DB15 T 1060-2016 野生食用菌菌种制作技术规程.pdf

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1、ICS 65.020.20 B 31 备案号： 51189-2017 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1060 2016 野生食用菌菌种制作技术规程 Regulation of Strain Manufacture for Wild Edible Fungi 2016 - 09 - 25 发布 2016 - 12 - 25 实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15/T 1060 2016 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院 提出。 本标准由内蒙古自治区农牧业厅归口。 本标准起草单位：内蒙

2、古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人： 孙国琴、庞杰、王勇、 康立茹、解亚杰、 张立华、 于静、王海燕、孟虎 、 乔慧蕾、李亚娇 。 DB15/T 1060 2016 1 野 生食用菌菌种制作技术规程 1 范围 本 标准 规定了 内蒙古 可食用野生食用菌 母种、原种和栽培种生产有关的定义、制作技术流程要点等。 本 标准 适用于 蒙古口蘑（ Tricholoma mongolicum）、污白蘑菇（ Agaricus excelleus）、 白磷蘑 菇（ Agaricus bernardii）、 蘑菇（ Agaricus campestris）、 野蘑菇（ Agaricus arvenis）、

3、 白环柄 菇（ Lepiota alba）、 大肥蘑菇（ Agaricus bitorquis）、大白桩菇（ Leucopaxillus giganteus）、 草原野蘑（ Agaricus campestris） 可食用野生食用菌 母种、原种和栽培种菌种制作要求。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 9688 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准 GB 19170-2003 香菇菌 种 NY/T 528-2010 食用 菌菌种生产技术规程 NY/T

4、 1731-2009 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742-2009 食用菌菌种通 用技术要求 3 术语和定义 下列定义和术语适用于本文件。 3.1 野生食用菌 wild edible fungi 能够形成大型肉质或胶质的子实体或菌核类组织并能供人们食用或药用的一类大型真菌。 3.2 菌种 spawn 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种 。 NY/T 528-2010，定义 3.3 3.3 母种 stock culture 经分离、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以试管 和培养皿为培养容器和使用单位，也称为一级种、试管种。

5、 GB 19170-2003，定义 3.1 DB15/T 1060 2016 2 3.4 原种 pre-culture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或（ 12 17） cm（ 22 28） cm聚丙烯塑料袋为容器，也称为二级种。 3.5 栽培种 spawn 由原种移植、扩大 培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或 17 cm33 cm聚 丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称为三级种。 3.6 固体菌种 solid spawn 以富含木质素、纤维素和 淀粉 等 天然有机物 为主要原料，添加适量的有机

6、氮源和无机盐类，具一定 水分含量的培养基培养的纯菌丝体。 GB/T 12728-2006，定义 2.5.31 4 菌种生产要求 4.1 人员 生产所需要的技术人员和检验人员应 经过专业培训、掌握 野生 食用菌 基础知识及 食用菌生 产技术规 程 要求 的相应专业技术人员。 4.2 场地 菌种 生产 应 选择地势高 、 通风良好 、 空气清新 、 水源近 、 排水通畅 、 交通便利 的场所 。 300 m之内 无酿造厂、食用菌栽培场、集贸市场 、 规模养殖的畜禽舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、废渣、 烟尘和粉尘等污染源 。 菌种生产厂 应 有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装库。配套有配料

7、室、搅拌室、装袋（瓶） 室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种 检测 室及菌种冷藏库等。冷却室、接 种室，培养室 应 有离子净化设施。 4.3 生产设备 菌种生产 应有 粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压 灭菌 锅或常压灭菌锅、离子净化器、 超净工作台 或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、液体菌种灌、冰箱、显微镜等 设备 。 5 母种生产 5.1 培养基 见 附录 A。 DB15/T 1060 2016 3 5.2 容器 试管 选用 18 mm180 mm或者 20 mm200 mm；培养皿 选用 7 cm 9 cm玻璃培养皿或一次性塑料培养皿。 5.3 分装 和灭

8、菌 培养基 降温到 80 以下 即可 分装 。 5.3.1 试管分装和灭菌 分装培养基至试管 1/4处，用棉塞或硅胶塞子封闭试管口，每 5支试管为 1把， 牛皮纸包棉塞，橡皮 筋扎紧，棉塞向上 放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。在 121 124 （ 0.11 MPa 0.14 MPa） 下灭菌 25 min。 灭菌后 温度降到 （ 655 ） 时， 在空气清洁的室内摆斜面，要求 斜面长度 不超过试管长度的 2/3。 从摆好的试管中抽取 3 % 5 %的试管，在 28 下培养 48 h，无微生物长出为灭菌合格。 5.3.2 培养皿分装和灭菌 培养基 装入 300 ml 500 ml三角瓶至

9、 刻度的 2/3处，用带滤膜的封口膜封口后灭菌 。培养皿用报纸包 好，同时放入灭菌锅灭菌。 121 124 （ 0.11MPa 0.14 MPa） 下灭菌 25 min。 灭菌后 温度降到 （ 655 ） 时， 在超净工作台内将三角瓶中的培养基 装至 培养皿中 ， 培养基占培 养 皿高度的 1/3 1/2。 5.4 接种 在超净工作台或接种箱内 接种 ， 接种前用紫外灭菌灯照射 30 min，之后用 75 %酒精进行表面消毒。 接菌过程 严格执行无菌操作， 接种后及时 做好标签。 接种的菌块 3 mm 5 mm，接种在培养皿或试管的中部。 培养皿 需 用石腊膜密封 。 5.5 培养 温度控制在

10、 22 30 ， 空气湿度在 75 %以下，通风 避光培养。 接种后第 7天 、 第 10天 、第 15天 和 长满培养基后 分别 进行检验，挑出 未活、 污染和生长不良的 不合 格培养物 。检验方式应该是逐个检验。 6 原种、栽培种生产 6.1 培养基 见附录 B。 6.1.1 容器 原种 采用 750 ml以下 、 瓶口直径 4 cm、 耐 126 高温的 透明瓶子， 或 采用 （ 12 17） cm（ 22 24） cm（ 0.04 0.05） mm的聚丙烯塑料袋。 栽培种 采用同原种要求的瓶子， 也可 采用 （ 15 17） cm24cm（ 0.04 0.05） mm的聚丙烯塑料袋 。

11、 以上 聚丙烯塑料袋 均要求 符合 GB 9688的 要求 。 6.1.2 装袋（瓶） DB15/T 1060 2016 4 采用装袋（瓶）机或人工进行装袋（瓶），人工装袋（瓶）需用打孔器在袋口处打孔，孔直径 1 cm 1.5 cm深度为 8 cm 12 cm，每袋（瓶）装培养基质 500 g。 6.1.3 灭菌 培养基质 装袋（ 瓶） 后 4h内 进行灭菌，灭菌可分为高压灭菌和常压灭菌。 高压灭菌： 组合培养基 在 121 124 （ 0.11 MPa 0.12 MPa） 下灭菌 2 h；粮食培养基 在 121 124 （ 0.11 MPa 0.12 MPa） 下灭菌 2.5 h。 常压灭菌

12、：在 3 h之内使灭菌温度达到 100 ，保持 100 10 h 12 h。 6.1.4 接种 原种、栽培种在超净工作台或接种箱内 接种 ，接种前 打开 紫外灯照射 30 min，接种时用 75 %酒精对 超净工作台或接种箱进行表面擦拭消毒。 每个原种接入母种块 2 cm 3 cm； 每个 栽培种接种量不得少于 15 g。 菌种都应从容器开口处接种，不应打孔多点接种。 每批接种应为单一品种，如中途换品种时采用 75 %酒精对超净工作台或接种箱进行表面擦拭消毒。 6.1.5 培养 温度控制在 20 25 ， 空气湿度在 75 %以下，通风 避光培养。 6.1.6 贮存 在 1 6 下贮存，贮存期

13、不超过 50 d。 7 检验、入库及留样 7.1 检验 7.1.1 母种感官要求 见表 1。 表 1 野生食用菌母种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损、无裂纹 棉塞或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满斜面 或 平板 菌丝体特征 洁白平整 或淡黄色绒状 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面外观 培养基不干缩 、 颜色均匀 、 无暗斑 7.1.2 原种感官要求 见表 2。 表 2 野生食用菌原种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损、无裂纹 、洁净 DB15/T 1060 2016 5 表 2（续） 项目 要求 棉塞

14、或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口 的距离 （ 505） mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长旺健 培养物表面菌丝体 生长均匀 、 无高温抑制线 培养基 及菌丝体 紧贴瓶壁 、 无干缩 菌丝分泌物 允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.3 栽培种感官要求 见表 3。 表 3 野生食用菌栽培种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损、无裂纹 棉塞或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋） 口的距离 （ 505） mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 洁白浓密 、 生

15、长旺健 菌丝体特征 生长均匀 、 无角变 、 无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁 、 无干缩 菌丝分泌物 允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌 落 无 子实体原基 无 7.2 入库 检验参照 NY/T 1742和 NY/T 1731的 要求。母种检验完成后应及时入库，详细记录各生产环节，库房 温度应该 4 6 ，避光，适当通风但应该对空气进行杀菌处理。 母种在库中贮存时间不应长于 50 d，贮存时间超出 50 d的母种应该进行出菇检验后再进行后续生产。 7.3 留样 母种应留样，每批次留样 3支试管，贮存在 1 6 ，贮存至购买者购买后正常生产条件下出第一 潮菇。 DB15/T 1060 20

16、16 6 附 录 A （资料性附录） 母种培养基配方 A.1 PDA改良培养基 A.1.1 麦麸 100 g加 水 600 ml煮 沸 20 min，滤液 定容至 500 ml； 新鲜无病去皮马铃薯 200 g加水 600 ml煮沸 15 min，滤液 定容至 500 ml，二者混合 ， 加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸二氢钾（ KH2PO4） 1 g、 葡萄糖 10 g、 蔗糖 10 g、 琼脂 粉 10 g 15 g，煮沸 至 琼脂 粉完全溶化 ， pH自然； A.1.2 新鲜无病去皮马铃薯 200 g加水 1200 ml煮沸 15 min，滤液定容至 1000 ml，加入蛋白

17、 胨 1 g、 酵母粉 1 g、加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸二氢钾（ KH2PO4） 1 g、 葡萄糖 10 g、 蔗糖 10 g、 琼脂 粉 10 g 15 g， 煮沸 至 琼脂 粉完全溶化 ， pH自然； A.1.3 100 g麦粒 加水 1200 ml煮沸 20 min，滤液定容至 1000 ml， 加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸二氢钾 （ KH2PO4） 1 g、 蛋白胨 5 g、 蔗糖 10 g、 葡萄糖 10 g、 琼脂 粉 10 g 15 g， pH自然； A.1.4 新鲜无病去皮马铃薯 200 g加水 600 ml煮沸 15 min，滤液 定容至

18、500 ml；新鲜无霉变小麦粒 100 g加 水 600 ml煮沸 20 min，滤液 定容至 500 ml； 二者混 合 ，加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸二氢钾（ KH2PO4） 1 g、 蔗糖 10 g、 琼脂 粉 10 g 15 g，煮沸 至 琼脂 粉完全溶化 ， pH自然； A.2 PDA培养基 新鲜无病去皮马铃薯 200 g加水 1200 ml煮沸 15 min，滤液 定容至 1000 ml， 加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、 磷酸二氢钾（ KH2PO4） 1 g、 葡萄糖 10 g、 蔗糖 20 g、 琼脂 粉 10 g 15 g，煮沸 至 琼脂 粉完全溶化，

19、 pH自然 。 DB15/T 1060 2016 7 附 录 B （资料性附录） 培养基 质 常见 配方 B.1 粮食培养基 谷粒、麦粒或玉米粒 90 %，柠条粉、棉籽壳、 木屑、玉米芯粉或豆秸粉 9 %，石膏 1 %， 石灰水调节 pH至 7.5 8.5， 水分含量（ 502 ） % 。 B.2 组合培养基 B.2.1 锯沫 79 %、 麸子 20 %、 石膏 1 %、石灰水调节 pH至 7.5 8.5、 水分含量（ 602 ） %。 B.2.2 柠条粉 60 %、 玉米芯 20 %、 麸子 19 %、 石膏 1 %、石灰水调节 pH至 7.5 8.5、 水分含量（ 602 ） %。 B.2.3 豆秸粉 60 %、 玉米芯 20 %、 麸子 19 %、 石膏 1 %、石灰水调节 pH至 7.5 8.5、 水分含量（ 602 ） %。 B.2.5 柠条粉 80 %、 麸子 19 %、 石膏 1 %、石灰水调节 pH至 7.5 8.5、 水分含量（ 602 ） %。