DB33 T 2030-2017 人间充质干细胞库建设与管理规范.pdf

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1、ICS 07.080 C 04 DB33 浙江省 地方标准 DB33/T 2030 2017 人间充质干细胞库建设与管理规范 Construction and management standard of human mesenchymal stem cell bank 2017 - 05 - 10 发布 2017 - 06 - 10 实施 浙江省质量技术监督局 发布 DB33/T 2030 2017 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语与定义 . 1 4 生命伦理 . 4 5 人间充质干细胞库建设 . 5 6 机构设置 . 6 7 操作规范 .

2、 7 8 干细胞库管理 . 13 附录 A（资料性附录） 供者健康调查和采集登记表 . 20 附录 B（资料性附录） 人间充质干细胞库整体操作流程 . 21 DB33/T 2030 2017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由 浙江省卫生和计划生育委员会 提出并归口。 本标准起草单位：杭州易文赛生物技术有限公司、浙江省易文赛细胞药物和制品研究院。 本标准主要起草人：吴晓星、潘若浪、董伟仁 、杜小春 、李亚洲、 江彩慧、杜雯林、 陈茜 。 DB33/T 2030 2017 1 人间充质干细胞库建设与管理规范 1 范围 本标准规定了人间充质干细胞库、胎

3、盘组织造血干细胞库的建设、操作规范和质量管理的基本方法。 本标准适用于人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库建设与管理。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2894 安全标志及其使用导则 GB 3095 环境空气质量标准 GB/T 5458 液氮生物容器 GB 7000.2 应急照明灯具 安全要求 GB/T 12905 条码术语 GB 13690 化学品分类和危险性公示通则 GB 15258 化学品安全标签编写规定 GB/T 17172 417

4、 条码 GB/T 18347 128 条码 GB/T 18883 室内空气质量标准 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB 19652 放电灯（荧光灯除外）安全要求 GB/T 20269 信息安全技术信息系统安全管理要求 GB/T 22278 良好实验室规范原则 GB 50016 建筑设计防火规范 GB 50034 建筑照明设计标准 GB 50052 供配电系统设计规范 GB 50140 建筑灭火器配置设计规范 GB 50346 实验室建筑技术规范 GB 50351 储罐区防火堤设计规范 GB 50591 洁净室施工及验收规范 AQ 3013 危险化学品从业单位安全标准化通用规范 危险

5、化学品安全管理条例 （国务院令第 591 号） 药品生产质量管理规范 （卫生部令第 79 号） WHO Third Edition 实验室生物安全手册 3 术语与定义 DB33/T 2030 2017 2 下列术语与定义适用于本标准 3.1 人间充质干细胞库 human mesenchymal stem cell bank 用于储存人间充质干细胞及胎盘组织造血干细胞的专门机构。 3.2 样本 specimen 在特定时间从受试者或捐献者处获得的器官、组织、月经血等标本。 3.3 样本接收室 sample reception room 样本到达时用于初步检查、清点接收、核对信息、贴签分类 或样本

6、预处理前的区域。 3.4 干细胞制备室 stem cell preparation room 用于从样本中提取、分离和培养干细胞的专门区域。 3.5 配液室 medium preparation room 用于配置在细胞采集、分离、制备与储存等全过程中所 需相关试剂的专门区域。 3.6 检验 室 test room 用于检验干细胞形态、微生物、内毒素、活性、分子标志物等干细胞质量与特性的专门区域。 3.7 干细胞存储室 stem cell storage room 为干细胞提供符合低温保存条件的专门区域。 3.8 样本编码 sample coding 根据编码规则对样本进行编号的过程。 3.9

7、 干细胞质量控制 stem cell quality control 为达到干细胞入库质量要求所采取的技术操作过程和相关行为活动。 3.10 DB33/T 2030 2017 3 干细胞分离 cell isolation 从机体器官或组织 中分离出干细胞的过程。 3.11 干细胞制备 stem cell preparation 干细胞样本经过一系列规范处理达到入库标准的过程。 3.12 原代培养 primary culture 直接从机体取下器官、组织或细胞后立即进行的培养过程。 3.13 传代 培养 subculture 当原代培养成功后，将细胞重新接种到新的培养器皿的培养基中进行的培养过程

8、。 3.14 干细胞冻存 stem cell cryopreservation 使干细胞暂时脱离生长状态而低温保存其细胞生物特性的方法。 3.15 干细胞复苏 stem cell thawing 使干细胞从脱离生长状态重新获得生长活力的方法。 3.16 液氮箱 liquid nitrogen container 用于储存细胞的一种深低温冷冻设备。 3.17 冻存管 tube 在细胞冻存过程中用于储存细胞的无菌小管。 3.18 压力容器 pressure vessels 指盛装气体或液体，承载一定压力的密闭设备。 3.19 生物危险 biohazard 因生物因子导致的直接或潜在的危险。 DB3

9、3/T 2030 2017 4 3.20 实验室生物安全 laboratorial biosafety 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，避免实验室人员、来访人员、 社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。 3.21 化学安全 chemical safety 使用化学品时遵守一定的规范并有相应的紧急预案应对事故，防止危险化学品事故的发生并将事故的影响或损失降至最低。 3.22 知情同意 informed consent 具有完全民事行为能力的自然人，在充分获取信息和理解其内容后作出的自愿参与研究的决定，并签署书面知情同意书的过程。 3.23 生命伦

10、理 bioethics 生命科学和卫生保健领域人行为的道德规范和原则。 3.24 伦理审查委员会 ethical review committee 负责对科学研究中涉及的伦理道德问题，供者权益问题进行评估和审查的专门组织。 3.25 科学审查委员会 scientific review committee 负责对生物样本采集、干细胞制备、保存、运输与使用等方案进行科学性审查的专门组织。 3.26 生物安全委员会 institutional biosafety committee 负责指导、评估、监督细胞库的生物安全相关事宜的专门组织。 4 生命伦理 4.1 签署知情同意 人间充质干细胞库的工作人

11、员应当对风险及收益进行有效评估，确保样本提供者或其近亲属对 项目信息在当时科学技术条件下充分知情、形成全面和准确的认识，自愿做出是否同意采集样本的决定，并签署知情同意书。 DB33/T 2030 2017 5 4.2 隐私保护措施 研究人员、医务人员、管理人员应当对样本提供者的个人信息采取保密措施，防止有意或意外泄露，若确需提供信息，需要经有关申请程序并提交伦理委员会批准同意后方可实施。 4.3 提供安全保护 研究人员或相关医务人员在获取样本的过程中尽可能控制风险，保护供者及样本安全。 5 人间充质干细胞库建设 5.1 场地要求 5.1.1 建设场地应选择周围环境较好的工业区域或其他区域，空气

12、质量标准应符合 GB 3095 标准分级二级标准。 5.1.2 场 地不应建设在将要拆迁的建筑，易发生自然灾害（地震、洪水、海啸等）的地区，以及市政规划不明确区域。 5.2 建设要求 5.2.1 人间充质干细胞库功能区建设与设计应与 GB 19489、 GB 50346、 GB 50591 规定相符 5.2.2 干细胞库功能区应包括业务区与办公区。业务区包括：样本接收室、干细胞制备室、配液室、检验室、干细胞存储室、更衣室、缓冲室、物料存储室、医疗垃圾存放室和消毒清洗室等，每个区域应标识洁净和风险级别。办公区包括办公室、会议室、档案室和监控室等。 5.2.3 人间充质干细胞库洁净区、非 洁净区完

13、全分开 。 办公区域的通风系统应与实验 区域的通风系统独立分开，以确保 两个 区域的空气质量互不影响 。不同洁净度等级房间之间应设有防污染措施，如缓冲间、气闸室和传递窗等。 5.2.4 人流通道和物流通道独立设置，避免混杂和交叉污染。 5.2.5 物料及废弃物应设专用传递窗，传递窗应具备消毒灭菌功能。 5.2.6 办公区域与实验区域应进行物理隔离，工作人员由专用通道进入实验区。 5.2.7 洁净室内的密闭门应朝空气洁净度较高的房间开启并加设闭门器，无窗洁净室的密闭门上宜设观察窗。不同等级的洁净室以及洁净区与非洁净区之间的压差，应不小于 5Pa，洁净区与室外的压差，应不小于 10Pa。 5.2.

14、8 人干细胞库建设用材 料应防渗漏、防火、耐腐蚀 、防水和不起尘等，易于清洁和消毒灭菌。 5.2.9 人干细胞库内所有窗户应为密闭窗，玻璃耐撞击、防破碎。 5.2.10 洁净室内不宜安装水池和地漏。 5.3 设施与设备 5.3.1 消防设施 人干细胞库消防系统设计应符合 GB 50016要求。洁净区技术夹层、非洁净区宜安装火灾自动烟感报DB33/T 2030 2017 6 警装置、消防疏散警示标识、紧急逃生通道和安全出口（全封闭的玻璃门，并备有 安全锤 ），安全出口设计应能够使仪器设备进出。 5.3.2 通风及空调设施 通风系统应符合 GB/T 18883的规定，气流由 “ 清洁 ” 空间向

15、“ 污染 ” 空间流动，最大限度减少室内回流与涡流。实验室 空调系统应符合 GB 19489的规定，有足够的温度和湿度控制。 100级， 10000级区域一般控制温度为 20 24，相对湿度为 45% 60%， 100000级区域一般控制温度为 18 28，相对湿度为 50% 65%。 5.3.3 监控系统 应满足实时监控、记录和存储有控制要求的参数、关键设施设备的运行状态，包括液氮系统、冰箱等冷链系统以及细胞培养设备、电力系统等；应能监控、记录和存储故障的现象、发生时间和持续时间；应可以随时查看记录。 5.3.4 门禁系统 人干细胞库入口应设置门禁，保证授权后双人双锁进入干细胞储存库。 5.

16、3.5 照明系 统 人干细胞库的照明系统设计应符合 GB 50034、 GB 19652、 GB 7000.2要求。核心功能区的照度应不低于 350 lx，其他区域的照度应不低于 200 lx，宜采用吸顶式防水洁净照明灯，应避免过强的光线和光反射。 5.3.6 电力供应系统 人干细胞库供电系统设计应符合 GB 50052的规定。程控降温设备、低温冷冻设备、生物安全柜、送风机和排风机、照明、自控系统、监视和报警系统等，即断电直接影响干细胞质量的设备应配备不间断备用电源，电力供应应至少维持 30min。 5.3.7 报警系统 应能对人干细胞库安全故障进行报警，报警 应区分一般报警和紧急报警，且报警

17、信号能够实时传送至责任人。 6 机构设置 6.1 伦理审查委员会 6.1.1 人间充质干细胞库应设有伦理审查委员会。伦理 审查委员会由伦理学、医学、生物学、法学等专家以及无利害关系的社区代表人员组成。 6.1.2 伦理审查委员会对人间充质干细胞库相关伦理问题进行审查和评价。伦理审查委员会负责建立干细胞库的伦理准则和相应的操作规范，并在科学的前提下对样本相关研究项目或其他使用方案进行伦理审查，对已通过审查的项目或正在进行的项目进行伦理监督与审查，以保护样本提供者的权益和安全。 6.2 科学审查委员会 DB33/T 2030 2017 7 6.2.1 人间充质干细胞库应设有 科学审查委员会。科学审

18、查委员会由生物学、医学、药学等领域专家组成。 6.2.2 科学审查委员会应负责对样本采集、干细胞制备、保存、运输与使用等方案进行科学性审查。 6.3 生物安全委员会 6.3.1 人间充质干细胞库应设有生物安全委员会。生物安全委员会由生物学、医学、技术人员、实验室质量管理人员等各方面的专家和工作人员组成。 6.3.2 生物安全评审委员会负责对干细胞库的生物安全制度、安全操作规范进行审查 。 7 操作规范 7.1 总则 人组织样本采集、运输、接收、分离、培养、冻存和复苏等涉及干细胞操作所有过程应制定相应标准和管理规范，符合 GB/T 22278要求 ，并严格按照标准和规范执行。干细胞样本采集由专业

19、的医护人员完成，样本制备由经过专业培训的人员完成。 7.2 样本采集场所 7.2.1 人组织样本的采集场所一般为洁净手术室，无菌采集。 7.2.2 人月经血样本和乳牙样本的采集场所无洁净级别要求，但需保持个人基本卫生。 7.2.3 新生儿脐带、胎盘、骨髓样本的采集场所应达到级洁净手术室要求。 7.2.4 脂肪组织样本的采集场所需达到级洁净手术室要求。 7.3 样本采集方法 7.3.1 新生儿脐带来源间充质干细胞 7.3.1.1 胎儿分娩后，在距胎儿脐部 5cm 至 8cm 处，用止血钳分别夹住脐带上下两端，消毒剂消毒脐带。 7.3.1.2 用消毒剪刀于两钳中间断脐，截取 至少 15cm 无针孔的脐带置于无菌采集瓶中，同时 加入保存液以浸没脐带组织。贴条形码作为唯一标识。 7.3.1.3 脐带的两端需要用手术线结扎。 7.3.2 新生儿胎盘来源间充质干细胞或造血干细胞 7.3.2.1 胎儿娩出后，待胎盘与母体完全分离，用生理盐水充分清洗胎盘，再用 75%医用酒精快速冲洗表面。 7.3.2.2 迅速将胎盘放入胎盘采集盒，再加入保存液予以全部浸没。 7.3.2.3 采集盒密闭包装，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.3 人脂肪来源间充质干细胞