7.9 结果记载 将显微镜观察结果准确填入桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检疫单见附录 C,有微粒子孢子者用 “+”,无微粒子孢子者用 “-”表示。 4.2.7.10 第二样本检验 第二样本检验见 桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检疫合格标准 附录 D。 4.2.8 微粒子孢子的鉴别法 微粒子孢子的鉴别法有酸类鉴别法、碘酒鉴别法、三谷氏鉴别法和碱性番红花红液法。 4.2.8.1 酸类鉴别法 区别丝状菌或酵母菌等。将供检液滴于载玻片上,阴干后滴入盐酸(比重 1.15)或硝酸液 1滴于样 本中,在 27 中放置 10 m
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