安捷伦HPLC1100培训资源.ppt

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1、1,恒温柱箱,四元泵,手执控制器,G1354A,G1316A,G1323A,G1313A,DAD检测器,二元泵,自动进样器,G1315A,G1312A,在线脱气机,单泵,紫外检测器,G1310A,G1314A,G1322A,Agilent 1100 系统硬件概观,G1328B 手动进样器,2,优化流路减小死体积 流路自上而下,堆积配置,3,指示灯状态,4,准备流动相,5,溶剂过滤,6,选择合适的滤膜,聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋白质和其相关的样品。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、

2、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。注意：1，每张滤膜只能用一次。2，水相和有机相不要搞混。,7,The Good User,8,溶剂的相溶性,9,溶剂信息,避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。在有机溶剂中的有机酸溶液。含有强络合剂的溶液。四氯化碳和异丙醇或THF混合液。,10,c,所以在使用紫外检测器时，所用波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。,在使用紫

3、外检测器时，所用波长与所用溶剂的截止波长接近（或低于截止波长）时，容易产生噪音干扰，从而影响检测结果。,11,生色团和最大吸收波长,溶剂、PH、温度等都会影响生色团的最大吸收峰的强度和位置。,12,柱塞清洗附件Seal Wash,HPLC使用缓冲溶液Buffer时，由于缓冲盐溶液存在高压盐析现象，析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封垫，从而造成漏液等故障现象，因而建议选配柱塞清洗附件Seal Wash。柱塞清洗附件Seal Wash部件号为01018-68722。 缓冲盐浓度大于0.01mol时，强烈建议选配在线的柱塞清洗附件Seal Wash。 清洗液配置：90%水+10%异丙醇溶液，流速

4、为2-3滴/min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。清洗液虹吸流出，不能干涸。,13,仪器说明书,仪器的每一个模块都配有英文操作参考手册，中文手册也将会一CD形式寄给用户。 说明书中有详细的操作性能优化、故障提示、维护等内容。 希望认真阅读。,14,Agilent1100LC开机/关机操作,开机操作： 1，打开Seal Wash清洗液开关，调节流速为2-3滴/min。 2，打开计算机，进入Window操作系统，并运行CAGBootp srever程序。 3，打开1100LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。 4，双击桌面上“Instrument 1 Online”图标，进

5、入1100化学工作站。,关机操作： 1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。 2，用纯有机相冲洗系统30min。 3，在工作站上关闭各个模块。 4，退出工作站，关闭计算机。 5，关闭1100LC各个模块的电源。 6，关闭Seal Wash清洗液开关。,15,启动Bootp Server,进入Windows系统后Bootp Server自动运行，电击将Bootp Server窗口最大化，开启仪器电源后上面会出现七行通讯信息记录，表明工作站通讯成功，可以进入Agilent化学工作站。,注意：不能关闭Bootp Server窗口，只能最小化，否则将影响工作站通讯。,16,清洗阀Pur

6、ge Valve,逆时针旋转打开清洗阀，清洗阀打开时，液体从废液管中流出，为清洗状态。 更换溶剂后，打开清洗阀，设置流量5ml/min，冲洗5-10min. 顺时针旋紧清洗阀为关闭状态,此时流动相由毛细管流向进样器.,逆时针打开清洗阀,顺时针关闭清洗阀,毛细管出口,流向进样器,废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶.,17,了解您的化学工作站,熟悉化学工作站； 通过View切换不同的任务界面； 通过View改变GUI不同的显示风格； 输入流动相的量； 在工作站上开启仪器，开泵、开灯、打开柱温调节等； 改变仪器控制参数； 选择在线显示信号； 调用/储存方法；,18,熟悉化学工作站,状态工具条,快

7、捷工具条,自动进样控制,Macro命令行,在线信号显示,仪器参数显示区,仪器控制区,19,通过View切换不同的任务界面,1，方法与运行控制-信号采集； 2，数据处理； 3，报告设计； 4，OQ/PV认证； 5，诊断功能；,20,通过View改变GUI不同的显示风格,显示状态工具条,显示快捷工具条,打开Offline,在线信号显示,显示仪器控制区,自动进样控制,21,输入流动相的量,对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框,在Total Volume下输入溶剂瓶容量，一般为1.00Liter，Actual Volume下输入溶剂实际加入的量，比

8、如0.5Liter,选中下面两个选项后，在溶剂低于0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵自动关闭。,22,在工作站上开启仪器,每个模块右下方都有开关键，点击后出现开泵、开灯等提示，选择“Yes”即将泵、灯等打开。,点击“on”将打开所有模块，点击“off”将关闭所有模块。,23,改变仪器运行参数,对着仪器模块点击左键然后点击Set up Pump,显示右面的对话框,在此对话框中可以设置泵的参数。,Control为泵的控制，点击Not Ready Information则显示没有准备好或错误信息。Help为在线帮助。,柱箱、检测器、自动进样器等参数改变操作与此相同,24,选择在线显示信号,

9、从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change，在Edit Signal Plot窗口选择要监控的信号。,在Online Plot上点击“Change”，显出右面对话框，在此对话框中左面为可用信号，右面为在线显示信号，通过“Add”Remove”改变不同的显示信号。,25,调用/储存方法,方法信息,编辑完整方法,调方法,存方法/覆盖保存,另存方法,右图为方法存/取对话框，方法文件后缀名为.m,26,其它功能菜单,文件处理,运行控制,仪器控制,序列,放弃任务,在线帮助,工作站任务切换快捷键,方法存取快捷键,序列存取快捷键,运行方法,运行序列,27,方法中所包含的内容

10、。 如何编辑采集参数。 如何运行一个样品。,方法编辑,本章内容：,28,方法的组成：,方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist),方法：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要的所有参 数：数据采集参数、 数据分析参数及命令或宏指令。 方法的文件名为：xxx.m。,什么是方法?,29,面对工作站，我该怎么办？ What should I do？,我们知道要运行样品需要设置控制仪器的参数，比如泵流速、流动相比例、柱温、检测器波

11、长、样品校正等； 在Agilent化学工作站中我们把仪器控制和数据分析以及仪器相关的运行等所有参数称为一个方法Method； 所以要运行一个样品，首先要得到一个正确的方法； 在Agilent化学工作站中要得到方法要么调用一个已经存在的方法，要么自己编辑一个新的方法； 一般来说，通过查阅资料比如国家标准或行业标准、药典、专业技术资料、EPA等都可以得到样品分析的详细方法； 您需要做的就是把这些方法在Agilent化学工作站中建立起来，然后运行仪器并得到数据。,30,如何运行样品,开机； 调用一个已有方法； 新建一个方法； 在工作站上打开泵、灯等； 输入流动相的量； 选择在线显示信号； 稳定仪器，

12、等待Ready指示； 指定样品瓶号及数据路径； 运行样品-自动进样； 运行样品-手动进样； 关机。,按照标准开机操作； Method/Load Method； Method/Edit Entire Method； 可以分别开启或同时开启； 在流动相容量中输入实际值； 点击Change，选择显示信号； 等待绿色状态灯亮； 在Runcontrol/SampleInfo中指定 自动进样点击Start； 手动将进样阀由Load旋至Inlet； 按照标准关机操作。,31,调用方法,在Method中点击Load Method工作站弹出下面对话框.,在右面对话框中选中要调用的方法名,点击“OK”,该方法即被

13、激活.,32,使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法,编辑一个新方法,33,选择所要编辑的内容,画面1:方法组成,在你想要的部分前选中,否则方法里将不包括该部分的内容。比如本方法不包括数据分析的内容。,方法信息,仪器控制与数据采集,数据分析,运行时间表,34,方法信息 (Method Information),画面2：方法信息,输入您想要对方法的说明，比如方法的用途、来源等信息。,35,包括：流量(Flow)，流动相组成(Solvents)，停止采集时间(Stop Time)，梯度编程(Timetable)，压力限制设定(Pressure Limits),泵的操作参数,

14、压力限制：Max最高压力，Min最低压力,流动相梯度表,输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),输入流动相组成，B、C、D可输，A=100-B-C-D,输入流动相名称,画面3：泵参数（四元泵）,36,典型的流速,设置柱子流速时，要注意观察系统压力，一般来说在满足分析的前提下使系统维持比较低的压力对仪器是非常有好处的。,37,泵的参数设置,画面3：泵参数（单元泵）,输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),压力限制：Max最高压力，Min最低压力,输入流动相名称,泵流量编程,单击“OK”确认,38,泵的参数设置,画面3：泵参数（二元泵）,压力限制：Max

15、最高压力，Min最低压力,输入流动相名称,输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),流动相梯度表,输入流动相组成，B可输，A=100-B,39,与检测器的控制类似,检测器: 灯开/关 (钨灯/氘灯) 自动开灯 模拟信号输出范围,泵的控制,40,Instrument More Pump Auxiliary.,泵的辅助功能,从泵的辅助功能可以设置最大升流速率，冲程大小，压缩因子补偿。,最大梯度流量,最小冲程,压缩因子,主通道选择,41,进样体积 0.1 - 100 ul标准进样 最大 1500ul 使用多次进样装置 最大900 ul 进样，不使用多次进样装置，但需要扩展进样装置

16、 (G1363A),自动进样器参数,设置参数包括：进样体积(Injection)，取样速度(Draw Speed)，注射样品速度(Eject Speed)，取样位置(Draw position)，停止采集时间(Stop time)。,画面4：自动进样器参数,输入进样体积,42,5 个信号可以选择 信号波长范围 191 - 949 nm 可变狭缝： 1, 2, 4, 8, 16 nm 可以时间编程,检测器参数设置,画面5：检测器参数DAD,选择存储数据的通道,设置吸收波长、带宽；,设置吸收波长、带宽；,光谱选项：Store选“none”不保存光谱图，选“all”全存；Range为扫描范围；Ste

17、p为扫描步长。,设置狭缝宽度；,基线自动回零，Prerun为进样前回零，Postrun为进样后回零。,43,检测器参数设置,画面5：检测器参数VWD,输入使用的波长,44,检测器参数设置,画面5：检测器参数FLD,输入发射波长,输入激发波长,波长编程表,45,控温范围：低于室温1080 两个单独的加热区。 安装切换阀可以进行柱切换。 可以容纳30 cm长色谱柱。 安装柱识别可以自动记录进样次数。,柱温箱,画面6：恒温柱箱参数设置,输入控制温度,温度编程表,46,选择在方法中要执行的项目,运行时间表(Run Time Checklist),画面6：运行时间表设置,47,从Method菜单选择Sa

18、ve Method / Save Method as或从存贮方法工具图标存贮方法。,存贮方法,换名保存,覆盖保存,另存时在此处输入方法名,48,选择监控信号,从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change，在Edit Signal Plot窗口选择要监控的信号。,49,信号显示,50,要分析单个样品, 从RunControl菜单选择 Sample Info., 输入样品信息。样品信息包括：操作者姓名(Operator Name)，存盘数据文件(Data File)，样品参数(Sample Parameters)。然后运行方法(Run Method)。,指定样品瓶号

19、及数据路径,样品瓶所放位置,子目录名称,数据形式Manual为手动，Prefix/Counter为自动累加。,51,运行样品,自动进样点击Start；,运行单个样品,运行序列,自动进样器进样,运行中,52,运行样品,手动进样将进样阀由Load位置旋至Inject位置,运行中,53,数据处理过程,调用标样数据 优化图形 优化积分参数 建立校正曲线 设置报告模式 将数据处理文件存入方法 调用样品数据 报告处理结果,54,数据处理过程,调用信号 优化图形 优化积分 校正设置 建立校正曲线表 多级校正 再校正 设置报告模式 将数据处理存入方法 报告处理结果,File/Load Signal/或快捷键G

20、raphics/Signal Options/RangesIntegration/Integration Events Calibration/Calibration setting设置浓度单位、保留时间窗、曲线类型等 Calibration/New Calibration Table输入化合物名称、浓度如使用内标法定量，应指定内标物 Calibration/Add Level应先调用信号，再进行第二点、第三点校正 Calibration/Recalibration一定要选对再校正的点Level Report/Specify Report在Quantitative Results/Calcul

21、ate选对计算方法 File/Save/Method存入的方法名一定使数据采集时的方法名数据处理过程成为方法的一部分 Report/Print Report同样需要先调用样品信号,55,调用信号文件,叠放多个信号文件,调用信号文件,56,信号文件信息,注意：信息文件路径与仪器控制界面中设置的相同。,57,图形优化,Signal Options 信号选项,58,信号选项,设置Autoscale 自动坐标为色谱图中第二高峰满量程,显示化合物名称,59,积分参数优化,Integration Events 积分参数选项（及快捷键）,60,积分参数,Slope Sensitivity 设置斜率灵敏度，截

22、除噪音积分,Peak Width 设置半峰宽度，远大于或小于该数值的峰的积分将被截除,Area Reject 设置面积截除，截除面积低于此值的峰的积分,Height Reject 设置峰高截除,Shoulders 设置肩峰参数,61,这是一张优化了积分参数的谱图积分，噪音及杂质积分已被截除。,62,校正曲线的建立,New Calibration Table 建立校正曲线选项,Calibration Settings 校正曲线设置,63,Amount Units 浓度单位,保留时间窗口 默认校正峰时间范围,曲线类型及曲线的原点属性,64,校正曲线的建立,New Calibration Table

23、 新的校正曲线，第一级,注意：此为第一点,65,如果原来已有校正曲线，提示是否覆盖原有校正曲线。 选择“yes”。,66,校正曲线的建立,此行输入化合物名称,此行输入对应化合物的浓度,指定参考峰,如果采用内标法定量，需指定内标物,67,输入化合物名称、浓度后 提示是否删除0浓度行。,选择“yes”校正曲线即完成。,68,多级校正曲线,在“Calibration”选项里选择“Add Level”进行第二点、或第三点校正,69,显示第二点选项，如为第三点则此数为3,70,分别输入校正化合物的浓度，然后选择“OK”，即完成第二点校正。,71,再校正,再校正即是同一点重复进样进行再处理。以上是选项。,

24、72,选择是对原有曲线平均或取代,选择对哪个点进行处理，此数值一定要选择正确。,73,校正曲线,校正曲线显示,74,选择报告模式,进入报告模式的选项及快捷方式,75,选择校准方式ESTD（外标）ISTD（内标），必须选择与校正曲线一致，否则将不能计算结果。,选择打印机打印或在屏幕上显示。,选择报告模式，长报告或短报告等。,76,将校正曲线存入方法,方法储存选项（快捷键）,方法名称要和数据采集时的名称一样,77,调用样品文件,78,报告处理结果,报告选项及快捷键，选择后即报告计算结果,79,报告结果,80,调用信号 优化图形 优化积分 校正设置 建立校正曲线表 多级校正 再校正 设置报告模式 将

25、数据处理存入方法 报告处理结果,File/Load Signal/或快捷键 Graphics/Signal Options/Ranges Integration/Integration Events Calibration/Calibration setting设置浓度单位、保留时间窗、曲线类型等 Calibration/New Calibration Table输入化合物名称、浓度如使用内标法定量，应指定内标物 Calibration/Add Level应先调用信号，再进行第二点、第三点校正 Calibration/Recalibration一定要选对再校正的点Level Report/Sp

26、ecify Report在Quantitative Results/Calculate选对计算方法 File/Save/Method存入的方法名一定使数据采集时的方法名数据处理过程成为方法的一部分 Report/Print Report同样需要先调用样品信号,回忆数据处理过程,81,数据处理全过程（演示）,82,Agilent 1100LC一般性维护保养,本节内容 Agilent1100LC的各部件简要原理介绍； 1100LC各模块使用注意事项； 1100LC各个模块易耗品的更换；,83,关于溶剂,所用溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； 所用溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相

27、应使用有机相滤膜，不能混用，也不要用错。每一张滤膜只能用一次，不能重复使用。 如果没有在线脱气机，所用溶剂应经过超声脱气。 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤后的水最好使用不要超过两天。 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂。 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂。 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡1小时，用水冲洗，但不要使用超声处理。,84,85,溶剂准备：脱气,目的,脱气方法,He脱气,排除溶解在流动相中的氧气和氮气,回流加热脱气,真空脱气,超声脱气,86,在线真空脱气机,在线真空脱

28、气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。 为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。 1，新的脱气机或新的管路； 2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时； 3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。 4，完成上述操作后，打开清洗阀，用大流量冲洗，5ml/min。,87,关于泵（四元泵）,阻尼器/压力传感器,泵驱动,溶剂瓶,梯度比例阀,主动输入阀AV,出口球阀BOV,清洗阀Purge Valve,柱塞杆Piston,88,二元泵工作原理,Damper,Purge va

29、lve,Mixer,A,B,Inlet valve,Outlet valve,89,1，在线冲洗组件Seal Wash，可选件。 2，密封垫； 3，Washer密封膜；,关于泵（泵头组件）,密封垫Seal,出口球阀BOV,清洗阀Purge Valve,柱塞杆Piston,主动输入阀AV,90,更换过滤白头,在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力如果超过10bar，则需更换过滤白头。 更换步骤： 1，关闭泵电源； 2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管； 3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来； 4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出

30、； 5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫； 6，装上清洗阀； 7，连接管路。,过滤白头,聚四氟乙烯密封垫,金密封垫,清洗阀PurgeValve,91,更换过滤白头,1，去掉毛细管，废液管,2，卸掉清洗阀,3，更换过滤白头,4，更换白头，装好清洗阀,92,泵的注意事项,1，溶剂的过滤、脱气； 2，避免使用腐蚀性溶剂； 3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。 4，更换过滤白头； 5，考虑溶剂的相容性； 6，尽可能使用新鲜的水； 7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。 8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，部件号为

31、0905-1420，在0200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。,四元泵：四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。 二元泵：设置压缩因子补偿，以达到最佳比例效果。,93,关于进样器,94,From Pump,To Waste,手动进样器,95,样品要干净、经过过滤。 合适的进样体积，比如定量环为20ul，进样体积应为010ul，或者20ul，进样20ul时注射样品量应至少60ul以上。 定期清洗进样阀，清洗过程如下：1，将进样阀旋至Inject位置；2，用带有专用头的注射器用纯水约20

32、30ml冲洗进样阀；3，将进样阀旋至Load位置。参考左图。,手动进样器,96,自动进样器,准备位置,调用样品瓶 吸样品,进样和运行位置,标准进样过程 .,97,自动进样器,样品要干净、经过过滤。 洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。 多次吸液 用于进样量大于100ul,98,关于恒温柱箱,控制范围：最高80C，低温低于室温10C。 预热块体积左面为3ul，右面为6ul，除非有特殊要求，左右温度应保持一致。 一定要关闭前面板。,99,色谱柱保护,100,色谱柱保护,过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。 柱子在

33、不使用时，两端密封保存在适当的溶剂中保存柱子注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相,101,检测器DAD,DAD的光源氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命。 流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。 更换氘灯。,102,检测器VWD,VWD的光源氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命。 流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期

34、使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。 更换氘灯。,103,计算机操作系统的维护,经常性删除临时文件子目录中及垃圾斗中的文件。 使用ScanDisk或Checkdisk检查盘上的错误。 消除硬盘上的碎片（Windows 2K）。 使用杀病毒软件。 创建Emergency Repair disk (Windows 2K)。运行rdisk。,如果计算机被非法关机，临时文件子目录中会留下许多临时文件，如果不及时清除，这些文件会影响系统的性能。所以，这些文件应定期删除。 定期拷贝有用的文件。 在工作站中有用的文件是指： 1. 数据文件(xxx.D)。2. 方法文件(xxx.m)。3. 序列文件(xxx.s)。 定期拷贝这些文件后，清除工作站子目录下的这些文件，以节省硬盘空间，使运算速度正常。 禁止使用盗版软件，建议在运行工作站的同时，不要使用中文操作平台，防止与工作站发生冲突。,