安捷伦HPLC1100培训资源.ppt
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1、1,恒温柱箱,四元泵,手执控制器,G1354A,G1316A,G1323A,G1313A,DAD检测器,二元泵,自动进样器,G1315A,G1312A,在线脱气机,单泵,紫外检测器,G1310A,G1314A,G1322A,Agilent 1100 系统硬件概观,G1328B 手动进样器,2,优化流路减小死体积 流路自上而下,堆积配置,3,指示灯状态,4,准备流动相,5,溶剂过滤,6,选择合适的滤膜,聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐,并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜:适用于水基溶剂,不适用于有机溶剂,推荐用于蛋白质和其相关的样品。 尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸、
2、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜:具有蛋白质吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂。注意:1,每张滤膜只能用一次。2,水相和有机相不要搞混。,7,The Good User,8,溶剂的相溶性,9,溶剂信息,避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂:卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。高浓度的无机酸例如:硝酸和硫酸。能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。在有机溶剂中的有机酸溶液。含有强络合剂的溶液。四氯化碳和异丙醇或THF混合液。,10,c,所以在使用紫外检测器时,所用波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。,在使用紫
3、外检测器时,所用波长与所用溶剂的截止波长接近(或低于截止波长)时,容易产生噪音干扰,从而影响检测结果。,11,生色团和最大吸收波长,溶剂、PH、温度等都会影响生色团的最大吸收峰的强度和位置。,12,柱塞清洗附件Seal Wash,HPLC使用缓冲溶液Buffer时,由于缓冲盐溶液存在高压盐析现象,析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封垫,从而造成漏液等故障现象,因而建议选配柱塞清洗附件Seal Wash。柱塞清洗附件Seal Wash部件号为01018-68722。 缓冲盐浓度大于0.01mol时,强烈建议选配在线的柱塞清洗附件Seal Wash。 清洗液配置:90%水+10%异丙醇溶液,流速
4、为2-3滴/min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。清洗液虹吸流出,不能干涸。,13,仪器说明书,仪器的每一个模块都配有英文操作参考手册,中文手册也将会一CD形式寄给用户。 说明书中有详细的操作性能优化、故障提示、维护等内容。 希望认真阅读。,14,Agilent1100LC开机/关机操作,开机操作: 1,打开Seal Wash清洗液开关,调节流速为2-3滴/min。 2,打开计算机,进入Window操作系统,并运行CAGBootp srever程序。 3,打开1100LC各模块的电源,等待仪器自检完毕,1-2min。 4,双击桌面上“Instrument 1 Online”图标,进
5、入1100化学工作站。,关机操作: 1,如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。 2,用纯有机相冲洗系统30min。 3,在工作站上关闭各个模块。 4,退出工作站,关闭计算机。 5,关闭1100LC各个模块的电源。 6,关闭Seal Wash清洗液开关。,15,启动Bootp Server,进入Windows系统后Bootp Server自动运行,电击将Bootp Server窗口最大化,开启仪器电源后上面会出现七行通讯信息记录,表明工作站通讯成功,可以进入Agilent化学工作站。,注意:不能关闭Bootp Server窗口,只能最小化,否则将影响工作站通讯。,16,清洗阀Pur
6、ge Valve,逆时针旋转打开清洗阀,清洗阀打开时,液体从废液管中流出,为清洗状态。 更换溶剂后,打开清洗阀,设置流量5ml/min,冲洗5-10min. 顺时针旋紧清洗阀为关闭状态,此时流动相由毛细管流向进样器.,逆时针打开清洗阀,顺时针关闭清洗阀,毛细管出口,流向进样器,废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶.,17,了解您的化学工作站,熟悉化学工作站; 通过View切换不同的任务界面; 通过View改变GUI不同的显示风格; 输入流动相的量; 在工作站上开启仪器,开泵、开灯、打开柱温调节等; 改变仪器控制参数; 选择在线显示信号; 调用/储存方法;,18,熟悉化学工作站,状态工具条,快
7、捷工具条,自动进样控制,Macro命令行,在线信号显示,仪器参数显示区,仪器控制区,19,通过View切换不同的任务界面,1,方法与运行控制-信号采集; 2,数据处理; 3,报告设计; 4,OQ/PV认证; 5,诊断功能;,20,通过View改变GUI不同的显示风格,显示状态工具条,显示快捷工具条,打开Offline,在线信号显示,显示仪器控制区,自动进样控制,21,输入流动相的量,对着瓶子击左键,然后左键单击Solvent bottles Filling,显示右面对话框,在Total Volume下输入溶剂瓶容量,一般为1.00Liter,Actual Volume下输入溶剂实际加入的量,比
8、如0.5Liter,选中下面两个选项后,在溶剂低于0.1Liter时停止样品分析,溶剂用完后泵自动关闭。,22,在工作站上开启仪器,每个模块右下方都有开关键,点击后出现开泵、开灯等提示,选择“Yes”即将泵、灯等打开。,点击“on”将打开所有模块,点击“off”将关闭所有模块。,23,改变仪器运行参数,对着仪器模块点击左键然后点击Set up Pump,显示右面的对话框,在此对话框中可以设置泵的参数。,Control为泵的控制,点击Not Ready Information则显示没有准备好或错误信息。Help为在线帮助。,柱箱、检测器、自动进样器等参数改变操作与此相同,24,选择在线显示信号,
9、从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change,在Edit Signal Plot窗口选择要监控的信号。,在Online Plot上点击“Change”,显出右面对话框,在此对话框中左面为可用信号,右面为在线显示信号,通过“Add”Remove”改变不同的显示信号。,25,调用/储存方法,方法信息,编辑完整方法,调方法,存方法/覆盖保存,另存方法,右图为方法存/取对话框,方法文件后缀名为.m,26,其它功能菜单,文件处理,运行控制,仪器控制,序列,放弃任务,在线帮助,工作站任务切换快捷键,方法存取快捷键,序列存取快捷键,运行方法,运行序列,27,方法中所包含的内容
10、。 如何编辑采集参数。 如何运行一个样品。,方法编辑,本章内容:,28,方法的组成:,方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist),方法:方法是一个参数集,它包括分析一个样品所需要的所有参 数:数据采集参数、 数据分析参数及命令或宏指令。 方法的文件名为:xxx.m。,什么是方法?,29,面对工作站,我该怎么办? What should I do?,我们知道要运行样品需要设置控制仪器的参数,比如泵流速、流动相比例、柱温、检测器波
11、长、样品校正等; 在Agilent化学工作站中我们把仪器控制和数据分析以及仪器相关的运行等所有参数称为一个方法Method; 所以要运行一个样品,首先要得到一个正确的方法; 在Agilent化学工作站中要得到方法要么调用一个已经存在的方法,要么自己编辑一个新的方法; 一般来说,通过查阅资料比如国家标准或行业标准、药典、专业技术资料、EPA等都可以得到样品分析的详细方法; 您需要做的就是把这些方法在Agilent化学工作站中建立起来,然后运行仪器并得到数据。,30,如何运行样品,开机; 调用一个已有方法; 新建一个方法; 在工作站上打开泵、灯等; 输入流动相的量; 选择在线显示信号; 稳定仪器,
12、等待Ready指示; 指定样品瓶号及数据路径; 运行样品-自动进样; 运行样品-手动进样; 关机。,按照标准开机操作; Method/Load Method; Method/Edit Entire Method; 可以分别开启或同时开启; 在流动相容量中输入实际值; 点击Change,选择显示信号; 等待绿色状态灯亮; 在Runcontrol/SampleInfo中指定 自动进样点击Start; 手动将进样阀由Load旋至Inlet; 按照标准关机操作。,31,调用方法,在Method中点击Load Method工作站弹出下面对话框.,在右面对话框中选中要调用的方法名,点击“OK”,该方法即被
13、激活.,32,使用 Edit Entire Method 编辑一个完整的方法,编辑一个新方法,33,选择所要编辑的内容,画面1:方法组成,在你想要的部分前选中,否则方法里将不包括该部分的内容。比如本方法不包括数据分析的内容。,方法信息,仪器控制与数据采集,数据分析,运行时间表,34,方法信息 (Method Information),画面2:方法信息,输入您想要对方法的说明,比如方法的用途、来源等信息。,35,包括:流量(Flow),流动相组成(Solvents),停止采集时间(Stop Time),梯度编程(Timetable),压力限制设定(Pressure Limits),泵的操作参数,
14、压力限制:Max最高压力,Min最低压力,流动相梯度表,输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),输入流动相组成,B、C、D可输,A=100-B-C-D,输入流动相名称,画面3:泵参数(四元泵),36,典型的流速,设置柱子流速时,要注意观察系统压力,一般来说在满足分析的前提下使系统维持比较低的压力对仪器是非常有好处的。,37,泵的参数设置,画面3:泵参数(单元泵),输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),压力限制:Max最高压力,Min最低压力,输入流动相名称,泵流量编程,单击“OK”确认,38,泵的参数设置,画面3:泵参数(二元泵),压力限制:Max
15、最高压力,Min最低压力,输入流动相名称,输入流量(Flow),输入停止采集时间(Stop Time),流动相梯度表,输入流动相组成,B可输,A=100-B,39,与检测器的控制类似,检测器: 灯开/关 (钨灯/氘灯) 自动开灯 模拟信号输出范围,泵的控制,40,Instrument More Pump Auxiliary.,泵的辅助功能,从泵的辅助功能可以设置最大升流速率,冲程大小,压缩因子补偿。,最大梯度流量,最小冲程,压缩因子,主通道选择,41,进样体积 0.1 - 100 ul标准进样 最大 1500ul 使用多次进样装置 最大900 ul 进样,不使用多次进样装置,但需要扩展进样装置
16、 (G1363A),自动进样器参数,设置参数包括:进样体积(Injection),取样速度(Draw Speed),注射样品速度(Eject Speed),取样位置(Draw position),停止采集时间(Stop time)。,画面4:自动进样器参数,输入进样体积,42,5 个信号可以选择 信号波长范围 191 - 949 nm 可变狭缝: 1, 2, 4, 8, 16 nm 可以时间编程,检测器参数设置,画面5:检测器参数DAD,选择存储数据的通道,设置吸收波长、带宽;,设置吸收波长、带宽;,光谱选项:Store选“none”不保存光谱图,选“all”全存;Range为扫描范围;Ste
17、p为扫描步长。,设置狭缝宽度;,基线自动回零,Prerun为进样前回零,Postrun为进样后回零。,43,检测器参数设置,画面5:检测器参数VWD,输入使用的波长,44,检测器参数设置,画面5:检测器参数FLD,输入发射波长,输入激发波长,波长编程表,45,控温范围:低于室温1080 两个单独的加热区。 安装切换阀可以进行柱切换。 可以容纳30 cm长色谱柱。 安装柱识别可以自动记录进样次数。,柱温箱,画面6:恒温柱箱参数设置,输入控制温度,温度编程表,46,选择在方法中要执行的项目,运行时间表(Run Time Checklist),画面6:运行时间表设置,47,从Method菜单选择Sa
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